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王晓辉: 作品数：44 被引量：63H指数：4; 供职机构：中国人民解放军更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学石油与天然气工程更多>>

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高迁移率族蛋白B1与活化T细胞核因子2之间存在直接相互作用被引量：1: 2011年; 目的:探讨高迁移率蛋白1(high mobility protein box1,HMGB1)与活化T细胞核因子2(nuclearfactor of activating T cells2,NFAT2)之间的直接相互作用。方法:首先观察HMGB1与NFAT2在细胞外的相互作用,构建pET28a(+)-HMGB1、pGEX-KG-NFAT2质粒,应用网织红细胞系统进行体外翻译得到带有放射性硫同位素35S的His-HMGB1融合蛋白。应用蛋白纯化技术得到的GST-NFAT2融合蛋白,利用GST-pulldown实验检验二者在体外是否可直接结合;然后观察HMGB1与NFAT2在细胞内能否直接结合,构建HMGB1和NFAT2的真核表达质粒,共同转染人胚胎肾293T细胞系,刺激之后裂解细胞,应用相应的抗体进行免疫共沉淀检测,观察二者在细胞内直接结合的情况。结果:利用GST-pull down实验及免疫共沉淀实验证实,HMGB1全长蛋白与NFAT2全长蛋白在细胞内、外有直接结合的条带,而对照组没有结合条带,说明HMGB1可与NFAT2特异性结合。结论:HMGB1与NFAT2之间存在直接相互作用。; 刘辉姚咏明宋青丁丽华王晓辉袁斌叶棋浓盛志勇; 关键词：活化T细胞核因子蛋白纯化免疫共沉淀

新型雌激素受体β信号通路调节因子的分离及鉴定被引量：1: 2006年; 目的:利用酵母双杂交技术筛选与ERβ相互作用的蛋白,为进一步研究ERβ的功能奠定基础。方法:从乳腺cDNA文库中钓取ER-βAF1 cDNA,构建诱饵蛋白载体pAS2-1-ERβ-AF1,利用酵母双杂交筛选技术,在乳腺cDNA文库中筛选与ERβ-AF1相互作用的蛋白。将含有pACT2-候选基因的酵母菌与含有pAS2-1-ERβ-AF1的酵母菌进行交配实验,利用LacZ报告基因检测ERβ-AF1与候选蛋白之间是否存在相互作用。然后将ERβ-AF1和候选蛋白分别构建到pGEX-KG和pET-28 a上,并纯化GST-ERβ-AF1和H is-候选蛋白融合蛋白,利用GST沉淀实验进一步验证ERβ-AF1和候选蛋白的体外相互作用。结果:所获取的候选蛋白为CTGF,是CCN多肽家族成员。交配实验表明,CTGF与ERβ-AF1特异相互作用,而不与空载体或BRCT1对照相互作用。GST沉淀实验进一步验证,CTGF与ERβ、ERα均存在相互作用,但与CTGF同源性较高的NOV蛋白却不与ERβ、ERα结合。结论:CTGF和ERβ存在特异的相互作用。; 韩聚强焦园园丁丽华袁斌王晓辉张浩李杰之吕秋军叶棋浓; 关键词：相互作用

FHL2与IGFBP-7存在直接相互作用: 2005年; 目的:利用酵母双杂交技术筛选FHL2的相互作用蛋白,为进一步研究FHL2的功能奠定基础。方法:从卵巢文库中钓取FHL2cDNA,构建诱饵蛋白载体pAS2-1-FHL2,利用酵母双杂交筛选技术,在卵巢文库中筛选与FHL2相互作用的蛋白。将含有pACT2-候选基因的酵母菌与含有pAS2-1-FHL2的酵母菌进行交配实验,利用LacZ报告基因检测FHL2与候选蛋白之间是否存在相互作用。将FHL2和候选蛋白分别构建到pGEX-KG和pET-28a上,并纯化GST-FHL2和His-候选蛋白融合蛋白,利用GST沉淀实验进一步验证FHL2和候选蛋白的体外相互作用。结果:所获取的候选蛋白为IGFBP-7,是胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBPs)家族中的一员。交配实验表明,IGFBP-7与FHL2能特异性地相互作用,而不与空载体或BRCT1对照相互作用。GST沉淀实验进一步验证,IGFBP-7能与FHL2结合,而不与GST结合。结论:FHL2和IGFBP-7在体内及体外均可发生特异性的相互作用。; 丁丽华焦园园刘雨飞方言周蕾王晓辉黄翠芬叶棋浓; 关键词：FHL2 相互作用酵母双杂交

