金毅然
- 作品数：19 被引量：27H指数：2
- 供职机构：宁夏医科大学总医院更多>>
- 发文基金：宁夏回族自治区自然科学基金国家自然科学基金宁夏高等学校科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 间充质干细胞诱导的神经干细胞条件培养基对原代培养海马神经干细胞缺氧损伤的保护作用被引量：2
- 2022年
- 目的探讨人胎盘间充质干细胞诱导的神经干细胞条件培养基对氧-糖剥夺后的海马神经干细胞的保护作用。方法建立将人胎盘间充质干细胞诱导成神经干细胞的方法,检测诱导后的神经干细胞的生物学特性;收集诱导的神经干细胞的条件培养基;原代培养小鼠海马神经干细胞并鉴定其神经干细胞相关分子的表达;建立原代海马神经干细胞氧-糖剥夺模型;采用EdU染色比较正常组(Normal组)、氧-糖剥夺组(OGD组)和氧-糖剥夺+条件培养基组(OGD+CM组)神经干细胞的增殖能力;采用免疫荧光染色法检测不同组凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase-3的表达;采用Western blot法检测不同组SOD蛋白的表达;采用流式细胞术检测不同组ROS水平情况。结果荧光染色结果显示,与Normal组相比,OGD组神经干细胞EdU阳性细胞数减少,Cleaved-Caspase-3阳性细胞数目增加(P均<0.05);与OGD组相比,OGD+CM组神经干细胞的EdU阳性细胞数增多,Cleaved-Caspase-3阳性细胞数目减少(P均<0.05)。Western blot结果显示,与Normal组相比,OGD组SOD蛋白表达下降(P<0.05);与OGD组相比,OGD+CM组SOD蛋白表达升高(P<0.05)。流式细胞术结果显示,与Normal组相比,OGD组ROS表达升高(P<0.05);与OGD组相比,OGD+CM组ROS表达降低(P<0.05)。结论人胎盘间充质干细胞诱导的神经干细胞条件培养基能够提高氧-糖剥夺损伤的海马神经干细胞的增殖能力,减少细胞凋亡并促进细胞内的抗氧化能力恢复。
- 王燕杨建成金毅然马晓娜李家辉郭松林刘佳鑫梁雪云
- 关键词：神经干细胞凋亡抗氧化
- 解偶联蛋白2基因-866G/A,Ala55Val及Ins/Del多态性对宁夏回族人群血清抗氧化物质含量的影响分析被引量：1
- 2017年
- 目的以宁夏地区回族人群为研究对象,分析UCP2基因多态性对血清抗氧化物质含量的影响。方法收集宁夏地区回族正常人群及回族脑缺血患者外周血样本,提取外周血基因组DNA,采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性方法检测各样本UCP2基因-866G/A、Ala55Val及Ins/Del多态性,利用试剂盒检测血清抗氧化物质SOD、TAOC、GSH含量。结果宁夏地区回族健康人群中,UCP2基因-866位点GA基因型血清GSH值(125.78±4.55)U/L低于GG野生型基因型GSH值(130.35±10.68)U/L(P<0.05);脑缺血患者中Ins/Del位点组Ins/Ins基因型血清GSH值(108.71±8.30)U/L低于Del/Del基因型血清GSH值(116.43±8.24)U/L(P<0.05)。结论在一定条件下,UCP2基因-866G/A,Ins/Del多态性可能影响宁夏地区回族人群血清GSH值。
- 梁雪云姚子昂马斌武金毅然韩怀钦牛建国何仲义
- 关键词：解偶联蛋白2回族人群抗氧化物质
- 人胎儿侧胎盘间充质干细胞对急性肺损伤患者的炎症调节作用
- 2017年
