- 芍药苷对α-突触核蛋白降解通路的影响被引量：7
- 2015年
- 目的:探讨芍药苷对α-突触核蛋白的降解途径-自噬和泛素-蛋白酶体通路的影响。方法:PC12细胞用或不用MPP+(0.5 mmol/L)处理24 h,然后用芍药苷(50μmol/L)或雷帕霉素(0.2μg/m L)处理24h,MTT法检测细胞增殖活性,Western印迹检测α-突触核蛋白、微管相关蛋白轻链3(LC3-Ⅱ)和E1的蛋白质表达水平,共聚焦显微镜观察α-突触核蛋白和LC3-Ⅱ在细胞内的荧光强度及共定位情况。结果:(1)与MPP+组相比,雷帕霉素和芍药苷处理后细胞过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活力均显著下降(P<0.001),细胞形态恢复正常;(2)MPP+处理导致LC3-Ⅱ和E1表达水平升高,雷帕霉素处理后LC3-Ⅱ增高而E1水平下降,芍药苷处理既显著上调LC3-Ⅱ(自噬)也上调了E1的表达(泛素-蛋白酶体途径)(P<0.001),促进了α-突触核蛋白的降解;(3)MPP+增强细胞内α-突触核蛋白和LC3-Ⅱ的荧光强度,芍药苷处理后α-突触核蛋白的荧光强度下降。结论:本研究结果表明芍药苷同时显著上调自噬和泛素蛋白酶体途径,促进了α-突触核蛋白的降解,减少细胞损伤。
- 张永进王敏徐晶张謦芝李秀明蔡增林
- 关键词：芍药苷Α-突触核蛋白泛素-蛋白酶体通路自噬
- siRNA干扰SIAH对细胞活性和α-synuclein泛素化降解通路的影响
- 2015年
- 目的:研究si RNA干扰SIAH基因对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞α-synuclein泛素化、降解通路的影响。方法:用荧光标记的si RNA-FAM转染SH-SY5Y细胞后,专业设计合成3条针对SIAH的si RNA,Western Blot检测蛋白水平SIAH表达的变化,筛选出其中最高效的1条si RNA,用CCK-8法检测该si RNASIAH干扰SH-SY5Y细胞活性;流式细胞技术检测该si RNA-SIAH干扰SH-SY5Y细胞凋亡的影响;Western Blot检测α-synuclein、LC3、E1、P53蛋白水平表达的变化;q RT-PCR检测SIAH、α-synuclein、LC3、E1 m RNA水平表达的变化;免疫共聚焦分别检测SIAH、α-synuclein、LC3共定位情况。结果:3条si RNA均成功转染SH-SY5Y细胞,流式细胞术检测si RNA转染SH-SY5Y细胞转染率89%,Western结果显示其中si RNA-2#使细胞中SIAH蛋白表达明显降低,选取该序列进行研究。CCK-8法结果显示该si RNA干扰SIAH后对SH-SY5Y细胞活增高,流式细胞技术检测结果显示该si RNA干扰SIAH可抑制SH-SY5Y细胞的凋亡,与空白对照组、阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。通过Western Blot检测si RNA-2#组的α-synuclein、LC3、P53蛋白水平,与空白对照组、阴性对照组比较均明显降低,E1蛋白水平增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。通过q RT-PCR检测si RNA-2#组的SIAH、α-synuclein、LC3-Ⅱm RNA水平与空白对照组、阴性对照组比较均明显降低,而E1的m RNA水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:应用si RNA干扰SIAH基因,通过促进泛素-蛋白酶体系统作用减少SH-SY5Y中α-synuclein聚集,SIAH基因有可能成为帕金森病治疗中的一个新靶点。
- 徐晶张馨芝张永进李秀明王敏蔡增林李小民
- 关键词：E3泛素连接酶Α-SYNUCLEIN