不同低氧浓度对人脐带间充质干细胞向神经细胞分化的影响被引量：4: 2019年; 目的探讨不同低氧浓度对人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)诱导分化成神经细胞的促进作用。方法hUCMSCs分为对照组(常氧浓度)和实验组(5%氧浓度组、10%氧浓度组)。MTT法检测细胞增殖;乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤;流式细胞仪检测细胞凋亡;WestonBlot检测细胞神经生长因子(NGF)、神经巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达。结果hUCMSCs细胞在缺氧条件下细胞增殖受到抑制,培养24h内实验组OD值显著低于对照组(P<0.05),随着培养时间的延长,实验组细胞增殖加快,到培养至96h时实验组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。在培养24、48h时,实验组hUCMSCs细胞LDH活性显著高于对照组(P<0.05);培养至72h后5%氧浓度组LDH活性显著高于对照组(P<0.05),10%氧浓度组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);培养至96h后各组hUCMSCs细胞LDH的活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。5%氧浓度组hUCMSCs细胞抗凋亡作用强于10%氧浓度组(P<0.05)。缺氧培养的hUCMSCs细胞更早出现神经元样形态学变化,且细胞中NGF、Nestin、NSE的表达水平高于对照组(P<0.05)。结论5%氧浓度缺氧培养的hUCMSCs细胞具有抗细胞凋亡作用,同时对成神经诱导分化具有促进作用。; 罗芸马俊钱前张富婷王晓辉; 关键词：低氧人脐带间充质干细胞细胞分化神经细胞

pax2启动子的克隆及其在人胚胎肾293T细胞中的转录活性被引量：2: 2007年; 目的:克隆paired box2(pax2)基因的启动子,插入荧光素酶报告基因载体中,并检测其活性。方法:采用PCR技术从人乳腺癌细胞系MCF-7基因组中扩增出pax2启动子,插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,确定所扩增的DNA序列。将重组的报告基因瞬时转染人胚胎肾293T细胞,检测pax2启动子活性。结果:测序结果显示扩增的pax2启动子序列正确;活性实验表明构建的报告基因具有启动子活性,雌激素受体α(ERα)能以剂量依赖的方式升高pax2报告基因的转录。结论:克隆了pax2启动子,为ERα共调节子的功能研究提供了重要基础。; 姜艳超丁丽华杨群辉胡建民曾敏杨智洪王晓辉李熔叶棋浓; 关键词：荧光素酶报告基因转录活性

洁净压缩空气输送管道的净化与检测: 2022年; 洁净空气对光学敏感元器件具有重要的保护作用,针对现有洁净空气在管道输送过程中存在污染的问题,本文介绍了洁净压缩空气输送管道的净化及检测方法,为进一步规范洁净气体输送管道的净化和检测提供重要支撑。; 董春宏郭云峰蔡政王晓辉

ER对雌激素共调节因子NFAT3的转录调节: ＜正＞目的:NFAT（Nuclear factor of activated T-cell）家族在人体生理和病理过程中发挥着重要的作用,但是对NFAT3的转录调节因子却知之甚少。通过本室前期的实验,我; 秦玺王晓辉杨智洪丁丽华徐小洁程龙牛畅孙慧伟张浩叶棋浓; 关键词：ER 相互作用磷酸化转录活性

半乳糖凝集素-1的融合克隆及纯化被引量：4: 2008年; 目的:表达和纯化半乳糖凝集素-1融合蛋白。方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增半乳糖凝集素-1编码序列,将其以正确相位与pGEX-KG载体中的GST编码序列融合,将重组质粒转化大肠杆菌DH5α后,用谷胱甘肽-Sepharose 4B纯化融合蛋白,并用Western印迹检测融合蛋白的表达。结果:构建得到半乳糖凝集素-1的融合蛋白表达载体;Western印迹检测表明,GST-半乳糖凝集素-1融合蛋白成功表达,并纯化得到融合蛋白。结论:克隆和表达了半乳糖凝集素-1基因,并得到纯化的融合蛋白。; 王晓辉张浩杨智洪叶棋浓; 关键词：克隆融合蛋白

雌激素信号通路调节蛋白的发现及其在肿瘤中的作用: 叶棋浓程龙徐小洁丁丽华蔺静袁斌牛畅王晓辉严景华张浩秦玺李杰萍杨智洪蒋凯熊志红; 肿瘤是威胁人类健康的重大疾病，雌激素信号通路的失调是导致乳腺癌、肝癌、肺癌等诸多恶性肿瘤发生发展的重要原因之一。雌激素通过结合雌激素受体（ER）发挥生理和病理功能。因此，阐明雌激素信号通路的调节机制，发现新的雌激素信号通...; 关键词：; 关键词：调节蛋白肿瘤治疗

肿瘤坏死因子受体相关因子家族成员间相互作用的初步研究被引量：1: 2011年; 目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAFs)各成员间的相互作用及各成员间的关系。方法利用PCR技术扩增出TRAFs;构建到pDBLeu、pPC86载体上,分别形成诱饵、猎物质粒;转化,扩增酵母菌;将诱饵、猎物菌液结合酵母双杂交阵列组合(Mating)技术筛选相互作用。最后用免疫共沉淀技术进行验证。结果成功构建TRAFs的酵母双杂交载体,酵母双杂交Mating技术筛选出11对相互作用,免疫共沉淀技术验证出,TRAF1和TRAF2、TRAF6有相互作用。结论 TRAFs各成员间存在着相互联系;TRAF1通过和TRAF6的相互作用可能直接影响TRAF6介导的通路。; 周扬帆王晓辉唐刘君李长燕王敏杨晓扬杨晓明汪思应; 关键词：相互作用

王晓辉

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