李淑萍
- 作品数：25 被引量：73H指数：6
- 供职机构：第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省教育厅科研计划中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人TLR4及MD2基因反义真核表达载体的构建被引量：2
- 2004年
- 目的 构建人TLR4及MD2基因反义真核表达载体 ,为研究其在肺炎症反应中的作用奠定基础。方法 通过PCR技术扩增出TLR4及MD2基因片段 ,然后分别反向插入真核表达载体pEFBOS的多克隆位点 ,最后对产生的重组子进行酶切和测序鉴定。结果 扩增出的TLR4目的片段为 2 6kb ,MD2为 0 5kb ,并成功地连接到pEFBOS载体上 ,DNA测序结果也显示插入片段为目的片段。
- 李永旺李淑萍钱桂生张德明麻莉
- 关键词：TOLL样受体4反义基因
- 吸入激素联合茶碱与吸入双倍剂量激素治疗哮喘的比较被引量：11
- 2004年
- 目的 比较吸入激素 (ICS)联合缓释茶碱 (SRT)和双倍剂量ICS对中重度哮喘患者的疗效及抗炎作用。方法 4 1例中重度哮喘患者随机分成 2组 :A组 2 1例 ,予必可酮 (BDP) 5 0 0 μg ,2次 /d ;B组 2 0例 ,予BDP 2 5 0 μg ,2次 /d ,SRT 0 2g ,2次 /d。疗程均为 6周。于治疗前、后诱导痰 ,行痰细胞分类计数 ,并测定白细胞介素 5 (IL 5 )。比较治疗前、后的症状评分。结果 治疗后两组患者痰嗜酸性粒细胞比例、IL 5水平和症状评分均较治疗前显著降低 (P <0 0 5 )。两组比较无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 ICS联合SRT和双倍剂量ICS对治疗中重度哮喘的疗效和抗气道炎症作用相当。
- 王彦王长征林科雄钱桂生王金平赵志强江汉李淑萍
- 关键词：哮喘吸入激素茶碱抗炎作用用药剂量
- 大鼠肺动脉平滑肌细胞缺氧后STAT3活性变化与细胞增殖关系的研究被引量：2
- 2006年
- 目的:探讨信号转导及转录活化因子3(STAT3)对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响及作用机制。方法:组织块法原代培养PASMCs,用AG490预孵育后进行缺氧处理,半定量RT-PCR,Western blot法分别检测缺氧2h、6h、12h、16h、24h组STAT3酪氨酸活性水平变化;半定量RT-PCR检测缺氧条件下上述时相点c-myc mRNA水平变化;3H-TdR掺入法观察缺氧条件下细胞增殖变化。结果:Western blot定量分析显示缺氧培养6h组STAT3酪氨酸磷酸化水平升高,12h组达高峰,16h略有下降;缺氧培养2h组c-myc mRNA表达升高,4h达高峰,6h下降,12h恢复至正常水平;3H-TdR掺入法结果显示缺氧6h组细胞3H-TdR掺入量的增加,并随缺氧时间延长变化更为显著。AG490抑制缺氧诱导STAT3酪氨酸磷酸化及c-myc mRNA表达。结论:①STAT3活化和c-myc表达参与缺氧PASMCs增殖;②在缺氧PASMCs增殖过程中STAT3上调c-myc表达。
- 白莉余祖滨钱桂生李淑萍
- 关键词：缺氧肺动脉平滑肌细胞
- CC16基因G38A突变与汉族哮喘相关性的研究被引量：9
- 2003年
- 目的 检测中国重庆汉族人群 CC16基因第 1外显子突变在支气管哮喘和正常人群中的频率 ,探讨该基因的多态性和哮喘的相关性。方法 应用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性技术对 5 0例支气管哮喘患者 CC16第 1外显子基因频率和等位基因频率进行检测并与 5 0例正常人进行对照。结果CC16基因第 1外显子 G38A的基因型和等位基因型频率在哮喘组和对照组差异无显著性 ,并且该基因的基因型频率和等位基因型频率与哮喘病情的严重程度也无相关性。 结论 中国重庆汉族人群中 CC16第 1外显子 G38A的突变与哮喘无相关性。
