刘大志
- 作品数：13 被引量：27H指数：3
- 供职机构：广州军区广州总医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 抗重组人骨唾液酸蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：6
- 2006年
- 目的研制重组人骨唾液酸蛋白(rhBSP)单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法以纯化的rhBSP免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗rhBSP mAb;用亚型鉴定试剂条鉴定IgG亚类;ELISA鉴定mAb的特异性和效价。结果获得2株能稳定分泌特异性mAb的抗rhBSP的杂交瘤细胞系AHB1和AHB5,Ig亚类分别为IgG2a和IgG1,轻链均为κ型,其效价分别为1×10-3和1×10-7。腹水mAb经Protein A亲和色谱柱纯化后,纯度达92%以上。结论获得抗rhBSP的mAb,为进一步研究BSP的生物学功能和用于临床诊断实验研究创造了条件。
- 王捷刘增田杨太成杨静冼江刘大志
- 关键词：单克隆抗体
- hBSP稳定转染乳腺癌细胞的筛选和鉴定
- 2007年
- 目的筛选和鉴定人骨唾液蛋白(BSP)的荧光蛋白非融合表达载体和膜靶向表达载体稳定转染的乳腺癌细胞,为BSP在乳腺癌骨转移中作用的进一步体内、外研究奠定基础。方法经过4周400μg/mlG418的抗性筛选结合流式细胞仪荧光分选系统获得稳定转染乳腺癌细胞。采用RT-PCR、ELISA以及Western-blotting等方法检测和鉴定BSP在乳腺癌细胞中基因水平和蛋白水平的表达情况。结果筛选获得的乳腺癌细胞中BSP得到稳定表达,以β-肌动蛋白为内参,与空白对照相比BSP蛋白在基因水平上灰度比值从0.446分别增加为0.993和0.942;同时ELISA和Western-bolt实验结果证明BSP蛋白分泌表达和细胞内表达的量也均有所提高。结论稳定高表达BSP的乳腺癌细胞的获得为进一步BSP在乳腺癌骨转移中的作用的体内外试验研究奠定基础。
- 杜红延王捷郑霖杨静刘大志
- 关键词：骨唾液蛋白稳定转染乳腺癌细胞
- 乳腺癌化疗药物的体外敏感性与临床病理的关系被引量：1
- 2008年
- 目的探讨肿瘤组织对化疗药物的体外敏感性与乳腺癌患者年龄、病理分型、分级及淋巴结转移情况的关系。方法收集60例手术切除新鲜乳腺癌标本或活检标本，采用组织培养-终点染色-计算机图像分析（TECIA）法，检测癌组织对7种常用抗癌药物5-氟尿嘧啶（5-Fu）、顺铂（DDP）、长春瑞滨（NVB）、紫杉醇（TAX）、多西紫杉醇（TAT）、多柔比星（ADM）、表柔比星（EADM）的敏感性。结果60例乳腺癌标本中有31．67％的标本对所有7种被测化疗药物均不敏感。在所有病例中，对特定药物的敏感率由高到低依次为EADM（60．00％，36／60）、NVB（53．33％，32／60）、DDP／TAT（36．61％，22／60）、TAX（30．00％，18／60）、5-Fu（26．67％，16／60）、ADM（16．67％，10／60）。浸润性乳腺癌比非浸润性的敏感率高（74．47％比46．15％，P〈0．05），Ⅲ级比Ⅰ、Ⅱ级敏感率高（90．91％比54．55％，90．91％比55．56％，P均〈0．01）。不同年龄的3个组之间、有和无淋巴结转移两组之间差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论乳腺癌组织可能对EADM、NVB、TAT敏感率较高，TECIA法对个体化化疗具有重要参考价值。
- 夏冰陈晓东刘大志魏春华周霞王捷
- 关键词：乳腺肿瘤体外研究
- 预存式自体输血在小型猪外科手术中的应用
- 目的探讨预存式自体输血对外科手术后小型猪存活率的影响.方法随机对67只不同外科手术实验用小型猪分成对照组与实验组,实验组即预存式自体输血组35例,均在手术前5天按体重的0.8﹪采血保存,术中回输,检测采血前后部分血常规值...
