刘慧娟
- 作品数：22 被引量：45H指数：4
- 供职机构：吉林大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划吉林省科技发展计划基金吉林省科技厅重大项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- O型口蹄疫病毒O／LZ株拯救被引量：1
- 2008年
- 以构建的口蹄疫病毒O/LZ株全长cDNA为模板,使用T7RNA聚合酶系统在体外进行转录,得到病毒RNA。用脂质体转染法将转录物RNA导入BHK细胞,可观察到典型的口蹄疫病毒致细胞病变效应。对收获的病毒分别用RT-PCR、免疫荧光以及免疫电子显微镜观察等方法进行鉴定,结果表明拯救到特定的口蹄疫病毒。同时用空斑试验法观察了拯救病毒及其母本毒株的生长特性,结果表明二者没有明显差异,这将为进一步探索猪口蹄疫病毒致病的分子机制及研制新型口蹄疫疫苗奠定良好的基础。
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- 关键词：口蹄疫病毒CDNARNA
- 口蹄疫病毒O/LZ株的分子特性分析被引量：3
- 2006年
- 采用RT-PCR方法对口蹄疫病毒O/LZ株基因组序列进行了分子克隆和序列测定。结果表明:获得的O/LZ株除poly(C)和poly(A)外基因组序列长8 104nt,其中包括1 042nt的5′非编码区和6 969nt的多聚蛋白编码区。将O/LZ株与其它参考毒株进行序列比较,结果显示O/LZ株与O/HNK/2002、O/ES/2001、O/CHP/TW/97等遗传关系最近,而与其它毒株遗传关系较远,属于O型口蹄疫Cathay拓扑型。与ME-SA拓扑型PanAsia株的毒株比较,两者在主要抗原位点1和位点3呈现出明显的以拓扑型为特征的氨基酸差别,提示两拓扑型毒株之间有较高的抗原差异。
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- 关键词：基因组分子生物学特性
- 共表达O型口蹄疫病毒P1-2A基因和猪白细胞介素18的重组鸡痘病毒的构建被引量：4
- 2006年
- 目的:为获得能有效预防O型口蹄疫病毒的重组鸡痘病毒活载体疫苗奠定基础。方法:在O型口蹄疫病毒P1-2A基因上游引入Kozak序列,下游通过Linker与细胞因子IL-18联接,获得P1-2A基因与猪IL-18基因融合表达基因盒P1-2A-IL-18,将该表达基因盒克隆至鸡痘病毒中间转移载体pUTAL-3C中,构建重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-3C-P1-2A-IL-18。通过脂质体转染法,将pUTAL-3C-P1-2A-IL-18与鸡痘病毒282E4株共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过BrdU三次加压筛选,挑选出单克隆重组病毒株。结果:经RT-PCR和间接免疫荧光法鉴定,证明所筛选的1株重组鸡痘病毒在CEF中能正确表达P1-2A-IL-18基因盒。结论:成功获得了一株共表达O型口蹄疫病毒P1-2A基因和猪白细胞介素18基因的重组鸡痘毒疫苗候选株rFPV-3C-P1-2A-IL-18。
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- 关键词：口蹄疫病毒IL-18基因
- O型口蹄疫病毒O/LZ株拯救
- 本研究以本室构建的 O 型口蹄疫病毒 O/LZ 株全长 cDNA 为模板,使用 T7RNA 聚合酶系统在体外进行转录,得到病毒 RNA.用脂质体转染法将转录物 RNA 导入 BHK 细胞,可观察到典型的口蹄疫病毒致细胞病...
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- 文献传递
- 口蹄疫病毒基因工程疫苗的构建及实验免疫研究
- 本研究通过RT-PCR的方法获得了本室保存的O/LZ株FMDV的结构蛋白P1基因序列。并运用计算机技术和分子生物学软件,分别对FMDV结构蛋白的二级结构和B细胞抗原表位进行了预测和分析,为开发FMD新型疫苗提供了分子生物...
