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刘存霞: 作品数：36 被引量：47H指数：4; 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学化学工程更多>>

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新型双基因表达盒真核载体的构建及功能验证被引量：1: 2011年; 目的:构建含双基因表达盒的新型基因疫苗真核表达载体pVAX2,并对其功能进行验证。方法:设计一个包含人巨细胞病毒启动子(CMVpromoter)、T7启动子、信号肽基因、血凝素A表位基因(HA)、多克隆位点区域(MCS)、c-myc抗原表位、血小板来源的生长因子受体跨膜区域(PDGFR TM)及牛生长激素多腺苷酸化信号(BGHpolyA)等八种元素的表达盒Ⅱ(Expressing cassetteⅡ),在其上下游添加NruⅠ酶切位点后,进行人工化学合成,连接到克隆载体pGH中得pGH-Ⅱ;用NruⅠ酶切pGH-Ⅱ,回收1 300bp左右的片段,去磷后插入到pVAX1的相应位点,NruⅠ及BglⅡ/PstⅠ酶切鉴定,获得新型基因疫苗真核表达载体pVAX2;然后以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,将其分别构建至两个不同的表达盒内,脂质体转染BHK-21细胞,利用RT-PCR及荧光显微镜技术进行该载体的功能验证。结果:两个表达盒内的EGFP基因在BHK-21细胞均能高效表达,相互间不受影响,且新构建的表达盒具有蛋白展示功能。结论:成功构建含双基因表达盒的新型基因疫苗真核表达载体pVAX2,为多价DNA疫苗的研究奠定了坚实基础。; 杜寿文李昌王宇航任大勇刘存霞孙丹丹朱娜李沂秦艳青金宁一; 关键词：EGFP

新型双标记筛选痘苗病毒载体的构建及应用: 李昌杜寿文刘存霞李沂王茂鹏金宁一; 文献传递

H5-H7双价禽流感核酸疫苗免疫研究被引量：4: 2011年; 由于禽流感的高度变异性,免疫后不同亚型之间难以得到交叉保护,以致病毒得以逃避宿主免疫系统的监视,多价核酸禽流感疫苗具有可以保护不同亚型病毒攻击的特点。本试验设计并构建了包含禽流感H5HA和H7HA1基因的双价真核表达质粒pV-H5-H7及单独表达H5HA和H7HA1的pV-H5和pV-H7HA1。通过RT-PCR,间接免疫荧光（IFA）等方法验证构建质粒的正确性和其表达蛋白的免疫原性。0,21 d分别免疫6~8周龄的BALB/c小鼠,设立双价疫苗组,单表达免疫组和对照组。免疫后35 d用HPAIV H5N1进行致死性攻击。结果显示免疫组均可刺激机体产生H5特异性抗体,pV-H5-H7诱导产生的抗体对H5N1的攻毒保护率为80%,而pV-H5单表达的攻毒保护率也为80%。表明本实验构建的双价禽流感核酸疫苗的免疫效果与单表达组相当（P〉0.05）,为多价禽流感核酸疫苗的研制提供了基础。; 张丹鲁会军谭磊刘存霞胡博刘燕瑜刘昊金扩世金宁一; 关键词：禽流感核酸疫苗

IFITM2的克隆表达及其抗病毒作用初探: 2013年; 目的:构建含有ifitm2基因的重组质粒,在人胚肾HEK293T细胞中表达,并验证IFITM2蛋白的抗病毒作用。方法:参照Genbank ifitm2基因序列,设计上下游引物,通过RT-PCR技术扩增ifitm2基因,并将扩增产物连接至pMD18-T-sim-ple载体上,目的基因测序正确后进一步亚克隆至真核表达载体pVAX1上,转染HEK293T细胞,通过RT-PCR,蛋白免疫印迹(Western blot)和激光共聚集显微镜(LCSM)验证外源基因在细胞内的表达情况。同时HEK293T细胞过表达IFITM2蛋白,利用含有EGFP基因的VSV-G假膜病毒感染细胞,通过Western blot检测IFITM2蛋白对病毒的抑制作用。结果:成功获得ifitm2基因,测序正确,将其连接到pVAX1载体中,经酶切鉴定,证明含有ifitm2基因的重组质粒构建成功,Western blot和LCSM分析表明,目的基因能够在HEK293T细胞中表达,且呈广泛分布。过表达IFITM2蛋白后,荧光蛋白分析表明,该蛋白对病毒感染具有一定的抑制作用。结论:成功构建了含有ifitm2基因的重组真核表达质粒,该质粒可以在真核细胞中得到有效表达,且对VSV-G假膜病毒具有一定抑制作用,该研究为进一步探讨IFITM2蛋白的抗病毒作用及其分子机制提供了实验及理论基础。; 李沂李昌杜寿文王茂鹏朱羿龙刘存霞秦艳青金宁一; 关键词：克隆表达抗病毒作用

Quil A与PICKCa的免疫调节作用研究被引量：1: 2011年; 为了探讨Quil A、PICKCa及二者联合使用对实验动物的免疫调节作用,试验分别给小鼠和猪注射Quil A、PICKCa及两者混合物,于注射后不同时间采血,检测细胞因子水平;注射后第7天检测猪T淋巴细胞的体外增殖反应。结果表明:小鼠和猪在注射药物之后均未出现任何不良反应;试验组动物的细胞因子水平均显著高于对照组;猪T淋巴细胞体外增殖能力也显著高于对照组。说明Quil A、PICKCa对小鼠和猪具有良好的免疫调节作用。; 刘燕瑜任静强刘存霞靖杰鲁会军金扩世金宁一; 关键词：佐剂免疫细胞因子淋巴细胞增殖

