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hPer_1bHLH-PAS结构域酵母双杂交系统的构建被引量：1: 2004年; 目的构建hPer1bHLH PAS结构域的酵母双杂交系统 ,以寻找与hPer1相互作用的新蛋白。方法构建pGBKT7 hPer1bHLH PAS重组诱饵质粒及 pGADT7 Rec 脑cDNA文库质粒 ;将两种质粒顺序转染至酵母细胞AH1 0 9中 ,进行营养缺陷筛选阳性克隆株。结果经酶切和基因测序鉴定 ,证实重组诱饵质粒 pGBKT7 hPer1bHLH PAS构建成功。脑cDNA文库转化效率为 1 .2× 1 0 6/3μgpGADT7 Rec。结论　酵母双杂交文库筛选得到 2 4个阳性克隆。这为寻找脑组织中与hPer1相互作用的未知蛋白奠定了基础。; 李英明汪宇辉胡丽娟刘延友王跃王正荣; 关键词：基因重组 PER1 CDNA文库酵母双杂交

DNA疫苗引发局部肌肉组织DCs、CD4^+T细胞的聚集浸润被引量：2: 2005年; 目的观察在注射DNA疫苗后的不同时间段内,肌肉注射部位细胞的聚集情况,并对细胞表型进行检测,为阐述DNA疫苗激活机体免疫反应机制提供直接的组织学证据。方法分别于DNA注射小鼠后6h、12h、1d、2d、3d、4d、5d、6d切取注射部位肌肉组织,HE染色观察细胞聚集情况;LSAB法检测聚集细胞CD205、CD4及CD8分子的表达。结果疫苗注射后6h～6d,在肌肉组织间隙中发现有不同程度的细胞浸润,早期主要以巨噬细胞样细胞和淋巴细胞为主,晚期巨噬细胞样细胞占优势。在疫苗注射后24h的肌肉组织中有少量的CD205阳性细胞,第3d时数量稍多,其余时间段CD205染色均为阴性。对浸润的淋巴细胞的亚型进行鉴定发现,在6h～6d的肌肉切片中只检测到CD4+T细胞,未发现CD8+T细胞的细胞。结论DNA疫苗免疫注射引发的细胞浸润与一般的炎症反应不同,有其特有的特征。DCs、CD4+T细胞参与DNA免疫并可能起着重要的作用;DNA免疫激活的CTL发挥免疫效应可能不在肌肉组织。; 邓小玲王霞魏大鹏张平蔡美英毕建红胡丽娟; 关键词：DNA疫苗树突状细胞 CD4^+T细胞细胞浸润

重复性经颅磁刺激对吗啡依赖小鼠学习记忆的影响被引量：1: 2011年; 研究1 Hz rTMS对吗啡依赖小鼠学习记忆的影响,初步探讨1 Hz rTMS治疗吗啡依赖的机制.40只ICR小鼠随机分为正常对照组、1 Hz对照组、吗啡依赖组和1Hz治疗组.建立吗啡依赖CPP模型后,采用1 Hz rTMS对1Hz治疗组进行治疗.治疗后采用Morris水迷宫实验,检测小鼠学习记忆能力的改变.结果显示,与吗啡依赖组相比,1 Hz治疗组的潜伏期显著增加(P<0.05);但穿越平台次数、平台所在象限停留时间、平台所在象限游泳距离和平台所在象限游泳距离与总游泳距离比率均无显著改变(P>0.05).结果表明:1 Hz rTMS显著减弱了小鼠的空间学习能力,但对小鼠的空间记忆能力无显著影响.; 廖小丽胡丽娟杨波周禹希王正荣; 关键词：吗啡依赖 MORRIS水迷宫实验