- 刘慧娟
- 关键词：口蹄疫病毒重组鸡痘病毒免疫应答
- 文献传递
- 口蹄疫重组鸡痘病毒活载体疫苗在豚鼠、猪体内的毒性、分布及抗体消长规律被引量：6
- 2007年
- 利用临床观察、病理解剖、PCR、RT-PCR、ELISA、中和抗体检测等方法,对口蹄疫(FMD)重组鸡痘病毒(FPV)在豚鼠、仔猪体内的毒性、分布以及抗体消长规律进行研究。结果表明,FMD重组鸡痘病毒免疫的动物在整个试验期间,未表现出明显的临床症状和不良反应;病理组织切片检测无明显的组织学变化;PCR、RT-PCR检测证明,豚鼠、猪免疫FMD重组鸡痘病毒后,在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、脑、肠系膜淋巴结内检测到FPVDNA和FMDV DNA,且在大部分组织能存在3 d左右;FMD重组鸡痘病毒均可诱导免疫动物产生较高水平的抗FMDV特异性抗体和中和抗体,验证了所构建重组FPV的生物安全性及良好的免疫原性,为其他哺乳动物实验提供了必要的基础数据。
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- 关键词：毒性
- 可溶性人源含硒单链抗体酶的制备方法
- 本发明的可溶性人源含硒单链抗体酶的制备方法属于生物技术领域。以谷胱甘肽衍生物为靶抗原，通过免疫亲和筛选法对重组噬菌体展示人单链抗体库进行筛选，得到单链抗体B3和D8。将单链抗体基因组装到分泌型原核或真核表达载体上，转化大...
- 魏景艳徐俊杰霍锐李杰帅刘慧娟罗际巡罗贵民阎岗林李唯
- 文献传递
- 口蹄疫重组鸡痘病毒vUTAL3CP1在猪体内的病毒、病毒核酸、病毒蛋白分布
- 重组鸡痘病毒vUTAL3CP1是本实验室所构建的,表达FMDV衣壳蛋白前体P1-2A和蛋白酶3C基因的活载体疫苗。本实验以vUTAL3CP1为研究对象,通过临床观察、病理组织学检测、病毒培养等方法检测在猪体内毒性,病毒存...
- 金明兰金宁一鲁会军马鸣潇郑敏刘慧娟霍晓伟李旭计越
- 关键词：重组鸡痘病毒病毒核酸病毒蛋白口蹄疫生物安全性
- 文献传递
- O型口蹄疫病毒O/LZ株基因组全长cDNA的构建被引量：1
- 2006年
- 目的构建O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)O/LZ株基因组全长cDNA。方法根据FMDV基因组和克隆载体的限制性内切酶酶切位点,将FMDV基因组设计为4段,进行反转录和扩增(RT-PCR),得到的片段分别克隆到质粒pMD18T-vetcor,筛选阳性重组质粒,测序正确的重组质粒(pMD18-S、pMD18-I、pMD18-P1和pMD18-P2)保存备用。然后对S区、I区和P2片段重新设计引物,其中S区的上游引物引入T7启动子序列;I区上游引物引入6个C,下游引物带有FMDV基因组中唯一酶切位点NruⅠ;用于3′端扩增的下游引物引入16个T,并以pMD18-S和pMD18-I为模板,对S区和I区进行融合PCR获得IS,以pMD18-P2为模板对P2片段进行2次PCR,获的带16个T的P3片段。将扩增片段克隆到pMD18T-vetcor,在pBuescriptⅡSK(-)中进行长片段的连接,获得基因组全长cDNA克隆。结果获得O型FMDV O/LZ株全基因组,并在此基础上构建了O/LZ株FMDV全长cDNA。结论成功构建了O型FMDV O/LZ基因组全长cDNA克隆,为进一步获得具有感染性的FMDV分子克隆,并研究该病毒基因组结构和功能奠定了基础。
- 马鸣潇金宁一刘慧娟沈国顺金明兰郑敏鲁会军贾雷力金扩世
- 关键词：口蹄疫病毒CDNART-PCR基因组
- 共表达O型口蹄疫病毒3C、P1-2A基因和猪白细胞介素18基因的重组鸡痘病毒免疫原性研究被引量：1
- 2007年
- 目的:对筛选到的一株共表达O型口蹄疫病毒3C基因、P1-2A基因和猪白细胞介素18基因的重组鸡痘病毒rFPV-3C-P1-2A-IL-18进行免疫原性研究。方法:分别用重组鸡痘病毒rFPV-3C-P1-2A-IL-18、rFPV-P1-2A-3C和对照组282E4株FPV、PBS对小鼠进行免疫接种,并检测各免疫组的T淋巴细胞亚类数量、CTL杀伤活性及抗体效价。结果:重组鸡痘病毒疫苗组免疫小鼠T淋巴细胞亚类数量,CTL杀伤活性和抗体效价均显著高于对照组,且重组鸡痘病毒rFPV-3C-P1-2A-IL-18的小鼠T淋巴细胞亚类数量和CTL特异性杀伤活性与rFPV-P1-2A-3C相比,差异显著。结论:为开发新型FMDV疫苗奠定了实验免疫基础。
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- 关键词：口蹄疫病毒重组鸡痘病毒免疫原性