- 目的:探讨人胎儿侧胎盘间充质干细胞对急性肺损伤患者的炎症调节作用。方法:采用酶消化法从人胎盘间充质干细胞中分离出胎儿侧胎盘间充质干细胞,与急性肺损伤患者的外周血淋巴细胞共培养,MTT方法确定细胞增殖,ELISA方法测定炎症因子的变化,流式细胞术检测淋巴细胞亚群的变化。结果:人胎儿侧胎盘间充质干细胞能够抑制急性肺损伤患者淋巴细胞的增殖(t=3.154,P=0.008),下调γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)的分泌(t=162.94,P=0.000),上调白细胞介素(interleukin,IL)-10的分泌(t=52.848,P=0.000),并下调CD4+与CD8+T淋巴细胞的比例(分别为t=15.564、P=0.004,t=7.506、P=0.017)。结论:人胎儿侧胎盘间充质干细胞能够下调急性肺损伤患者的炎症反应。
- 刘婷马晓娜杨婷婷马海滨金毅然王立斌
- 关键词：间充质干细胞急性肺损伤
- 慢性缺氧对成年小鼠海马区神经发生的影响被引量：1
- 2017年
- 目的通过观察慢性缺氧对成年小鼠海马区神经发生的影响,探讨脑卒中导致的血管性痴呆的发病机制。方法利用海马区神经干细胞慢性缺氧模型,通过神经干细胞形态变化观察及直径测量、TUNEL染色和免疫细胞化学染色等方法,评价慢性缺氧对神经干细胞形态、增殖能力、分化能力及凋亡的影响。结果随着缺氧时间延长,低氧组神经干细胞球结构破坏明显,增长停滞。神经干细胞球直径测量结果显示:正常组与第0天直径(130.30±5.74)μm相比,第3天直径(195.62±20.18)μm、第7天直径(247.43±32.97)μm及第12天直径(298.97±39.59)μm均明显增长(P<0.05);而低氧组神经干细胞球直径在不同时间点差异均无统计学意义(P>0.05)。TUNEL染色结果发现,缺氧组神经干细胞有明显TUNEL阳性表达。免疫细胞化学染色结果显示:缺氧组中,偶见神经干细胞表达Nestin蛋白,而GFAP蛋白表达明显增强。结论慢性缺氧影响成年小鼠海马区的神经发生,这可能是脑卒中血管性痴呆的发病机制之一。
- 金毅然马晓娜马海滨刘婷梁雪云
- 关键词：慢性缺氧体外模型神经发生
- 吉非替尼耐药的人肺腺癌HCC-827/GR细胞乙醛脱氢酶亚型表达分析被引量：3
- 2018年
- 背景与目的肿瘤的复发和耐药是肿瘤患者死亡的主要原因。乙醛脱氢酶(acetaldehyde dehydrogenase,ALDH)家族与肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和耐药密切相关,且ALDH不同亚型基因在不同肿瘤细胞中有差异性表达。本实验旨在分析对吉非替尼耐药的人肺腺癌细胞HCC-827/GR ALDH亚型的表达。方法利用人肺腺癌细胞系HCC-827制备吉非替尼耐药细胞株HCC-827/GR;利用流式检测HCC-827及HCC-827/GR中ALDH的表达;采用MTT法检测ALDH抑制剂二乙氨基苯甲醛(diethyllaminaldehyde,DEAB)处理前后HCC-827/GR细胞的增殖能力和对吉非替尼的敏感性;利用q RT-PCR检测HCC-827与HCC-827/GR细胞中ALDH各亚型在m RNA水平的表达。结果与HCC-827细胞相比,ALDH在吉非替尼耐药的细胞株HCC-827/GR的阳性率增加;经100μmol/L DEAB处理后,HCC-827/GR细胞增殖能力下降;与HCC-827细胞相比,ALDH1A1和ALDH1L1在HCC-827/GR细胞中m RNA表达水平增高;ALDH3B2表达降低。结论 ALDH具有检测吉非替尼耐药的人肺腺癌细胞的标志分子的潜力,其中ALDH1A1可能参与人肺腺癌细胞对吉非替尼耐药性的形成过程。
- 杨婷婷古晶晶刘婷马海滨马晓娜陶金金毅然梁雪云
- 关键词：人肺腺癌吉非替尼乙醛脱氢酶
- 应用小鼠早期胚胎活性因子诱导小鼠成纤维细胞再程序化为多能干细胞的实验研究被引量：1