- 肖育华詹纯列刘大志李新春
- 关键词：预存式自体输血存活率
- 文献传递
- 骨唾液蛋白(BSP)高稳定表达对乳腺癌骨转移的促进作用被引量：14
- 2007年
- 目的了解乳腺癌细胞中骨唾液蛋白(BSP)高稳定表达对其骨转移的影响,为乳腺癌骨转移的预防和治疗寻找新的药物靶点。方法通过鸡胚尿囊绒膜实验和骨条黏附实验确定BSP的高稳定表达对乳腺癌细胞血管侵袭能力及骨条黏附能力的影响。将乳腺癌细胞种植于鸡胚尿囊膜的上部空腔,经过孵育收集下囊腔血管组织,PCR检测人特异的Alu基因,以了解乳腺癌细胞的血管侵袭能力;将乳腺癌细胞与经胶原酶和胰蛋白酶消化的骨条共同孵育,胰酶消化收集乳腺癌细胞,通过染色测定OD_(488)值来确定乳腺癌细胞对骨条的黏附。结果空白对照组和未经转染的乳腺癌细胞组各5个鸡胚中均没有扩增出人的Alu基因,BSP高稳定表达的乳腺癌细胞MDA-MB-231BO(pI)和MDA-MB-231BO(piE))各5个鸡胚中分别有4个和3个扩增出人Alu基因;乳腺癌细胞MDA-MB-231BO(pI)和MDA-MB-231BO(pID)的骨条黏附实验测得的488nm处的吸光度值分别为0.580±0.046和0.490±0.039,明显高于未经转染的乳腺癌细胞组(0.260±0.021,P<0.05)和空白对照组(0.034±0.003,P<0.01)。结论BSP的高稳定表达增加了乳腺癌细胞的血管侵袭能力,提高了乳腺癌细胞的骨条黏附能力,可能对乳腺癌的骨转移有一定促进作用。
- 杜红延王捷杨静郑霖刘大志
- 关键词：唾液糖蛋白类肿瘤转移
- 骨唾液酸蛋白单克隆抗体的性质鉴定
- 2009年
- 制备重组人骨唾液酸蛋白(rhBSP)单克隆抗体(mAb)并对其性质进行鉴定。采用杂交瘤技术制备mAb,并测定亚型、效价、亲和常数、抗原表位,同时应用竞争抑制ELISA法分析其特异性。结果:得到2株杂交瘤阳性细胞株AHB2和AHB6,亚型为IgM和IgG1,轻链均为κ型;AHB2和AHB6的效价分别为10-4,10-6,亲和常数分别约为3·01×108M-1,2·94×1010M-1。检测发现,AHB2和AHB6均与大鼠血清有弱阳性反应。通过竞争抑制ELISA法分析得出AHB2和AHB6两株抗体针对BSP的相同抗原表位。采用Envision法进行BSP免疫组化的检测研究。成功制备了rhBSP的特异性mAb,为进一步研究BSP的生物学功能和临床诊断实验研究打下基础。
- 彭如意王捷刘增田刘大志夏冰詹纯列张宏斌
- 关键词：骨唾液酸蛋白单克隆抗体抗原表位
- 肺癌的体外化疗药物敏感性及其与临床病理的关系
- 目的:探讨肺癌组织对临床常用化疗药物的体外敏感性及其与临床病理的关系,如年龄、组织学类型、病理分级、以及局部淋巴结转移状态。方法:62例手术切除或活检的肺癌组织标本,采用组织块培养—终点染色-计算机辅助分析方法(TECI...
