马晓娜
- 作品数：19 被引量：34H指数：4
- 供职机构：宁夏医科大学总医院更多>>
- 发文基金：宁夏回族自治区自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 间充质干细胞诱导的神经干细胞条件培养基对原代培养海马神经干细胞缺氧损伤的保护作用被引量：2
- 2022年
- 目的探讨人胎盘间充质干细胞诱导的神经干细胞条件培养基对氧-糖剥夺后的海马神经干细胞的保护作用。方法建立将人胎盘间充质干细胞诱导成神经干细胞的方法,检测诱导后的神经干细胞的生物学特性;收集诱导的神经干细胞的条件培养基;原代培养小鼠海马神经干细胞并鉴定其神经干细胞相关分子的表达;建立原代海马神经干细胞氧-糖剥夺模型;采用EdU染色比较正常组(Normal组)、氧-糖剥夺组(OGD组)和氧-糖剥夺+条件培养基组(OGD+CM组)神经干细胞的增殖能力;采用免疫荧光染色法检测不同组凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase-3的表达;采用Western blot法检测不同组SOD蛋白的表达;采用流式细胞术检测不同组ROS水平情况。结果荧光染色结果显示,与Normal组相比,OGD组神经干细胞EdU阳性细胞数减少,Cleaved-Caspase-3阳性细胞数目增加(P均<0.05);与OGD组相比,OGD+CM组神经干细胞的EdU阳性细胞数增多,Cleaved-Caspase-3阳性细胞数目减少(P均<0.05)。Western blot结果显示,与Normal组相比,OGD组SOD蛋白表达下降(P<0.05);与OGD组相比,OGD+CM组SOD蛋白表达升高(P<0.05)。流式细胞术结果显示,与Normal组相比,OGD组ROS表达升高(P<0.05);与OGD组相比,OGD+CM组ROS表达降低(P<0.05)。结论人胎盘间充质干细胞诱导的神经干细胞条件培养基能够提高氧-糖剥夺损伤的海马神经干细胞的增殖能力,减少细胞凋亡并促进细胞内的抗氧化能力恢复。
- 王燕杨建成金毅然马晓娜李家辉郭松林刘佳鑫梁雪云
- 关键词：神经干细胞凋亡抗氧化
- 胎盘间充质干细胞诱导为神经细胞的方法比较被引量：2
- 2021年
- 目的:比较DMEM/F12、高糖DMEM和Neurobasal-A培养基(NA)3种培养基对胎盘间充质干细胞(PMSCs)诱导成神经细胞的效果。方法:分别采用DMEM/F12组(DMEM/F12)、高糖DMEM组(DMEM)和Neurobasal-A组(NA)培养基诱导培养P3代人类PMSCs,比较各组诱导生成的神经球数量及其直径评价不同方法诱导后形成的神经细胞球的增殖能力;利用免疫荧光染色鉴定诱导成的神经球的巢蛋白(nestin)和生长相关蛋白43(GAP-43)的表达;利用Western Blot检测细胞神经丝蛋白(NF)表达量;分别采用由DMEM/F12、高糖DMEM和Neurobasal-A培养基诱导获得的神经细胞的条件培养基对由H_(2)O_(2)氧化损伤的神经元细胞系HT22细胞进行培养后,利用免疫荧光染色观察各组细胞caSpaSe-3的表达评价不同方法诱导成的神经细胞对氧化损伤的神经元的治疗效果。结果:采用3种不同诱导培养基将PMSCs培养24 h后,各组均有神经球出现;诱导形成的神经样细胞的nestin和GAP-43表达为阳性;NF在诱导形成的神经样细胞中的表达水平明显高于未诱导的Normal组的表达水平(P<0.05);分别采用3种由不同诱导方法获得的神经细胞的条件培养基对氧化损伤的HT22细胞进行培养后,阳性表达caspase-3的HT22细胞数目明显减少(P<0.05)。结论:3种诱导培养基均可以有效地将PMSCs诱导成神经细胞,诱导形成的神经细胞对氧化损伤的神经元具有一定的促进修复作用。
- 杨建成王燕金毅然李家辉马晓娜马海滨梁雪云
- 关键词：胎盘间充质干细胞神经细胞抗氧化作用
- 人胎盘胎儿侧间充质干细胞无血清培养上清对肺脏上皮细胞氧化应激的保护作用被引量：5
- 2017年
