陈龙
- 作品数：9 被引量：68H指数：4
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- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 刺五加ATP合酶β亚基基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2012年
- [目的]克隆刺五加叶绿体的ATP合酶β亚基cDNA并对其进行生物信息学分析。[方法]根据已知物种叶绿体ATP合酶β亚基基因的序列,设计1对同源引物,通过RT-PCR扩增得到刺五加ATP合酶β亚基cDNA,并对其进行序列比对及结构预测分析。[结果]RT-PCR扩增获得了长1 099 bp的刺五加ATP合酶β亚基cDNA,该基因编码366个氨基酸。序列比对及结构预测分析表明,刺五加ATP合酶β亚基基因编码的氨基酸与水稻的同源性最高,达96.41%。其二级结构中含有171个α螺旋(alpha helix),占46.72%;53个延伸链(extended strand),占14.48%;27个β折叠(beta turn),占7.38%;115个无规则蜷曲(random coil),占31.42%。第262～271位氨基酸为ATP合酶β亚基的标志性位点。整个多肽链无明显的疏水区域,初步认定为亲水性蛋白。[结论]该试验克隆得到的ATP合酶β亚基基因为叶绿体ATP合酶β亚基基因,为研究刺五加能量代谢对植物次生代谢的影响及了解植物ATP合酶的结构与功能提供了必要的信息。
- 曹蕾邢朝斌陈龙梁能松何闪
- 关键词：刺五加克隆
- 刺五加鲨烯合酶基因cDNA的克隆与序列分析被引量：7
- 2012年
- 采用改良的异硫氰酸胍法提取刺五加总RNA,逆转录为cDNA,根据已报道的人参鲨烯合酶基因(squalene synthasegene,SS)cDNA序列设计引物,利用RT-PCR法克隆刺五加SS基因的cDNA序列。克隆得到长度为1258 bp的刺五加SS基因cDNA序列,开放阅读框全长1248 bp,编码415个氨基酸残基,GenBank登录号为HQ456918,与人参的SS1、SS2和SS3氨基酸序列一致性分别为91.73%、97.59%和96.63%。首次分离并报道了刺五加SS基因cDNA序列,为刺五加苷生物合成中关键酶的表达分析及调控机理研究提供参考。
- 龙月红邢朝斌王明艳吴鹏陈龙梁能松何闪
- 关键词：刺五加克隆RT-PCR
- 一株提高刺五加苷E含量内生真菌的鉴定及其作用机制初探被引量：2
- 2012年
- 目的确定分离自刺五加的内生真菌P116-1a的分类地位,并初步明确其提高刺五加苷E含量的作用机制。方法应用形态学及ITS序列分析方法进行鉴定,将菌液回接刺五加浸出液进行发酵培养和将灭活后的菌液注射刺五加后,HPLC法分析刺五加苷含量的变化。结果 P116-1a与Penicillium minioluteum的形态学特征相符,且与其ITS序列同源性最高(98.6%)。在培养早期,活体P116-1a可显著提高刺五加浸出液中刺五加苷E的含量,灭活后其对刺五加苷E含量无显著作用。结论 P116-1a为Penicillium minioluteum,其作用方式为通过调节刺五加苷生物合成关键酶的表达、酶蛋白的活性而提高刺五加苷E的含量。
- 邢朝斌何闪熊亚南吴鹏王明艳陈龙
- 关键词：内生真菌青霉
- 三株提高刺五加苷E含量内生真菌的鉴定及其作用方式分析被引量：4
- 2012年
- 目的:确定自刺五加分离的内生真菌P109-4、P116-1b和P312-1的分类地位,并初步分析其提高刺五加苷E含量的作用方式。方法:应用形态学及18S rDNA序列分析方法进行鉴定,将菌液回接刺五加浸出液进行发酵培养和将灭活后的菌液注射刺五加后,HPLC法分析刺五加苷含量E的变化。结果:P109-4、P116-1b和P312-1分别与尖孢镰孢菌、葡萄座腔菌和角担菌的形态学特征相符,与各对应种属真菌的18S rDNA序列同源性分别高达99.28%、99.76%和97.23%。活体的3株内生真菌能延长刺五加浸出液中刺五加苷E的存在时间,灭活后P312-1可显著提高刺五加苷E的含量,P109-4和P116-1B无显著作用。结论:P109-4为Fusarium oxysporum,P116-1b为Botryosphaeria dothidea,P312-1为Ceratobasidium spp.。P312-1的作用方式为通过菌体某种不被高温破坏的物质提高刺五加苷E的含量,P116-1b和P109-4仅能对已存在的刺五加苷E发挥作用。
- 龙月红何闪熊亚南劳凤云陈龙邢朝斌
- 关键词：内生真菌
- 刺五加GAPDH基因的克隆及序列分析被引量：25
- 2012年
