杨静
- 作品数：20 被引量：53H指数：5
- 供职机构：广州军区广州总医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人骨唾液蛋白非融合荧光蛋白载体的构建及在乳腺癌细胞中的表达(英文)
- 2005年
- 背景:人骨唾液蛋白基因在矿化组织以外的易发生骨转移的人乳腺癌中表达。临床观察显示骨转移处的乳腺癌细胞骨唾液蛋白的表达量要高于原发部位的乳腺癌细胞,因此骨唾液蛋白有可能与肿瘤特异性骨转移的关系密切。研究乳腺癌骨转移可为将来临床的预防和治疗提供新的药物靶点。目的:建立骨唾液蛋白的稳定表达乳腺癌细胞系,观察骨唾液蛋白在乳腺癌骨转移的整个过程中的作用。设计:对照实验。单位:华南理工大学生物科学与工程学院,解放军广州军区广州总医院医学实验中心。材料:实验于2003-11/2004-03在解放军广州军区广州总医院医学实验室完成。质粒、菌种和细胞:pIRES2-EGFP载体质粒,E.Coli.Top10、含有人骨唾液蛋白基因全长的克隆载体pB-hBSP和发生特异性骨转移以及脑转移的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231BO和MDA-MB-231BR。方法:将人骨唾液蛋白基因通过聚合酶链式反应的方法从构建好的pB-hBSP载体中亚克隆出来,在其5’和3’端分别引入BglⅡ和PstⅠ限制性酶切位点,定向克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP,构建重组载体pIRES2-hBSP-EGFP。利用脂质体转染的方法将构建好的重组质粒转入特异性脑转移和骨转移的乳腺癌细胞株MDA-MB-231BR和MDA-MB-231BO中。主要观察指标:pIRES2-hBSP-EGFP重组表达载体的构建。重组表达载体pIRES2-hBSP-EGFP转染乳腺癌细胞。结果:①成功构建人骨唾液蛋白和绿色荧光蛋白非融合表达的真核表达载体pIRES2-hBSP-EGFP。②成功转染特异骨转移和脑转移的乳腺癌细胞株,可在荧光显微镜下观察到荧光蛋白标记,人骨唾液蛋白得到相应表达。结论:真核表达载体pIRES2-hBSP-EGFP的构建及转染可为骨唾液蛋白在乳腺癌骨转移中的作用的体内、外研究奠定一定的基础。
- 杜红延王捷郭勇郑霖杨静
- 关键词：乳腺肿瘤转染
- 缺血预适应对心肌微循环内皮功能的保护作用被引量：2
- 2005年
- 目的探讨缺血预适应对心肌微循环内皮功能的作用。方法复制套扎前降支冠状动脉犬模型。缺血预适应组先给予缺血5 m in,灌注5 m in,反复4次,然后缺血1 h,再灌注2 h;缺血再灌注组给予缺血1 h后再灌注2 h;两组分别于基础、缺血1 h、再灌注2 h采集冠状窦血对比分析一氧化氮和内皮素水平,并于再灌注2 h对比分析注射乙酰胆碱前后心肌声学造影强度变化,最后用Evan氏兰和TTC双染。结果(1)正常心肌注药后声学强度增强,而缺血心肌反而下降,与再灌注组相比,预适应组缺血区心肌声学强度下降程度显著减轻(P<0.01);(2)两组缺血后一氧化氮水平均显著下降(P<0.01),再灌注2 h下降更为明显(P<0.05),然而预适应组缺血1 h与再灌注2 h下降程度均小于再灌注组(P<0.05);(3)预适应组于缺血1 h、再灌注2 h内皮素水平比基础有所下降,再灌注组与基础比反而呈升高趋势,但未达统计学水准(P>0.05),两组相比,预适应使缺血1 h和再灌注2 h的ET水平显著下降(P<0.05)。结论缺血预适应对心肌微循环内皮依赖性舒血管反应及一氧化氮和内皮素水平的调节具有保护效应。
- 谢志泉刘伊丽许文平黄翠瑶曾光胜查道刚冯力杨静刁志宏
- 关键词：缺血预适应微循环内皮功能心肌
- 骨唾液蛋白(BSP)高稳定表达对乳腺癌骨转移的促进作用被引量：14
- 2007年