- 桂芹钱桂生黄桂君李淑萍
- 关键词：基因突变汉族哮喘
- 葆乐辉对慢性阻塞性肺疾病患者的平喘作用及安全评价
- 2000年
- 李淑萍陈维中李羲钱桂生
- 关键词：慢性阻塞性肺疾病药物疗法葆乐辉平喘作用
- 单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因转染人肺腺癌细胞A549的体内外实验研究
- 2000年
- 何祥梁郭先健钱桂生黄桂君陈维中李淑萍
- 关键词：肺腺癌细胞A549HSV-TK基因基因转染
- 对脂多糖结合蛋白致炎的多肽序列分析
- 2004年
- 目的 应用噬菌体随机 1 2肽库探讨脂多糖结合蛋白 (LBP)致炎作用的多肽序列。方法 以LPS为目标分子 ,对噬菌体 1 2肽库进行亲合筛选 ,4轮筛选后 ,检测随机挑取的噬菌体克隆的结合活性和抑制活性 ,将得到的 1 6个可与LBP竞争性结合LPS的噬菌体克隆进行生物学功能检测 ,对获得的 9个阳性克隆进行测序 ,并与LBP序列比较。结果 9个阳性克隆展示多肽的核心序列为WKXRKXFXKXXG ,与LBP的 91～ 1 0 2位氨基酸序列有较高同源性。结论 LBP的 91～ 1 0 2位氨基酸可能为其致炎作用部位。
- 徐德斌钱桂生侯一峰赵哓利陈维中李淑萍
- 关键词：噬菌体随机肽库脂多糖结合蛋白多肽
- SOCS3基因转染对低氧条件下大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响被引量：1
- 2004年
- 目的 探讨SOCS3基因对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PASMCs)增殖的影响。方法 以脂质体为载体将pEFSOCS3和pSV2neo共转染至体外培养的PASMCs ,应用RT PCR和免疫细胞化学法测定转染前后细胞中SOCS3mRNA和蛋白表达。低氧处理PASMCs ,采用Westernblot法检测转染前后常氧 (N)、低氧 6h(H6)、低氧 12h(H12 )PASMCs中STAT3蛋白酪氨酸磷酸化水平变化 ;流式细胞仪、3 H TdR掺入法检测转染前后各时相点细胞增殖情况。结果 RT PCR和免疫细胞化学证实转染后细胞中有SOCS3mRNA和蛋白稳定表达 ;与同时相对照组 (包括未转染组和转染空载体组 )相比 ,SOCS3基因转染组细胞中STAT3蛋白酪氨酸磷酸化水平显著下降 (P <0 0 1) ;流式细胞仪分析显示SOCS3基因转染组细胞各时相点G0 /G1期细胞比例显著增多 (P <0 0 1) ,S +G2 /M期细胞比例显著减少 (P <0 0 1) ;SOCS3基因转染组细胞在常氧和低氧条件下 3 H TdR掺入量显著低于同时相点对照组细胞 (P <0 0 1)。结论 SOCS3蛋白可能通过降低STAT3酪氨酸磷酸化水平抑制PASMCs增殖。
- 白莉余祖滨钱桂生李淑萍关崧
- 关键词：低氧信号传导肺动脉平滑肌细胞
- bcl-2对人小细胞肺癌细胞系H446/DDP多药耐药性的影响被引量：8
- 2006年
- 目的探讨bc l-2表达上调对人小细胞肺癌(SCLC)多药耐药的影响及相关机制。方法通过定向克隆方法,构建bc l-2正义RNA真核表达载体pLXSN-bc l-2;同时,体外合成bc l-2反义硫代磷酸寡核苷酸(AS-PS-ODNs),然后采用脂质体分别将其转染至人SCLC H446细胞及H446/DDP细胞,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和W estern b lot方法检测转染细胞中bc l-2 mRNA和蛋白的表达水平;流式细胞仪DNA倍性分析观察顺铂(DDP)诱导转染细胞凋亡情况。