- 背景:前期研究证实人胎盘胎儿侧间充质干细胞培养上清具有一定的清除活性氧自由基的能力,且本身具有一定的抗氧化酶活性。目的:探究人胎盘胎儿侧间充质干细胞在无血清培养条件下所得上清对氧化应激损伤的肺脏上皮细胞的保护作用及其作用机制。方法:分别使用不同浓度的过氧化氢(200,400,500,600,800μmol/L)对肺脏上皮细胞A549细胞系进行6,12,24 h的氧化刺激,通过CCK-8法对肺脏上皮细胞存活率进行检测,得出存活率为50%时的过氧化氢浓度作为氧化损伤模型的最适条件。用Hochest33258染色及Western Blot对模型有效性进行验证。采用无血清培养基培养胎盘胎儿侧间充质干细胞,收集P3代细胞培养上清将其作用于氧化损伤的肺脏上皮细胞,培养24 h,即上清组。同时设立损伤组(仅进行氧化损伤)和维生素C组(培养基中添加100μmol/L的维生素C)。利用流式细胞术对各组细胞凋亡情况进行检测以及Western Blot检测凋亡相关蛋白及氧化应激经典信号通路Nrf2-Keap1-ARE信号通路相关蛋白的表达。结果与结论:(1)CCK-8法检测得出,采用600μmol/L的过氧化氢对肺脏上皮细胞进行24 h的氧化刺激,A549细胞存活率为(56.41±3.31)%。Hochest33258染色及Western Blot证实模型的可靠性;(2)流式细胞术结果显示维生素C组和上清组氧化损伤细胞的凋亡率与损伤组细胞相比有不同程度的降低,其中上清组与损伤组相比差异有统计学意义(P<0.05);(3)Western Blot对凋亡相关蛋白的检测显示,与损伤组对比,维生素C组和上清组凋亡促进基因Bax蛋白表达减弱,凋亡抑制基因Bcl-2蛋白表达增强,且差异有统计学意义(P<0.05)。Nrf2-Keap1-ARE信号通路相关蛋白显示与损伤组对比,维生素C组和上清组Nrf2蛋白表达增强,Keap1分子表达减弱且差异有统计学意义(P<0.05);(4)上述结果提示,实验成功构建了肺脏上皮细胞损伤模型,且人胎盘胎儿侧间充�
- 付雪刘国攀张玉洁严秀蕊马晓娜刘晓明魏军
- 关键词：干细胞间充质干细胞氧化应激WESTERNBLOT法
- 一种低免疫原性组织工程皮肤构建方法
- 本发明公开了一种低免疫原性组织工程皮肤构建方法，属于生物工程技术领域，该方法方法采用人表皮干细胞和胎儿来源的胎盘间充质干细胞作为种子细胞，以牛I型胶原构建的3D基质作为支架，利用气液界面分离培养法复合构建为一种有活性的低...
- 陈冬梅杨银学魏军刘晓明刘淑丹梁雪云杨婷婷张耀林马晓娜马海滨严秀蕊刘婷
- 文献传递
- 吉非替尼耐药的人肺腺癌HCC-827/GR细胞乙醛脱氢酶亚型表达分析被引量：3
- 2018年
- 背景与目的肿瘤的复发和耐药是肿瘤患者死亡的主要原因。乙醛脱氢酶(acetaldehyde dehydrogenase,ALDH)家族与肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和耐药密切相关,且ALDH不同亚型基因在不同肿瘤细胞中有差异性表达。本实验旨在分析对吉非替尼耐药的人肺腺癌细胞HCC-827/GR ALDH亚型的表达。方法利用人肺腺癌细胞系HCC-827制备吉非替尼耐药细胞株HCC-827/GR;利用流式检测HCC-827及HCC-827/GR中ALDH的表达;采用MTT法检测ALDH抑制剂二乙氨基苯甲醛(diethyllaminaldehyde,DEAB)处理前后HCC-827/GR细胞的增殖能力和对吉非替尼的敏感性;利用q RT-PCR检测HCC-827与HCC-827/GR细胞中ALDH各亚型在m RNA水平的表达。结果与HCC-827细胞相比,ALDH在吉非替尼耐药的细胞株HCC-827/GR的阳性率增加;经100μmol/L DEAB处理后,HCC-827/GR细胞增殖能力下降;与HCC-827细胞相比,ALDH1A1和ALDH1L1在HCC-827/GR细胞中m RNA表达水平增高;ALDH3B2表达降低。结论 ALDH具有检测吉非替尼耐药的人肺腺癌细胞的标志分子的潜力,其中ALDH1A1可能参与人肺腺癌细胞对吉非替尼耐药性的形成过程。
- 杨婷婷古晶晶刘婷马海滨马晓娜陶金金毅然梁雪云
- 关键词：人肺腺癌吉非替尼乙醛脱氢酶
- 人胚胎脑组织蛋白提取物诱导人胎盘间充质干细胞向神经细胞的分化被引量：1
- 2014年