抗人核内不均一核糖核蛋白A2/B1抗体可变区基因克隆、串联和表达被引量：2: 2004年; 目的克隆抗人核内不均一核糖核蛋白A2/B1(heterogeneousnuclearribonucleoproteinA2/B1,HnRNPA2/B1)单克隆抗体的重链可变区(variableregionofheavychain,VH)和轻链可变区(variableregionoflightchain,VL)基因,构建抗HnRNPA2/B1单链抗体(singlechainFv,ScFv)基因,并在大肠杆菌表达。方法采用斑点ELISA、Western印迹和免疫组化检测抗HnRNPA2/B1单克隆抗体3E8的特异性,并通过逆转录-聚合酶链反应、重叠延伸PCR来克隆、串联VH和VL基因,构建抗HnRNPA2/B1ScFv基因pET28(a+)表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳、竞争抑制ELISA检测表达产物。结果3E8抗体能特异性地与HnRNPA2/B1合成肽以及3株人肺癌细胞内HnRNPA2/B1结合;克隆的VH基因为345bp,VL基因为309bp,符合小鼠抗体可变区特性;抗HnRNPA2/B1ScFv蛋白以包涵体形式表达,分子量约28000,并具有与抗原结合活性。结论成功构建了抗HnRNPA2/B1ScFv基因克隆,并在大肠杆菌中获得了功能性表达,为阐明HnRNPA2/B1与肺癌相关性奠定了实验基础。; 王霞彭晓东黎光胡丽娟毕建虹; 关键词：HNRNPA2/B1 单克隆抗体可变区基因克隆特异性

抗β8整合素单克隆抗体在推断小鼠死亡时间中的初步应用: 2012年; 用抗β8整合素单克隆抗体,检测星形胶质细胞氧糖剥夺-复氧模型,小鼠死后不同时间肾和脑组织β8整合素表达、定位的变化,绘制光密度平均值-死亡时间曲线,初步推断小鼠个体死亡时间.结果显示缺氧环境中,星形胶质细胞、肾小管上皮细胞和脑胶质细胞β8整合素表达量升高.细胞形态的变化以脑胶质细胞最为明显,β8整合素定位由细胞膜到细胞浆,最后随细胞膜破裂释放到细胞外基质.Image-Pro Plus分析显示,缺氧脑胶质细胞β8整合素表达量在48 h达最高值,绘制的光密度平均值-死亡时间曲线能初步推断小鼠个体死亡的时间.; 黎光张晨阳魏大鹏章崇杰刘彦军胡丽娟罗志娟; 关键词：单克隆抗体死亡时间 PLUS

节律蛋白mPERl在NIH3T3细胞增殖和迁移中的作用: 2007年; 目的研究PER 1蛋白对N IH 3T 3细胞增殖和迁移的影响。方法将重组表达质粒pcDNA 3.1/m PER 1转染入N IH 3T 3细胞中,并以未转染的N IH 3T 3细胞为对照,利用M TT法检测细胞增殖的改变。利用RT-PCR技术和W esternb lot检测节律蛋白m PER l对细胞迁移关键性蛋白基质金属蛋白酶2(MM P-2)表达的影响。结果M lTT法显示PER 1表达上调可以抑制N IH 3T 3细胞增殖,RT-PCR技术和W estern b lot检测显示在N IH 3T 3细胞中,当节律蛋白m PER 1表达上调时,细胞迁移关键性蛋白MM P-2在RNA和蛋白水平的表达较对照组降低。结论上调N IH 3T 3细胞内的PER 1蛋白表达能抑制细胞增殖以及细胞迁移的关键性MM P-2在RNA和蛋白水平的表达。; 汪宇辉刘延友江舟冀治鸿杨波胡丽娟鲁芳王正荣; 关键词：PERL MMP-2 细胞增殖细胞迁移

