马博
- 作品数:8 被引量:6H指数:2
- 供职机构:第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学轻工技术与工程自动化与计算机技术更多>>
- 幽门螺杆菌黏附素HpaA重组蛋白的表达、纯化及晶体生长被引量:4
- 2015年
- 目的构建幽门螺杆菌黏附素Hpa A的原核表达载体,并用纯化的重组Hpa A蛋白进行晶体培养,为其三维结构解析、基于结构的Hpa A抗原表位分析和黏附拮抗剂研究奠定基础。方法用生物信息学方法分析Hpa A蛋白序列二级结构并预测跨膜区,利用PCR技术扩增幽门螺杆菌标准株NCTC 26695编码Hpa A蛋白的hp0797基因非跨膜区片段,构建重组质粒并p ET22b(+)-r Hpa A,在大肠杆菌BL21(DE3)中IPTG诱导表达重组蛋白,经Ni离子亲和层析、阴离子交换层析、凝胶过滤层析纯化蛋白并分析其聚集状态。用Hampton Research结晶试剂盒搜索结晶条件,并系统优化,在上海同步辐射光源进行衍射实验。结果成功构建了重组质粒p ET22b(+)-r Hpa A,并在大肠杆菌BL21(DE3)中可溶性表达;重组Hpa A蛋白在溶液中以二聚体形式存在,SDS-PAGE分析单体相对分子质量约24 000,HPLC分析纯度达95%;培养出晶形较好的重组Hpa A蛋白单晶,大小约70μm×30μm×20μm,衍射分辨率2.03魡。结论利用经典的蛋白质表达、纯化技术和晶体培养技术,获得了衍射能力较强的重组Hpa A蛋白单晶,为其三维结构解析和基于结构的幽门螺杆菌疫苗研究提供了重要基础。
- 郭玲章金勇刘东马博王书峰倪兵李海波刘威吴玉章
- 关键词:幽门螺杆菌HPA纯化晶体生长
- 人Eppin蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达被引量:2
- 2014年
- 目的构建人类附睾蛋白酶抑制剂Eppin蛋白原核表达质粒,诱导、表达与纯化后获得到可溶重组蛋白,并检测其免疫学活性。方法将目的基因克隆到表达载体pMALc,转化大肠杆菌表达菌株Rossetta2-OrigamiB(DE3),用异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。通过Ni-NTA亲和层析柱及Superdex 200分子筛层析进行纯化后,使用Thrombin酶切,并对目标蛋白进行质谱及Western印迹鉴定。结果成功构建pMALc-Eppin重组质粒,诱导后在上清中检测到Mr57 000大小的可溶MBP-Eppin融合蛋白。目标蛋白纯化与酶切后仍可溶,SDS-PAGE分析显示重组Eppin蛋白相对分子质量约15 000。肽指纹图谱分析证实目标蛋白的序列与人Eppin蛋白吻合,Western印迹显示其具有抗原性。结论经过优化,Eppin蛋白可在原核系统中以可溶形式表达,为以后研究该蛋白的生物活性、避孕免疫机制及制备避孕疫苗奠定坚实的基础。
- 陈惠玲刘东马博东亚君何畏刘威
- 关键词:原核表达纯化
- 外切体对间充质干细胞免疫调节作用的影响及抗肝癌细胞的实验研究
- 马博
- 关键词:肝癌免疫疗法免疫调节抗肿瘤作用
- 微型计算机大比例尺地图编辑器及数据转换器的设计与实现(AutoME)
- 马博
- 外切体对间充质干细胞免疫调节作用的影响及抗肝癌细胞的
- 马博
- 关键词:间充质干细胞肝癌免疫治疗
- 融合蛋白MBP-Eppin、蛋白Eppin及其制备方法
- 本发明涉及“融合蛋白MBP-Eppin、蛋白Eppin及其制备方法”,属于生物技术领域。本发明构建了一个表达载体,在MBP与目标蛋白之间设置有凝血酶酶切位点He-Glu-Gly-Arg,使得蛋白Eppin以MBP融合蛋白...
- 何畏陈惠玲刘威刘东马博温彦
- 文献传递
- 微型计算机大比例尺地图编辑器及数据库转换的设计与实现
- 马博
- 关键词:地图编辑器数据库转换
- 融合蛋白MBP-Eppin、蛋白Eppin及其制备方法
- 本发明涉及“融合蛋白MBP-Eppin、蛋白Eppin及其制备方法”,属于生物技术领域。本发明构建了一个表达载体,在MBP与目标蛋白之间设置有凝血酶酶切位点He-Glu-Gly-Arg,使得蛋白Eppin以MBP融合蛋白...
- 何畏陈惠玲刘威刘东马博温彦
- 文献传递