亢中奎
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：暨南大学生命科学技术学院更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人源性抗bFGF抗体抑制人黑色素瘤生长的作用研究被引量：5
- 2013年
- 目的研究人源性抗bFGF抗体对人黑色素瘤A375细胞的体内外增殖抑制作用。方法体外培养人黑色素瘤A375细胞,CCK-8法检测人源性抗bFGF抗体对A375细胞增殖的影响;Western blot检测人源性抗bFGF抗体对bFGF下游信号通路中ERK1/2磷酸化的影响;建立裸鼠皮下移植瘤模型,通过记录各处理组裸鼠皮下移植瘤的体积、质量及裸鼠体质量变化,研究人源性抗bFGF抗体在体内对人黑色素瘤生长的抑制作用;免疫组化检测肿瘤组织内的微血管密度。结果 CCK-8实验结果表明人源性抗bFGF抗体能抑制A375细胞的生长,在800 ng/ml的质量浓度下,抑制率为24%;Western blot结果表明人源性抗bFGF抗体显著抑制FGFR下游信号通路中ERK1/2的磷酸化;裸鼠体内试验中,人源性抗体明显抑制了肿瘤的生长,抑制率为28.12%。免疫组化结果显示各组肿瘤组织中微血管密度均有下降。结论该株人源性抗体在体外可有效的抑制人黑色素瘤细胞的生长,并能在体内抑制肿瘤生长及血管新生。
- 杜超超亢中奎陈文慧潘磊宋其芳王宏黄建芳邓宁
- 关键词：黑色素瘤碱性成纤维细胞生长因子人源性抗体
- 重组人EGFL6在HEK293细胞中的瞬时表达被引量：4
- 2013年
- 旨在通过构建EGFL6的真核表达载体,在HEK293T细胞中进行表达,并利用HEK293T细胞表达的EGFL6条件培养基,探讨EGFL6对人黑色素瘤A375细胞和人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响。利用PCR方法亚克隆得到的EGFL6基因片段及EGFP基因片段,用重叠PCR方法构建成EGFP-EGFL6融合基因片段,并分别将测序正确的EGFP-EGFL6融合基因片段及EGFP基因片段构建到真核表达载体pAAV中。表达载体质粒去内毒素纯化后,瞬时转染HEK293T细胞进行表达,荧光定位分析和Western blot检测EGFL6的表达。CCK-8试验分析含EGFP-EGFL6融合蛋白的HEK293T条件培养基对A375细胞和SKOV3细胞的增殖能力的影响。结果显示,酶切鉴定pAAV-EGFP-EGFL6和pAAV-EGFP两个重组表达载体均构建成功;EGFP荧光定位及Western blot结果均显示EGFP-EGFL6在HEK293T细胞中成功表达;增殖抑制试验结果显示EGFL6促进了A375和SKOV3细胞的增殖,对肿瘤细胞的促增殖率分别达到(37.79±14.05)%和(30.53±6.31)%。成功地将EGFP应用于EGFL6真核表达载体的构建与表达,结果表明人EGFL6促进了A375和SKOV3细胞的增殖。
- 亢中奎张晋霞姜浩武王宏宋其芳黄建芳邓宁
- 关键词：肿瘤细胞
- 二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体的酵母表达及鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的为提高小分子抗体表达量,利用酵母表达系统表达二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体(ds-Diabody)并研究其生物学活性。方法将ds-Diabody基因构建到酵母表达载体中获得重组质粒pPICZαA-ds-Diabody,经BglⅡ线性化电转至毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定,并进行镍离子亲和层析和阴离子交换层析纯化。间接ELISA检测其抗原结合活性,CCK8法和划痕实验检验其肿瘤抑制作用。结果成功构建人源性抗bFGF ds-Diabody酵母表达载体,并获得4株高表达酵母工程菌,经1%甲醇诱导96 h表达量即可恒定,表达量可达158 mg/L。SDS-PAGE及Western blot结果显示,目的蛋白大小约Mr35 000左右。通过两步纯化方案,目的蛋白的纯度可达95%以上。ELISA结果显示纯化的ds-Diabody可与bFGF特异性结合。CCK8结果显示,纯化的ds-Diabody可剂量依赖性地抑制人肺癌细胞株A549的增殖,最大抑制率为43.4%。划痕实验表明ds-Diabody可以抑制肿瘤细胞的迁移。结论研究结果表明人源性抗bFGF ds-Diabody在毕赤酵母中可获得高效表达,且具有很好的生物学活性。
- 张晋霞姜浩武亢中奎潘磊王金胜刘羿辰邓宁
- 关键词：肺癌细胞
- 二硫键稳定的抗bFGF人源双链抗体及其制备方法与应用
- 本发明公开了一种二硫键稳定的抗bFGF人源双链抗体及其制备方法与应用。该二硫键稳定的抗bFGF人源双链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。编码该抗bFGF人源双链抗体的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所...
- 邓宁江浩武亢中奎王宏宋其芳
- 文献传递
