赵西林
- 作品数：15 被引量：16H指数：2
- 供职机构：南开大学生命科学学院分子生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市21世纪青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 针对点突变基因的核酶设计与应用研究
- 赵西林孙宝勇陈德风陈雄伟陈雅文李青刘戈董元
- 该成果利用部分双链直接连接法使模板磷酸化、模板与载体的连接、聚合、再连接等多步克隆步骤在同一体系、同一反应管内一步完成。并在核酶序列内部成功地引入了一个ＢｇｌⅠ切点，不仅不影响核酶活性，而且有助于提高锤头结构的稳定性，特...
- 关键词：
- 关键词：核酶基因突变生物活性无性系核糖核酸
- 识别序列外DNA甲基化对限制性核酸内切酶PvuⅡ酶切活性影响的研究被引量：1
- 1996年
- 构建了重组质粒ｐＳＶ２ｇｐｔ－ＳＶ４０ｏｒｉ－ａｎｔｉｓｅｎｓｅ－ｒａｓ（简称Ｐ１），利用这一重组体进一步证实了识别序列外ＤＮＡ甲基化对限制性核酸内切酶ＰｖｕⅡ切割活性的抑制作用，并对这一抑制作用进行了定量研究。结果表明：邻近ＰｖｕⅡ识别位，点的ＤＮＡ甲基化可降低ＰｖｕⅡ对该位点酶切活性的７０％左右。
- 陈德风刘强赵西林董元舒李青
- 关键词：DNA甲基化核酸内切酶
- 全文增补中
- 反义bcr／ablRNA的体外转录和杂交被引量：2
- 1994年
- 为了转录出反义ｂｃｒ／ａｂｌＲＮＡ，我们用逆转录。聚合酶链反应技术将ｂｃｒ／ａｂｌ嵌合转录体接合区扩增，并反向插到ｐＧＥＭ－４Ｚ质粒ＳＰ６ＲＮＡ聚合酶转录起始点下游作为体外转录的模板。限制酶切分析和ＤＮＡ序列分析结果都证实插入片段序列与Ｋ５６２ｍＲＮＡ接合区完全一致。利用体外转录技术，我们成功地转录出跨ｂｃｒ／ａｂｌ接合区反义ＲＮＡ。体外杂交实验的结果表明，该反义ＲＮＡ具有杂交捕获ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ接合区的功能，可应用于选择性抑制含ｂｃｒ／ａｂｌ基因的白血病细胞。
- 靳卫东宋增璇赵西林陈德风柳柏林宋丹英李彬许静李克军蔡英林
- 关键词：反义RNA杂交转录
- 杂交捕获抑制聚腺苷二磷酸核糖聚合酶基因的体外翻译
- 1995年
- 体外转录载体ｐＳＰ７２—Ｃ１２和ｐＳＰ７２—Ｃ１．４分别经ＸｂａⅠ和ＸｈｏⅠ酶切线性化后，用ＳＰ６ＲＮＡ聚合酶与Ｔ７ＲＮＡ聚合酶进行体外转录得到编码人聚腺苷二磷酸核糖聚合酶基因的ｍＲＮＡ全序列（３．７ｋｂ）及与其５’端编码区的起始密码子ＡＵＧ上游区域互补的反义ＲＮＡ片段（１．４ｋｂ）。等摩尔数的正、反义ＲＮＡ通过酚相乳浊杂交技术进行分子杂交。在网织红细胞裂解物体外翻译系统中，正义ＲＮＡ能正常地翻译出蛋白质；而反义ＲＮＡ与正义ＲＮＡ杂交可阻断翻译的进行。
- 刘戈赵西林陈雄伟陈雅文李青陈德风
- 关键词：体外转录基因
- 针对点突变癌基因转录物的核酶细胞内性质的研究被引量：2
- 1996年