人AFP全长基因编码序列的克隆及表达被引量：1: 2004年; 目的　构建人 AFP全长基因编码序列的真核表达质粒 ,并在 CHO及小鼠肌肉组织中表达。方法　从人胎肝组织中提取 AFP基因 ,以全长基因序列为目的基因片段 ,真核表达质粒 pc DNA3.1(+)为载体 ,构建AFP重组质粒 ph AFP,经酶切分析和 DNA测序对 ph AFP进行鉴定。重组质粒 ph AFP经脂质体转染真核细胞CHO以及直接注射小鼠胫前肌 ,并采用免疫荧光染色及免疫组化对其表达产物进行检测。结果　获取的 AFP基因片段与 Gen Bank报道的序列一致 ,确认为人 AFP基因的全长编码序列 ,构建的重组质粒 ph AFP能在体外真核细胞 CHO、体内肌细胞中有效表达。结论　成功构建了能在真核细胞中表达的重组质粒 ph AFP,为 AFP; 邓小玲蔡美英魏大鹏胡丽娟毕建虹袁暾; 关键词：甲胎蛋白克隆真核表达

曲尼司特对CsA慢性肾毒性大鼠TGF-β/Smad通路的影响被引量：1: 2009年; 目的探讨不同剂量曲尼司特(TNL)对环孢素A(CsA)慢性肾毒性大鼠肾脏TGF-β/Smad通路的的影响。方法雄性SD大鼠34只,随机分成正常对照组、模型组、TNL低剂量治疗组、TNL中剂量治疗组、TNL高剂量治疗组、安博维治疗组。采用低盐饮食加CsA20mg/(kg·d)灌胃的方法建立环孢素A慢性肾毒性大鼠模型。用RT-PCR和免疫组织化学检测不同剂量TNL对大鼠肾脏TGF-β1、Smad3、Smad7的影响。结果TNL能下调CsA慢性肾毒性大鼠肾组织中TGF-β1、Smad3的mRNA水平及在肾脏的表达,上调Smad7的mRNA水平及在肾脏的表达。结论在CsA慢性肾毒性大鼠模型中,TNL可能通过调节TGF-β/Smad通路而发挥抗纤维化的作用,从而减缓CsA慢性肾毒性的进展。; 胡丽娟李莎莎陶冶刘其锋章崇杰吴欣李聃丹罗志娟; 关键词：曲尼司特环孢素A慢性肾毒性 SMAD3 SMAD7

重复性经颅磁刺激对吗啡依赖小鼠条件性位置偏爱表达的影响被引量：2: 2009年; 通过检测重复性经颅磁刺激(rTMS)对吗啡依赖小鼠条件性位置偏爱(CPP)表达的影响,探讨rTMS对吗啡依赖小鼠的治疗效应.结果显示rTMS治疗的前3d内,rTMS治疗组小鼠的CPP值显著低于CPP模型组(P<0.01),且维持在相对稳定的范围内.表明1HzrTMS能有效抑制吗啡依赖小鼠的CPP表达,可能成为戒毒治疗的新方法.; 杨波周禹希严伟彭静胡丽娟; 关键词：吗啡依赖小鼠条件性位置偏爱 MORPHINE CPP RTMS

稳定、高效表达肝细胞生长因子的中国仓鼠卵巢细胞系的构建: 2006年; 目的:构建hHGF-pCDNA3.1表达载体,在中国仓鼠卵巢细胞中获得具有生物学活性的重组人肝细胞生长因子蛋白的高效、稳定表达。方法:RT-PCR扩增人肝脏中hHGF全长cDNA片段,克隆入pCDNA3.1(+)真核表达载体中,构建hHGF-pCD-NA3.1重组质粒并转染中国仓鼠卵巢细胞,经筛选得到了高效、稳定表达hHGF的细胞克隆,采用RT-PCR和ELISA方法检测hHGF在中国仓鼠卵巢细胞中的表达。结果:酶切及测序结果表明重组质粒构建正确,RT-PCR显示细胞的rhHGF mRNA呈现高水平,ELISA检测hHGF在细胞中的分泌性表达,浓度达10ug/L。结论:成功地在中国仓鼠卵巢细胞中获得了hHGF蛋白的高效、稳定表达。为下一步将表达hHGF的细胞微囊化制备基因工程细胞,并移植用于相关疾病的基因治疗奠定了基础。; 鲁芳王晓佳刘彦友汪宇辉胡丽娟王正荣; 关键词：肝细胞生长因子中国仓鼠卵巢细胞转染基因表达

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胡丽娟

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