目的观察Pin1在小鼠植入前胚中的定位分布及其抑制剂胡桃醌(Juglone)对小鼠植入前胚体外发育的影响。方法免疫荧光染色观察不同发育阶段植入前胚中Pin1的分布;收集小鼠1-细胞胚,以KSOM培养液为对照组,以培养液中添加有不同浓度的Juglone为实验组,观察各组1-细胞胚体外发育情况;Real-time PCR检测体外发育2-细胞胚内干细胞转录因子(Sox2、Oct4、c-Myc和Klf4)m RNA表达水平。结果小鼠不同发育阶段植入前胚中都存在Pin1的表达,胞质和胞核内均有分布,且核内荧光着色明显比胞质强;10μmol/L和25μmol/L胡桃醌持续作用93h(注射人绒毛膜促性腺激素后27h^120h)使1-细胞胚阻滞于2-细胞阶段,极少能过渡至4-细胞胚(P<0.01)。25μmol/L胡桃醌短时间作用18h(注射人绒毛膜促性腺激素后27~45h)同样使1-细胞胚发育阻滞于2-细胞胚(P<0.01);25μmol/L胡桃醌组2-细胞胚内Sox2 m RNA表达水平低于KSOM组(P<0.05),而Klf4、cMyc和Oct4 m RNA表达水平无明显变化(P>0.05)。结论小鼠1-细胞胚之后,Pin1主要定位在细胞核内,提示其可能参与细胞转录活动。且Pin1抑制剂(胡桃醌)能使2-细胞胚至4-细胞胚过渡率明显降低,并使干细胞转录因子Sox2 m RNA表达下调,提示Pin1在小鼠植入前胚早期发育阶段具有一定作用,其参与调控合子基因组激活与干细胞转录因子Sox2有关。