- 目的对刺五加Eleutherococcus senticosus GAPDH基因进行克隆及序列分析,使其成为可用的内参照基因。方法采用改良的异硫氰酸胍法提取刺五加总RNA,运用RT-PCR法克隆GAPDH基因的部分序列,并以其为内参照基因进行半定量PCR。结果克隆了长度为627 bp的刺五加GAPDH基因,推测其编码209个氨基酸,与三七、人参、拟南芥的GAPDH氨基酸序列同源性分别为97%、93%、93%,核苷酸同源性分别为94%、86%、84%。其作为内参照基因的半定量PCR具有良好的扩增效果和重现性。结论首次分离并克隆了刺五加GAPDH cDNA,证实该序列可以作为基因表达分析的内参照基因,为刺五加苷生物合成中关键酶的表达分析及调控机制研究奠定基础。
- 邢朝斌吴鹏陈龙梁能松何闪
- 关键词：刺五加克隆
- 刺五加鲨烯合酶和鲨烯环氧酶基因单核苷酸多态性及其与总皂苷量的相关性研究被引量：16
- 2012年
- 目的筛选刺五加鲨烯合酶(SS)和鲨烯环氧酶(SE)基因存在的单核苷酸多态性(SNP)位点,分析各SNP位点与刺五加总皂苷量的相关性。方法采用分光光度法测定刺五加总皂苷的量,并划分为具有显著差异(P<0.01)的高、低量组;RT-PCR法扩增刺五加SS、SE基因,根据测序结果筛选SNP位点,利用R×C表的χ2检验分析相关关系。结果刺五加SS基因存在6处SNP,其中704 bp位点为错义突变,其他位点为同义突变,各位点均不与刺五加总皂苷量显著相关。SE基因存在9处SNP,其中导致错义突变的164、199、227、232 bp位点及同义突变的279、285 bp位点与刺五加总皂苷量显著相关(P<0.05),其他位点为同义突变,与刺五加总皂苷量间无显著相关性。结论刺五加SS和SE基因存在SNP,SE基因164～285 bp位点的AGAACG与刺五加总皂苷高量组显著相关,TAGTTC与低量组显著相关。
- 邢朝斌劳凤云龙月红梁能松陈龙何闪
- 关键词：鲨烯合酶单核苷酸多态性
- 刺五加内生镰刀霉菌培养基的优化被引量：1
- 2011年
- ①目的筛选出一种适合提高刺五加苷含量的内生镰刀霉菌P109-4生长的培养基。②方法将P109-4接种于6种基础培养基中,30℃下培养,对其生长状况进行观察,并在12、24、36、48、60、72h时段测量菌落大小。筛选出一种长速率最快的的培养基。再对其进行改良找到能使P109-4生长最快的培养基。③结果 P109-4在6种基本培养中生长状况明显不同,30℃培养72h后内生菌在牛肉膏蛋白胨、高氏一号、查氏培养基、PDA培养基、乳糖牛肉膏蛋白胨培养基、LC培养基的生长直径分别为4.00、3.70、3.75、3.90、3.20、3.20、3.63 cm。在改良牛肉膏蛋白胨培养基试验中,培养72h后牛肉膏蛋白胨培养基、改良牛肉膏蛋白胨培养基1号、改良牛肉膏蛋白胨培养基2号生长直径分别为3.30、3.45、3.20 cm。④结论经过72h菌落直径的比较,刺五加内生镰刀霉菌在改良牛肉膏蛋白胨培养基1号,生长速率更快。
- 陈龙邢朝斌
- 关键词：刺五加培养基优化
- 刺五加鲨烯环氧酶基因cDNA的克隆及序列分析被引量：18
- 2012年
- 目的:对刺五加鲨烯环氧酶基因的cDNA进行克隆及序列分析。方法:采用改良的异硫氰酸胍法提取刺五加总RNA,逆转录为cDNA,根据已报道的人参SE基因cDNA序列设计引物,利用RT-PCR法克隆刺五加SE基因的cDNA序列。结果:克隆了2个序列不同的cDNA(SE1和SE2),开放阅读框分别长1 665,1 629 bp,分别编码554,542个氨基酸。SE1,SE2间的核苷酸和氨基酸一致性分别为91.49%,92.55%,两者与三七SE1的氨基酸序列相似性最高,分别为93.45%,94.87%。SE1,SE2均含有1个FAD结合区域,SE1,SE2推测的氨基酸分别存在2个和4个跨膜螺旋。结论:首次分离并报道了刺五加的2个SE基因cDNA序列,为刺五加的次生代谢工程研究奠定了基础。
- 邢朝斌曹蕾陈龙何闪李宝财朱金丽
- 关键词：刺五加克隆RT-PCR
- 刺五加ATP合酶β亚基基因的克隆与序列分析(英文)
- 2011年
- [目的]克隆刺五加叶绿体的ATP合酶β亚基cDNA并对其进行生物信息学分析。[方法]根据已知物种叶绿体ATP合酶β亚基基因的序列,设计1对同源引物,通过RT-PCR扩增得到刺五加ATP合酶β亚基cDNA,并对其进行序列比对及结构预测分析。[结果]RT-PCR扩增获得了长1099bp的刺五加ATP合酶β亚基cDNA,该基因编码366个氨基酸。序列比对及结构预测分析表明,刺五加ATP合酶β亚基基因编码的氨基酸与水稻的同源性最高,达96.41%。其二级结构中含有171个α螺旋(alpha helix),占46.72%;53个延伸链(extended strand),占14.48%;27个β折叠(beta turn),占7.38%;115个无规则蜷曲(random coil),占31.42%。第262～271位氨基酸为ATP合酶β亚基的标志性位点。整个多肽链无明显的疏水区域,初步认定为亲水性蛋白。[结论]该试验克隆得到的ATP合酶β亚基基因为叶绿体ATP合酶β亚基基因,为研究刺五加能量代谢对植物次生代谢的影响及了解植物ATP合酶的结构与功能提供了必要的信息。
- 曹蕾邢朝斌陈龙梁能松何闪
- 关键词：刺五加克隆
