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刘戈
作品数:
7
被引量:8
H指数:2
供职机构:
南开大学生命科学学院分子生物学研究所
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发文基金:
国家自然科学基金
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相关领域:
生物学
医药卫生
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合作作者
赵西林
南开大学生命科学学院分子生物学...
陈德风
南开大学生命科学学院分子生物学...
陈雅文
南开大学生命科学学院分子生物学...
陈雄伟
南开大学生命科学学院分子生物学...
董元舒
南开大学生命科学学院分子生物学...
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1篇
1995
2篇
1994
1篇
1993
1篇
1900
共
7
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针对点突变癌基因转录物的核酶细胞内性质的研究
被引量:2
1996年
前文[1]已证实在体外(invitro)实验接近生理环境的条件下,本室设计、合成并克隆到的核酶能够高效选择性的定点切割T24-ras活化癌基因转录物。在此基础上,为阐明该核酶在体内(invivo)的生理活性,本文又进一步把核酶基因片段克隆在真核表达质粒pSMG上,并将重组质粒以磷酸钙沉淀法转染由T24-ras基因诱导的转化细胞系。在细胞和分子水平上检测了核酶在真核细胞内的生物学活性:表现为各恶性转化细胞系的形态特征逆转,生长速度减慢,并呈现出重叠生长减弱恢复接触抑制的趋势,细胞凝集行为接近正常、软琼脂集落形成能力下降;同时,引物延伸实验结果也表明:在体内实验条件下,核酶能够特异性切割点突变T24-ras癌基因转录物,抑制癌变细胞的恶性行为,使其得到一定程度的逆转。
刘戈
陈雅文
赵西林
董元舒
陈德风
关键词:
核酶
体内活性
癌基因
转录物
针对点突变基因的核酶设计与应用研究
赵西林
孙宝勇
陈德风
陈雄伟
陈雅文
李青
刘戈
董元
该成果利用部分双链直接连接法使模板磷酸化、模板与载体的连接、聚合、再连接等多步克隆步骤在同一体系、同一反应管内一步完成。并在核酶序列内部成功地引入了一个BglⅠ切点,不仅不影响核酶活性,而且有助于提高锤头结构的稳定性,特...
关键词:
关键词:
核酶
基因突变
生物活性
无性系
核糖核酸
杂交捕获抑制聚腺苷二磷酸核糖聚合酶基因的体外翻译
1995年
体外转录载体pSP72—C12和pSP72—C1.4分别经XbaⅠ和XhoⅠ酶切线性化后,用SP6RNA聚合酶与T7RNA聚合酶进行体外转录得到编码人聚腺苷二磷酸核糖聚合酶基因的mRNA全序列(3.7kb)及与其5’端编码区的起始密码子AUG上游区域互补的反义RNA片段(1.4kb)。等摩尔数的正、反义RNA通过酚相乳浊杂交技术进行分子杂交。在网织红细胞裂解物体外翻译系统中,正义RNA能正常地翻译出蛋白质;而反义RNA与正义RNA杂交可阻断翻译的进行。
刘戈
赵西林
陈雄伟
陈雅文
李青
陈德风
关键词:
体外转录
基因
应用核酶降解活化癌基因转录物的研究
陈德风
董元舒
赵西林
刘戈
史国利
该项目研究了能高效切割T<,24>-ras转录物而不损伤正常C-Ha-ras mRNA的核酶R<,8>在体外的最适反应条件,预测了生理环境中各种因素对R<,8>反应的影响,并检测了核酶在细胞内的生物学活性。为利用核酶R<...
关键词:
关键词:
核酶
基因疗法
真核表达载体pSMG的构建
1994年
本文介绍了一种新型真核表达载体的构建过程。原核质粒载体pSP72经亚克隆去除部分单酶切点后,在其上定向插入真核选择标记gpt基因片段,获得中间载体pSP72A-gpt。将来自表达载体pMAM-neo质粒上约2.4kb的真核表达启动、剪接与终止区(包括RSV和MMTV-LTR)克隆到pSP72A-gpt上,获得了一种新型真核表达载体pSMG(pSP72A-gpt-MMTV)。该载体在真核细胞中可受激素诱导而高效表达插入到其多克隆位点上的外源基因,并能与neo(G418)、DHFR、ADA等为选择标记的真核表达载体配合使用,将两种以上的外源基因导入同一真核细胞,为研究多基因间的相互作用提供了一种良好手段。
赵西林
刘戈
陈雅文
陈雄伟
孙丙刚
周伟
杨其伟
李青
陈德风
关键词:
质粒载体
细胞转染
基因表达
真核
针对T24-ras癌基因核酶的细胞内性质研究
刘戈
核酶设计、合成与克隆的一种新方法
被引量:7
1993年
介绍了一种设计、合成与克隆人造核酶的新方法.通过在“锤头结构”模型中非保守性区域引入 Bgl I 切点,不仅维持了核酶切割活性所必需的二级结构,而且为核酶克隆的鉴定提供了极为方便的手段.另外还通过在核酶模板两端引入限制性内切酶半切点,一步直接将核酶模板连接、聚合、克隆到体外转录载体上,大大简化了以往核酶克隆的繁琐操作,省时、省力,克隆效率也较高.
赵西林
陈雄伟
陈雅文
刘戈
孙宝勇
陈德风
关键词:
核酶
分子设计
克隆
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