- 目的了解乳腺癌细胞中骨唾液蛋白(BSP)高稳定表达对其骨转移的影响,为乳腺癌骨转移的预防和治疗寻找新的药物靶点。方法通过鸡胚尿囊绒膜实验和骨条黏附实验确定BSP的高稳定表达对乳腺癌细胞血管侵袭能力及骨条黏附能力的影响。将乳腺癌细胞种植于鸡胚尿囊膜的上部空腔,经过孵育收集下囊腔血管组织,PCR检测人特异的Alu基因,以了解乳腺癌细胞的血管侵袭能力;将乳腺癌细胞与经胶原酶和胰蛋白酶消化的骨条共同孵育,胰酶消化收集乳腺癌细胞,通过染色测定OD_(488)值来确定乳腺癌细胞对骨条的黏附。结果空白对照组和未经转染的乳腺癌细胞组各5个鸡胚中均没有扩增出人的Alu基因,BSP高稳定表达的乳腺癌细胞MDA-MB-231BO(pI)和MDA-MB-231BO(piE))各5个鸡胚中分别有4个和3个扩增出人Alu基因;乳腺癌细胞MDA-MB-231BO(pI)和MDA-MB-231BO(pID)的骨条黏附实验测得的488nm处的吸光度值分别为0.580±0.046和0.490±0.039,明显高于未经转染的乳腺癌细胞组(0.260±0.021,P<0.05)和空白对照组(0.034±0.003,P<0.01)。结论BSP的高稳定表达增加了乳腺癌细胞的血管侵袭能力,提高了乳腺癌细胞的骨条黏附能力,可能对乳腺癌的骨转移有一定促进作用。
- 杜红延王捷杨静郑霖刘大志
- 关键词：唾液糖蛋白类肿瘤转移
- 疱疹病毒gD基因多聚核苷酸疫苗的构建和表达被引量：8
- 2001年
- 目的构建疱疹病毒 gD2基因多聚核苷酸疫苗并在实验动物中得到表达。方法将构建的 pcDNA3-gD2的质粒 DNA注射入豚鼠的舌肌中，每周 1次，共 3次，最后 1次免疫 48 h后引颈处死豚鼠，并取其舌、肝、脾、肾、心脏及股四头肌，用免疫组化法 (SP法 )检测 gD2抗原的表达。结果重组质粒组 gD2真核表达载体免疫接种后，均可在舌肌测到抗原表达，而对照组均为阴性。结论重组质粒 gD2真核表达载体可以在豚鼠舌肌中表达，对建立基因免疫防治疱疹病毒感染奠定一定基础。
- 杨慧兰廖元兴杨静王捷杨太成田野刘荣卿
- 关键词：生殖器疱疹糖蛋白D疱疹病毒GD基因重组质粒
- 抗重组人骨唾液酸蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：6
- 2006年
- 目的研制重组人骨唾液酸蛋白(rhBSP)单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法以纯化的rhBSP免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗rhBSP mAb;用亚型鉴定试剂条鉴定IgG亚类;ELISA鉴定mAb的特异性和效价。结果获得2株能稳定分泌特异性mAb的抗rhBSP的杂交瘤细胞系AHB1和AHB5,Ig亚类分别为IgG2a和IgG1,轻链均为κ型,其效价分别为1×10-3和1×10-7。腹水mAb经Protein A亲和色谱柱纯化后,纯度达92%以上。结论获得抗rhBSP的mAb,为进一步研究BSP的生物学功能和用于临床诊断实验研究创造了条件。
- 王捷刘增田杨太成杨静冼江刘大志
- 关键词：单克隆抗体
- hBSP稳定转染乳腺癌细胞的筛选和鉴定
- 2007年
- 目的筛选和鉴定人骨唾液蛋白(BSP)的荧光蛋白非融合表达载体和膜靶向表达载体稳定转染的乳腺癌细胞,为BSP在乳腺癌骨转移中作用的进一步体内、外研究奠定基础。方法经过4周400μg/mlG418的抗性筛选结合流式细胞仪荧光分选系统获得稳定转染乳腺癌细胞。采用RT-PCR、ELISA以及Western-blotting等方法检测和鉴定BSP在乳腺癌细胞中基因水平和蛋白水平的表达情况。结果筛选获得的乳腺癌细胞中BSP得到稳定表达,以β-肌动蛋白为内参,与空白对照相比BSP蛋白在基因水平上灰度比值从0.446分别增加为0.993和0.942;同时ELISA和Western-bolt实验结果证明BSP蛋白分泌表达和细胞内表达的量也均有所提高。结论稳定高表达BSP的乳腺癌细胞的获得为进一步BSP在乳腺癌骨转移中的作用的体内外试验研究奠定基础。
- 杜红延王捷郑霖杨静刘大志
- 关键词：骨唾液蛋白稳定转染乳腺癌细胞
- 单纯疱疹病毒Ⅱ型gD基因的克隆、表达及保护性免疫研究
- 杨慧兰韩双艳刘仲荣杨军王捷林挺冼江张宏斌杨静杨传红杨太成
- 在我国首次成功构建生殖器疱疹gD基因的重组真核表达质粒pVAX-gD，细胞及动物实验证明pVAX-gD质粒能在细胞胞浆高效表达高特异性的gD蛋白，具有良好细胞免疫及体液免疫效果，具有安全性能好、经济实用接种方便等优点。本...