- 夏冰王捷魏春华周霞刘大志
- 关键词：抗癌药肺癌体外药敏实验
- 文献传递
- 肺癌的体外化疗药物敏感性及其与临床病理的关系
- 2008年
- 目的探讨肺癌对临床常用化疗药物的体外敏感性及其与临床病理的关系。方法62例手术切除或活检的肺癌组织标本,采用组织块培养-终点染色-计算机辅助分析方法(TECIA),得出该例肿瘤组织对11种常用抗癌药物的敏感性,药物包括紫杉醇(TAX)、依托泊苷(VP-16)、长春瑞滨(NVB)、卡铂(CDP)、顺铂(DDP)、多西他赛(TAT)、表柔比星(EADM)、吉西他滨(GEM)、丝裂霉素(MMC)、奥沙利铂(L-OHP)和伊立替康(CPT-11)。结果受检肺癌标本对11种药物敏感率顺序由高到低依次为TAX45.2%(28/62)、VP-16/NVB/CBP32.3%(20/62)、DDP/TAT/EADM25.8%(16/62)、GEM/MMC/L-OHP19.4(12/62)、CPT-1112.9%(8/62)。不同患者的肺癌组织对化疗药物具有不同的敏感谱。40～60岁组比>60岁组对化疗药物的体外敏感率高(68.42%vs41.67%,P<0.05)。腺癌组比细支气管肺泡癌组的敏感率高(72.73%vs42.86%,P<0.05)。结论肺癌组织对抗癌药的体外敏感性存在明显的个体性差异,至少与患者年龄以及肿瘤的病理类型有关。
- 夏冰陈晓东刘大志魏春华周霞王捷
- 关键词：抗癌药肺肿瘤体外药敏实验
- 人骨唾液蛋白膜靶向表达载体的构建及在乳腺癌细胞中的表达被引量：2
- 2006年
- 目的构建人骨唾液蛋白(BSP)膜靶向表达载体,并转染人乳腺癌细胞,筛选获得稳定转染细胞,为进一步体内外研究BSP在乳腺癌骨转移中的作用奠定基础。方法通过PCR的方法从pB-hBSP载体中亚克隆人骨唾液蛋白hbsp基因,定向克隆至细胞膜靶向定位真核表达载体pDisplayTM中,构建中间重组载体pDisplay-hB-SP,再次通过PCR的方法从构建的pDisplay-hBSP载体中亚克隆出膜靶向信号肽、hbsp以及细胞膜定位蛋白基因,定向克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP,构建重组复合载体pID-hBSP-EGFP,利用脂质体转染特异性骨转移的乳腺癌细胞。结果重组载体pDisplay-hBSP和pID-hBSP-EGFP插入目的片段的测序结果与Genbank中发表的BSP序列基本一致。结论成功构建了人骨唾液蛋白膜靶向表达载体,并且经转染后成功在特异性骨转移的乳腺癌细胞株MDA-MB-231BO中表达。为下一步进行体内外试验研究BSP在乳腺癌骨转移中的作用奠定基础。
- 杜红延王捷郑霖杨静刘大志
- 关键词：骨唾液蛋白细胞膜绿色荧光蛋白乳腺癌细胞
- BSP的高稳定表达对乳腺癌细胞生物学行为的影响被引量：4
- 2006年
- 目的研究骨唾液蛋白(BSP)的高稳定表达对乳腺癌细胞生物学行为的影响,揭示BSP在乳腺癌骨转移中的作用。方法通过细胞生长曲线实验、肿瘤细胞克隆形成率实验以及细胞黏附性实验,研究高稳定表达hBSP对乳腺癌细胞生物学行为的影响。结果hBSP的高稳定表达增加了乳腺癌细胞MDA-MB-231BO(pI)和MDA-MB-231BO(pID)的生长速率,提高了其活性和致瘤性。乳腺癌细胞MDA-MB-231BO的克隆形成率为8.90%±0.53%,明显低于MDA-MB-231BO(pI)和MDA-MB-231BO(pID)(分别为15.6%±0.94%和12.8%±0.77%),同时乳腺癌细胞MDA-MB-231BO的细胞贴壁率OD620的值(0.29±0.017)也明显低于MDA-MB-231BO(pI)和MDA-MB-231BO(pID)(分别为0.52±0.03和0.43±0.03)。结论hBSP具有一定的自分泌作用,增加BSP的表达促进乳腺癌细胞骨转移的发生。
- 杜红延王捷郑霖杨静刘大志
- 关键词：唾液糖蛋白类肿瘤转移