- 背景:选择合适的诱导方法诱导人胎盘间充质干细胞分化为神经元样细胞是临床治疗神经损伤的关键。目的:在人胎盘间充质干细胞中加入商品化的人胚胎脑组织蛋白提取物,观察其诱导分化为神经元样细胞的可行性。方法:采用酶消化法分离培养人胎盘间充质干细胞,传至第3代,将人早期胚胎脑组织蛋白提取物加入诱导培养基培养6 d,加入浓度为20 nmol/L全反式维甲酸和500μg/L音猬因子培养3 d,换新的培养液,包含体积分数为10%胎牛血清,10μg/L脑源性神经营养因子,20μg/L神经胶质细胞源性神经营养因子,50μg/L胰岛素样生长因子Ⅱ型继续培养3 d。结果与结论:胎盘组织经酶消化后获得贴壁细胞,传至第2代细胞形态为梭形,成漩涡样生长,传至第3代细胞形态较均一。诱导后细胞经免疫细胞化学法检测均表达神经元特异性烯醇化酶、巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白、神经丝蛋白、神经生长相关蛋白43;ELISA法检测细胞培养上清脑源性神经营养因子、神经营养因子3、神经营养因子4为阳性表达;RT-PCR检测细胞微管相关蛋白、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白、神经生长相关蛋白43均为阳性表达。结果表明人胚胎脑组织蛋白提取物使人胎盘间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞。
- 马丽君范恒马晓娜魏军李玉奎
- 关键词：间质干细胞干细胞人胎盘间充质干细胞
- 不同年龄人角化细胞的衰老特征评价
- 2018年
- 目的评价年龄对衰老细胞模型的影响,以建立体外培养的衰老细胞模型。方法本研究根据供者年龄分为4组,每组3例生物学重复,<10岁、10～20岁、20～30岁和>30岁组。酶消化法体外分离培养不同年龄供体的表皮角化细胞。体外培养至P2代,进行以下检测:β-半乳糖苷酶染色鉴定衰老细胞数量;CCK-8和克隆形成试验检测细胞生长和增殖能力;磷酸化γ-H2A.X免疫荧光染色检测细胞DNA损伤;Western blot法检测分析细胞中周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白表达。结果各组衰老细胞数占总细胞数百分比分别为0.864%、0.789%、5.472%、8.765%,差异有统计学意义(P=0.000)。随着年龄的增加,HKCs细胞倍增能力下降,倍增时间延长。<10岁组中细胞核Phospho-Histone H2A.X表达细胞数量少,>30岁组人正常角化细胞内DNA双链断裂大量产生。同时,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白2A(CDKN2A/p16^(INK4a))、p21、p53的表达随年龄增加而上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论正常人角化细胞的增殖与衰老与人类年龄呈显著正相关,可以作为研究人类衰老的细胞模型。
- 杨婷婷陈冬梅刘淑丹马海滨马晓娜梁雪云
- 关键词：角化细胞细胞模型DNA损伤
- 鲜枸杞子提取物通过p38 MAPK信号通路抑制人肝癌细胞HepG2诱导小鼠恶病质的作用及机制被引量：11
- 2019年
- 目的:探讨鲜枸杞子提取物(LBL)对人类肝癌细胞系HepG2诱导的小鼠恶病质模型的作用及其相关机制研究。方法:小鼠分为正常组,恶病质模型组,LBL低剂量组(LBL 5 mg·kg^(-1)),LBL高剂量组(LBL 25 mg·kg^(-1))。采用人肝癌细胞系HepG2成功建立小鼠恶病质模型,待小鼠的体质量明显下降时,连续灌喂生理盐水或不同剂量LBL 28 d后,记录各组小鼠的体质量,酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血浆肌酸激酶(creatine kinase,CK),促炎因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β),白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平,采用免疫组织化学检测小鼠肌肉降解水平及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化p38 MAPK(phospho-p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38 MAPK),炎症信号通路核转录因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)的表达。