- 2013年
- 目的:研究并建立应用早期胚胎活性因子诱导成体细胞再程序化的实验体系。方法:通过体外受精方法大量收集小鼠3.5 d囊胚,从小鼠囊胚中提取早期胚胎蛋白,加入到小鼠成纤维细胞培养体系中,诱导其再程序化为多能干细胞。对得到的多能干细胞采用PCR鉴定Oct3/4基因表达;在诱导多能干细胞分化为脂肪细胞和成骨细胞后,采用油红O及茜素红染色确定其多向分化潜能。结果:诱导再程序化后获得的多能干细胞能够长期传代培养,表达干细胞特异性基因Oct3/4,采用油红O及茜素红染色确定其具有向脂肪和成骨诱导分化潜能。结论:本研究成功应用小鼠囊胚活性因子诱导小鼠成纤维细胞再程序化生成小鼠多能干细胞。
- 刘婷王立斌朱永朝金毅然李玉奎魏军
- 关键词：再程序化多能干细胞诱导分化
- 胎盘间充质干细胞诱导为神经细胞的方法比较被引量：2
- 2021年
- 目的:比较DMEM/F12、高糖DMEM和Neurobasal-A培养基(NA)3种培养基对胎盘间充质干细胞(PMSCs)诱导成神经细胞的效果。方法:分别采用DMEM/F12组(DMEM/F12)、高糖DMEM组(DMEM)和Neurobasal-A组(NA)培养基诱导培养P3代人类PMSCs,比较各组诱导生成的神经球数量及其直径评价不同方法诱导后形成的神经细胞球的增殖能力;利用免疫荧光染色鉴定诱导成的神经球的巢蛋白(nestin)和生长相关蛋白43(GAP-43)的表达;利用Western Blot检测细胞神经丝蛋白(NF)表达量;分别采用由DMEM/F12、高糖DMEM和Neurobasal-A培养基诱导获得的神经细胞的条件培养基对由H_(2)O_(2)氧化损伤的神经元细胞系HT22细胞进行培养后,利用免疫荧光染色观察各组细胞caSpaSe-3的表达评价不同方法诱导成的神经细胞对氧化损伤的神经元的治疗效果。结果:采用3种不同诱导培养基将PMSCs培养24 h后,各组均有神经球出现;诱导形成的神经样细胞的nestin和GAP-43表达为阳性;NF在诱导形成的神经样细胞中的表达水平明显高于未诱导的Normal组的表达水平(P<0.05);分别采用3种由不同诱导方法获得的神经细胞的条件培养基对氧化损伤的HT22细胞进行培养后,阳性表达caspase-3的HT22细胞数目明显减少(P<0.05)。结论:3种诱导培养基均可以有效地将PMSCs诱导成神经细胞,诱导形成的神经细胞对氧化损伤的神经元具有一定的促进修复作用。
- 杨建成王燕金毅然李家辉马晓娜马海滨梁雪云
- 关键词：胎盘间充质干细胞神经细胞抗氧化作用
- 鲜枸杞子提取物通过p38 MAPK信号通路抑制人肝癌细胞HepG2诱导小鼠恶病质的作用及机制被引量：11
- 2019年
- 目的:探讨鲜枸杞子提取物(LBL)对人类肝癌细胞系HepG2诱导的小鼠恶病质模型的作用及其相关机制研究。方法:小鼠分为正常组,恶病质模型组,LBL低剂量组(LBL 5 mg·kg^(-1)),LBL高剂量组(LBL 25 mg·kg^(-1))。采用人肝癌细胞系HepG2成功建立小鼠恶病质模型,待小鼠的体质量明显下降时,连续灌喂生理盐水或不同剂量LBL 28 d后,记录各组小鼠的体质量,酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血浆肌酸激酶(creatine kinase,CK),促炎因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β),白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平,采用免疫组织化学检测小鼠肌肉降解水平及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化p38 MAPK(phospho-p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38 MAPK),炎症信号通路核转录因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)的表达。