新型痘苗病毒穿梭载体的构建及评价: 杜寿文李昌王宇航刘存霞任大勇李沂秦艳青张轩源金宁一

QuilA为佐剂的H1、H3亚型流感病毒多表位DNA疫苗免疫评价被引量：4: 2013年; 目的选用Quil A为佐剂的H1、H3亚型流感病毒多表位DNA疫苗免疫小鼠,评价免疫效果。方法将pVAX1-H3-EHA-H1HA1new,pVAX1-H3-H1HA new,pVAX1-EHA等3种候选核酸疫苗免疫BALB/c小鼠,进行细胞免疫和体液免疫水平检测。结果体液免疫检测显示,免疫后35d,pVAX1-H3HA-EHA-H1HA1new免疫组小鼠产生H1亚型流感病毒特异性体液免疫应答,且抗体水平略高于其他免疫组。细胞免疫检测显示,当受到H1亚型流感病毒抗原刺激时,各免疫组T淋巴细胞均表现出特异性增殖反应和CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞增多,各免疫组小鼠血清IL-2、IL-4、IL-10及脾脏淋巴细胞IFN-γ水平显著高于对照组(P<0.05)。结论以Quil A为佐剂的H1、H3亚型流感多表位疫苗可诱导免疫小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答。; 靖杰鲁会军刘昊刘存霞刘燕瑜任静强陆飞金宁一; 关键词：流感病毒 DNA疫苗免疫

不同日龄SPF鸡接种传染性法氏囊病病毒的免疫反应研究被引量：6: 2010年; 为探讨鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)对不同日龄鸡的免疫病理、免疫反应和法氏囊、脾、胸腺占体重比,将其分别接种15日龄和30日龄无特殊病原体(SPF)鸡,通过临床观察、PCR、ELISPOT,进行法氏囊病理损伤、IFN-γ表达水平、抗体消长规律,法氏囊、脾及胸腺占体重比研究。另外,将其分别接种15日龄鸡胚和1日龄SPF鸡,检测致病力。在接种3 d、5 d后,SPF鸡的法氏囊、盲肠淋巴结和脾脏均出现不同程度损伤,检测到病毒的目的基因,IFN-γ表达差异显著;在接种后7～28 d检测到特异性抗体、中和抗体,各组抗体水平差异不显著;在接种后22 d,胸腺、法氏囊与体重之比最高,之后开始下降;在56 d内,脾脏和体重比逐渐升高。结果表明不同日龄的鸡在接种后3 d、5 d,法氏囊、脾、盲肠淋巴结等组织IFN-γ表达水平差异十分显著,鸡胚接种病毒引起的损伤比雏鸡接种损伤更严重,为后期评价免疫水平和疫病诊断提供了参考数据。; 金明兰朱占波刘存霞韩松金宁一; 关键词：鸡传染性法氏囊病病毒免疫发病机制免疫器官

Asia 1 FMDV重组鸡痘病毒在豚鼠体内免疫原性和体内分布被引量：1: 2018年; 为检测Asia1口蹄疫（Foot and mouth disease，FMD）重组病毒免疫原性和安全性，将构建表达Asia1型口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus，FMDV）3C基因、P1—2A基因和猪白细胞介素18（Interleukin 18，IL-18）基因的重组鸡痘病毒rFPV-P1—2A-3C和rFPV-3C—P1—2A-IL-18间隔2周免疫豚鼠3次，进行特异性抗体、中和抗体、淋巴细胞增殖、淋巴细胞亚类数量、IFN—γ、攻毒保护以及体内分布研究。重组鸡痘病毒可有效刺激豚鼠产生特异性抗体、中和抗体、T淋巴细胞亚类数量、IFN-γ分泌均显著高于对照组；重组鸡疽病毒rFPV-3C-P1—2A—IL-18的T淋巴细胞亚类数量、T淋巴细胞转化和IFN-γ分泌高于重组病毒rFPV-P1—2A-3C免疫组；2个重组病毒的攻毒保护率分别为4／5、3／5。2个重组病毒在接种最早12h可检测到重组病毒的基因，最晚7d可检测到重组病毒的基因。结果表明重组鸡痘病毒rFPV—P1—2A-3C和rFPV-3C-P1—2A—IL-18具有良好的免疫原性，可以有效抵御病毒的攻击，体内残留时间短，对免疫动物安全，为开发、应用新型FMDV疫苗奠定了基础。; 金明兰霍晓伟鲁会军朱战波刘存霞南文龙马鸣潇金宁一; 关键词：免疫原性攻毒保护

新型三基因表达盒痘苗病毒转移载体的构建及评价: 引言/目的痘苗病毒天坛株自身具有广阔的克隆空间、广泛的宿主和细胞范围、可形成稳定的重组体等作为载体的优越性,还具有相对毒力较弱、比较安全等特点,因此广泛用于生物医药研究与开发。本研究本着提升临床应用安全性、外源基因高效表...; 杜寿文李昌王宇航刘存霞任大勇孙丹丹朱娜李沂秦艳青金宁一; 文献传递

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