结果:与恶病质模型组比较,LBL低、高剂量组小鼠体质量明显下降(P<0.05,P<0.01),肌肉降解程度明显抑制(P<0.05),CK水平显著下降(P<0.01);LBL低、高剂量组小鼠血浆IL-1β,IL-6,TNF-α表达水平明显下调(P<0.05,P<0.01)。免疫组织化学结果显示,LBL低、高剂量组p38 MAPK蛋白表达降低(P<0.05),Western blot结果进一步证实p-p38 MAPK,NF-κB蛋白表达降低(P<0.01)。与LBL低剂量组比较,LBL高剂量组血浆肌酸激酶,p38 MAPK,p-p38 MAPK,NF-κB蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:鲜枸杞子提取物能够抑制人类肝癌细胞系HepG2诱导的小鼠恶病质模型的恶病质的进程,其作用机制可能与其下调促炎因子IL-1β,IL-6,TNF-α,从而抑制p38 MAPK,p-p38 MAPK,NF-κB的表达相关。
- 刘婷丁艳杨婷婷马晓娜金毅然马海滨梁雪云
- 关键词：恶病质肝癌HEPG2促炎因子
- 人胎儿侧胎盘间充质干细胞对急性肺损伤患者的炎症调节作用
- 2017年
- 目的:探讨人胎儿侧胎盘间充质干细胞对急性肺损伤患者的炎症调节作用。方法:采用酶消化法从人胎盘间充质干细胞中分离出胎儿侧胎盘间充质干细胞,与急性肺损伤患者的外周血淋巴细胞共培养,MTT方法确定细胞增殖,ELISA方法测定炎症因子的变化,流式细胞术检测淋巴细胞亚群的变化。结果:人胎儿侧胎盘间充质干细胞能够抑制急性肺损伤患者淋巴细胞的增殖(t=3.154,P=0.008),下调γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)的分泌(t=162.94,P=0.000),上调白细胞介素(interleukin,IL)-10的分泌(t=52.848,P=0.000),并下调CD4+与CD8+T淋巴细胞的比例(分别为t=15.564、P=0.004,t=7.506、P=0.017)。结论:人胎儿侧胎盘间充质干细胞能够下调急性肺损伤患者的炎症反应。
- 刘婷马晓娜杨婷婷马海滨金毅然王立斌
- 关键词：间充质干细胞急性肺损伤
- 人胎盘胎儿侧间充质干细胞无血清培养上清的抗氧化活性分析被引量：6
- 2017年
- 背景:目前关于间充质干细胞的研究大多集中于其免疫调节功能,而关于细胞和培养上清的其抗氧化能力的研究较为少见。目的:观察人胎盘胎儿侧间充质干细胞在无血清培养条件下,其上清的抗氧化能力。方法:采用无血清培养基培养胎儿侧胎盘间充质干细胞,分别于48 h收集P2-P6代细胞培养上清。在空白培养基中添加维生素C 100μmol/L作为阳性对照。检测P2-P6代人胎盘胎儿侧间充质干细胞培养上清的总抗氧化能力、清除活性氧自由基的能力和抗氧化酶活性。结果与结论:(1)抗氧化能力:各代次人胎盘胎儿侧间充质干细胞培养上清具有一定的抗氧化能力,且不同代次间的上清具有一定的差异,其中总抗氧化能力与40-80μmol/L的维生素C相当,各代次上清均具有一定的清除二苯基苦基苯肼自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基等自由基清除能力;(2)抗氧化酶活性分析:各代次间的人胎盘胎儿侧间充质干细胞培养上清中均可以检测到一定水平的超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性;(3)结果提示,在无血清条件下培养胎儿侧胎盘间充质干细胞的上清具有一定的抗氧化能力和抗氧化酶的活性。人胎盘胎儿侧间充质干细胞的抗氧化能力与其旁分泌机制有关,但其中的抗氧化成分及分子机制有待进一步的研究。
- 付雪张玉洁严秀蕊马晓娜刘晓明魏军
- 关键词：干细胞胎盘间充质干细胞无血清培养培养上清抗氧化