- 前文［１］已证实在体外（ｉｎｖｉｔｒｏ）实验接近生理环境的条件下，本室设计、合成并克隆到的核酶能够高效选择性的定点切割Ｔ２４－ｒａｓ活化癌基因转录物。在此基础上，为阐明该核酶在体内（ｉｎｖｉｖｏ）的生理活性，本文又进一步把核酶基因片段克隆在真核表达质粒ｐＳＭＧ上，并将重组质粒以磷酸钙沉淀法转染由Ｔ２４－ｒａｓ基因诱导的转化细胞系。在细胞和分子水平上检测了核酶在真核细胞内的生物学活性：表现为各恶性转化细胞系的形态特征逆转，生长速度减慢，并呈现出重叠生长减弱恢复接触抑制的趋势，细胞凝集行为接近正常、软琼脂集落形成能力下降；同时，引物延伸实验结果也表明：在体内实验条件下，核酶能够特异性切割点突变Ｔ２４－ｒａｓ癌基因转录物，抑制癌变细胞的恶性行为，使其得到一定程度的逆转。
- 刘戈陈雅文赵西林董元舒陈德风
- 关键词：核酶体内活性癌基因转录物
- 聚腺苷二磷酸核糖基化作用与真核生物的基因表达与调控
- 1991年
- 聚腺苷二磷酸核糖基化作用与许多重要生命活动相关,本文着重介绍其在基因表达与调控中可能发挥的作用。聚腺苷二磷酸核糖基化作用可能通过调节染色质结构与功能或通过对RNA聚合酶及HMG、A24蛋白等的修饰作用来调节转录活动,并对转录物的加工也有一定影响;此外,该作用还与某些激素诱导的特异性基因表达有关,并且可能参与了增强子序列对基因表达的调节过程。
- 陈德风赵西林
- 关键词：基因
- 特异切割点突变癌基因转录物的核酶设计与克隆被引量：1
- 1994年
- 按“锤头结构”模型设计、合成,并筛选到了针对活化癌基因T24-ras第十二位密码子G→T点突变的核酶克隆。在镁离子存在条件下,该核酶能选择定点切割T24-ras转录物而对正常C-Ha-ras转录物不起任何破坏作用;在接近生理环境及C-Ha-ras与T24-ras mRNA同时存在条件下,该核酶仍能有效选择性切割突变基因产物。这为利用核酶技术治疗因基因突变引起的机体病变提供了现实的可能性。
- 赵西林孙宝勇陈雄伟陈雅文陈德风陈文杰宋丹英宋增璇
- 关键词：核酶体外转录基因治疗癌基因
- 针对点突变癌基因T24－ras转录物的核酶性质研究
- 1996年
- 通过改变核酶体外反应的各种条件，对针对点突变癌基因Ｔ２４－ｒａｓ转录物的核酶Ｒ８的性质进行了系统研究，结果表明：Ｒ８切割底物反应的最适ｐＨ值约为８．２，最适温度为５０℃，反应必须有镁离子参加，生理环境中常见的阴离子对反应没有影响，一些变性剂能够促进反应的进行，Ｒ８切割底物的反应为二级反应。
- 董元舒赵西林孙宝勇陈德风
- 关键词：癌基因核酶点突变
- 应用核酶降解活化癌基因转录物的研究
- 陈德风董元舒赵西林刘戈史国利
- 该项目研究了能高效切割T<,24>-ras转录物而不损伤正常C-Ha-ras mRNA的核酶R<,8>在体外的最适反应条件，预测了生理环境中各种因素对R<,8>反应的影响，并检测了核酶在细胞内的生物学活性。为利用核酶R<...
- 关键词：
- 关键词：核酶基因疗法
- bcr/abl基因b3-a2型接合区cDNA的分离和序列分析被引量：1
- 1994年
- 利用分子生物学方法,我们将K562细胞林bcr/abl mRNA 0.3kb的接合区cDNA片段用聚合酶链反应扩增并插入到质粒pGEM-4-Z载体中。经限制酶切分析和荧光标记M13引物法DNA序列测定,证实重组质粒pB3A2中有0.3kb的插入片段与K562 mRNA接合区序列完全一致。我们分离到的接合区DNA可用于bcr/abl基因的检测及其反义核酸抑制的研究。
- 靳卫东宋增璇柳柏林宋丹英李彬李克军蔡英林赵西林
- 关键词：BCR/ABL基因