结果:与恶病质模型组比较,LBL低、高剂量组小鼠体质量明显下降(P<0.05,P<0.01),肌肉降解程度明显抑制(P<0.05),CK水平显著下降(P<0.01);LBL低、高剂量组小鼠血浆IL-1β,IL-6,TNF-α表达水平明显下调(P<0.05,P<0.01)。免疫组织化学结果显示,LBL低、高剂量组p38 MAPK蛋白表达降低(P<0.05),Western blot结果进一步证实p-p38 MAPK,NF-κB蛋白表达降低(P<0.01)。与LBL低剂量组比较,LBL高剂量组血浆肌酸激酶,p38 MAPK,p-p38 MAPK,NF-κB蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:鲜枸杞子提取物能够抑制人类肝癌细胞系HepG2诱导的小鼠恶病质模型的恶病质的进程,其作用机制可能与其下调促炎因子IL-1β,IL-6,TNF-α,从而抑制p38 MAPK,p-p38 MAPK,NF-κB的表达相关。
- 刘婷丁艳杨婷婷马晓娜金毅然马海滨梁雪云
- 关键词：恶病质肝癌HEPG2促炎因子
- 从干细胞生成神经细胞的方法、神经细胞及其应用
- 本发明属于细胞移植领域。具体而言，本发明提供了采用干细胞生成可用于治疗神经功能丧失性伤病的神经细胞的方法，其中所述干细胞为人体来源的间质干细胞，优选来自人体的胎盘间质干细胞、骨髓间质干细胞、脂肪间质干细胞和肝脏间质干细胞...
- 杨银学魏军李玉奎王立斌马立君刘婷马晓娜范恒朱永朝叶萍金毅然
- 文献传递
- 短暂性脑缺血对C57BL/6小鼠海马区神经发生的影响被引量：1
- 2018年
- 目的:利用小鼠急性全脑缺血模型观察急性脑缺血对海马神经发生的影响。方法:将C57BL/6雄性小鼠(6~8周)随机分为脑缺血组和假手术组。采用双侧颈动脉结扎法建立短暂性全脑缺血模型;利用HE染色观察脑缺血后不同时间(1周,2周)海马区形态学变化;采用免疫组织荧光染色观察缺血后海马区caspase-3表达变化;利用Ed U染色观察缺血3 d、7 d、14 d和28 d后,海马区神经干细胞增殖变化;利用免疫组织荧光染色观察缺血3 d、7 d、14 d和28 d后,海马区nestin、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及少突胶质细胞特异蛋白(OSP)等蛋白表达变化,判断脑缺血对海马区神经干细胞分化的影响。结果:脑缺血7 d后,小鼠海马CA1区神经元数目减少,caspase-3阳性细胞增加(P<0.05)。海马DG区Ed U阳性细胞数量在第3 d开始增加(P<0.05),第1周达到峰值(P<0.05);海马CA1区Ed U阳性细胞数量在缺血后1周开始增加(P<0.05),缺血2周后逐渐降低。海马DG区nestin、GFAP及OSP阳性细胞数量均在缺血3 d后开始增加(P<0.05),缺血1周后达到峰值(P<0.05),2周后逐渐降低。海马CA1区GFAP及OSP阳性细胞数量在缺血3 d后开始增加(P<0.05),缺血1周后达到峰值(P<0.05),2周后逐渐降低。结论:脑缺血激活了海马DG区神经干细胞,使干细胞增殖,并向神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞分化,同时逐渐向CA1区迁移。
- 孙文青姚子昂金毅然马海滨牛建国何仲义梁雪云
- 关键词：脑缺血神经干细胞神经发生海马神经干细胞分化
