陈惠玲
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 人Eppin蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达被引量：2
- 2014年
- 目的构建人类附睾蛋白酶抑制剂Eppin蛋白原核表达质粒,诱导、表达与纯化后获得到可溶重组蛋白,并检测其免疫学活性。方法将目的基因克隆到表达载体pMALc,转化大肠杆菌表达菌株Rossetta2-OrigamiB(DE3),用异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。通过Ni-NTA亲和层析柱及Superdex 200分子筛层析进行纯化后,使用Thrombin酶切,并对目标蛋白进行质谱及Western印迹鉴定。结果成功构建pMALc-Eppin重组质粒,诱导后在上清中检测到Mr57 000大小的可溶MBP-Eppin融合蛋白。目标蛋白纯化与酶切后仍可溶,SDS-PAGE分析显示重组Eppin蛋白相对分子质量约15 000。肽指纹图谱分析证实目标蛋白的序列与人Eppin蛋白吻合,Western印迹显示其具有抗原性。结论经过优化,Eppin蛋白可在原核系统中以可溶形式表达,为以后研究该蛋白的生物活性、避孕免疫机制及制备避孕疫苗奠定坚实的基础。
- 陈惠玲刘东马博东亚君何畏刘威
- 关键词：原核表达纯化
- 融合蛋白MBP-Eppin、蛋白Eppin及其制备方法
- 本发明涉及“融合蛋白MBP-Eppin、蛋白Eppin及其制备方法”，属于生物技术领域。本发明构建了一个表达载体，在MBP与目标蛋白之间设置有凝血酶酶切位点He-Glu-Gly-Arg，使得蛋白Eppin以MBP融合蛋白...
- 何畏陈惠玲刘威刘东马博温彦
- 文献传递
- 融合蛋白MBP-Eppin、蛋白Eppin及其制备方法
- 本发明涉及“融合蛋白MBP-Eppin、蛋白Eppin及其制备方法”，属于生物技术领域。本发明构建了一个表达载体，在MBP与目标蛋白之间设置有凝血酶酶切位点He-Glu-Gly-Arg，使得蛋白Eppin以MBP融合蛋白...
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