转染时细胞分3组,pLXSN-bc l-2转染组[或bc l-2 AS-PS-ODNs转染组(AS-PS-ODNs转染组)]、pLXSN转染组[或bc l-2无义硫代磷酸寡核苷酸转染组(NS-PS-ODNs转染组)]和对照组(H446细胞组、H446/DDP细胞组)。结果(1)W estern b lot检测结果表明,对照H446细胞组、pLXSN转染组、pLXSN-bc l-2转染组间Bc l-2蛋白表达水平差异有统计学意义(F=11 221,P<0.05)。转染pLXSN-bc l-2的H446细胞强表达Bc l-2蛋白(灰度值0.854±0.016),与对照H446细胞组(灰度值为0.103±0.005)相比差异有统计学意义(t=2.45,P<0.01);NS-PS-ODNs转染组的H446/DDP细胞,AS-PS-ODNs转染组的H446/DDP细胞,对照H446/DDP细胞组间Bc l-2蛋白表达水平差异有统计学意义(F=11 028,P<0.01)。转染bc l-2AS-PS-ODNs的H446/DDP细胞表达Bc l-2蛋白水平(灰度值为0.695±0.014),与对照H446/DDP细胞组(灰度值为0.942±0.018)相比,显著下降(t=2.26,P<0.01),但仍高于亲代H446细胞Bc l-2表达水平(t=2.31,P<0.01)。(2)流式细胞仪DNA倍性分析结果显示,转染pLXSN-bc l-2的H446细胞,经5μg/m l DDP诱导后凋亡率为(20.9±0.2)%,明显低于对照H446细胞组的(31.1±0.21)%,差异有统计学意义(t=2.45,P<0.01);5μg/m l DDP诱导转染AS-PS-ODNs的H446/DDP细胞的凋亡率为(31.5±0.4)%,对照H446/DDP细胞组的凋亡率为(9.0±0.1)%,转染细胞的凋亡率显著增加(P<0.05)。结论靶向性抑制抗凋亡相关基因bc l-2的表达可能是克服SCLC化疗耐药的重要的基因治疗方法之一。
- 戢福云钱桂生钱频陈琰郭芮伶李淑萍黄桂君
- 关键词：药物耐药性药物基因,BCL-2
- 钠-氢交换蛋白1反义表达载体对人肺腺癌细胞钠-氢交换蛋白1基因表达的影响及其意义被引量：2
- 2004年
- 目的 探讨Na+ /H+ 交换蛋白 1(NHE 1)反义表达载体 (pNHE 1)对人肺癌细胞NHE 1基因的抑制作用及生物学效应。方法 实验细胞分为 3组 ,A5 4 9 pNHE 1组 (反义组 )、A5 4 9空载体组(空载体组 )、A5 4 9对照组 (A5 4 9组 )。采用阳离子脂质体使pNHE 1转染人肺腺癌A5 4 9细胞株。采用半定量逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)法测定 3组细胞的NHE 1mRNA表达水平 ;用荧光法测定 3组细胞内pH(pHi)值 ;了解转染细胞增殖生长状况 ;用细胞凋亡原位检测法检测 3组细胞凋亡率。结果 在转染细胞基因组DNA中扩增出外源真核表达载体的DNA片段 ,证明转染成功。半定量RT PCR法证实反义组细胞的NHE 1mRNA表达水平 (0 4 2± 0 0 6 )显著低于A5 4 9组 (0 71± 0 0 8,P <0 0 1)和空载体组 (0 6 9± 0 16 ,P <0 0 1)。A5 4 9组细胞在培养 12、2 4和 4 8h后pHi值分别为 7 15 0±0 0 0 4、7 14 0± 0 0 0 7和 7 12 0± 0 0 0 8,反义组pHi值分别为 6 990± 0 0 0 5、6 84 0± 0 0 0 5和 6 75 0±0 0 0 5 ,两组差异均有极显著性 (P <0 0 1)。A5 4 9组、空载体组和反义组的细胞倍增时间分别为 3 2 0、3 2 8和 4 97d ,反义组细胞的增殖、生长明显慢于A5 4 9组及空载体组 (P <0 0 1)。反义组细胞凋亡率为 (2
- 吴国明钱桂生黄桂君李淑萍姚伟陆俊羽
- 关键词：反义表达载体肺腺癌细胞基因表达