- 关键词：
- 关键词：单纯疱疹病毒GD基因保护性免疫
- 纳米磁诱导人肝癌hep-6细胞凋亡探索实验研究
- 目的探索研究纳米磁诱导肝癌hep-6肿瘤细胞凋亡价值。方法应用电泳,透射电镜,以及流式细胞仪技术。设计分组为空白对照组;药物对照组;纳米磁处理组;按药物剂量与作用时间点,重点观察纳米磁对人肝癌诱导细胞凋亡。结果①药物剂量...
- 欧陕兴肖湘生赖晃文冼江杨静季军捷苏增贵
- 关键词：细胞凋亡
- 文献传递
- 乳腺癌骨转移的分子机制被引量：2
- 2003年
- 杨静王捷
- 关键词：乳腺癌骨转移分子机制癌细胞骨唾液蛋白趋化因子
- 心脏缺血预适应对中性粒细胞功能与活性氧释放的影响被引量：5
- 2005年
- 目的:观察缺血预适应中中性粒细胞黏附、浸润及活性氧释放的特点,旨在探讨预适应保护效应与白细胞功能及活性氧的关系。方法:①实验于2000-06/2001-12在解放军广州军区广州总医院医学实验科及南方医科大学南方医院心内科实验室完成。选用杂种犬12条,雄性7条,雌性5条。②麻醉后,开胸游离前降支冠状动脉,稳定30min,造成心肌缺血模型。造模后将犬随机分为2组:缺血再灌注组(n=6),缺血1h后再灌注2h;缺血预适应组(6条),在缺血1h前给予血流阻断5min,灌注5min,反复4次,然后缺血1h,再灌注2h。③分别于基础(缺血和再灌注之前)、缺血1h、再灌注2h各时间点,采用流式细胞术测定中性粒细胞CD11b/CD18表达,按梗死面积%=梗死区面积/危险区面积×100%公式计算心肌梗死范围。按南京聚力生物医学工程提供试剂盒说明测定血清丙二醛水平和超氧化物歧化酶活性。计算髓过氧化物酶活力(kU/g)=ΔA460/(12×组织酶量/3),ΔA460为460nm处吸光度1min增大的值,3为反应的总体积,12为Sigma公司规定的每毫升1mg邻联茴香胺的吸光度;组织酶量指每0.1mL所用酶液中含酶的量。④两组间比较用配对t检验,多组间比较用方差分析,多组间两两比较用SNK方法。结果:犬12条均进入结果分析。①心肌梗死范围:缺血预适应组明显小于缺血再灌注组(P<0.01)。②中性粒细胞膜CD11/CD18表达:缺血再灌注组缺血1h、再灌注2h明显高于基础和缺血预适应组(P<0.05～0.01)。③髓过氧化物酶活性:缺血预适应组缺血和坏死心肌明显低于缺血再灌注组(P<0.05),两组缺血和坏死心肌明显高于正常心肌(P<0.05)。缺血预适应组正常心肌组织低于缺血再灌注组,但差异不明显(P=0.11)。血清丙二醛水平:缺血再灌注组缺血1h和再灌注2h明显高于基础和缺血预适应组(P<0.05)。血清超氧化物岐化酶活性:缺血1h缺血再灌注组明显低于基础和缺血预适应
- 谢志泉刘伊丽黄翠瑶曾光胜许文平查道刚冯力杨静刁志宏
- 关键词：缺血预处理中性白细胞活性氧组分心肌
