何闪
- 作品数：24 被引量：151H指数：9
- 供职机构：河北联合大学更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金国家自然科学基金石药集团医药联合研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 刺五加ATP合酶β亚基基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2012年
- [目的]克隆刺五加叶绿体的ATP合酶β亚基cDNA并对其进行生物信息学分析。[方法]根据已知物种叶绿体ATP合酶β亚基基因的序列,设计1对同源引物,通过RT-PCR扩增得到刺五加ATP合酶β亚基cDNA,并对其进行序列比对及结构预测分析。[结果]RT-PCR扩增获得了长1 099 bp的刺五加ATP合酶β亚基cDNA,该基因编码366个氨基酸。序列比对及结构预测分析表明,刺五加ATP合酶β亚基基因编码的氨基酸与水稻的同源性最高,达96.41%。其二级结构中含有171个α螺旋(alpha helix),占46.72%;53个延伸链(extended strand),占14.48%;27个β折叠(beta turn),占7.38%;115个无规则蜷曲(random coil),占31.42%。第262～271位氨基酸为ATP合酶β亚基的标志性位点。整个多肽链无明显的疏水区域,初步认定为亲水性蛋白。[结论]该试验克隆得到的ATP合酶β亚基基因为叶绿体ATP合酶β亚基基因,为研究刺五加能量代谢对植物次生代谢的影响及了解植物ATP合酶的结构与功能提供了必要的信息。
- 曹蕾邢朝斌陈龙梁能松何闪
- 关键词：刺五加克隆
- 刺五加HMGR基因的克隆与表达分析被引量：7
- 2012年
- 根据已报道的人参HMGR(3-羟基-3-甲基戊二酰CoA还原酶)基因cDNA序列设计引物,利用cDNA末端快速扩增(Rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆刺五加HMGR基因的全长cDNA序列。运用生物信息学方法对该基因进行分析。通过RT-PCR法检测HMGR在刺五加不同生长发育时期和不同器官中的表达情况。结果克隆到长度为2 217 bp的刺五加HMGR基因cDNA序列,开放阅读框全长1 713 bp,编码570个氨基酸残基,包含HMGR家族的特异性识别序列。HMGR蛋白存在2个跨膜区域。RT-PCR结果显示,刺五加HMGR基因在各生长发育时期和器官中均有表达,但表达量具有显著差异,其中萌芽期的表达量最高,盛花期最低;各器官中,幼茎中表达量最高,是根中的1.58倍。
- 邢朝斌吴鹏龙月红何闪修乐山
- 关键词：刺五加克隆RT-PCR
- 刺五加鲨烯合酶基因cDNA的克隆与序列分析被引量：7
- 2012年
- 采用改良的异硫氰酸胍法提取刺五加总RNA,逆转录为cDNA,根据已报道的人参鲨烯合酶基因(squalene synthasegene,SS)cDNA序列设计引物,利用RT-PCR法克隆刺五加SS基因的cDNA序列。克隆得到长度为1258 bp的刺五加SS基因cDNA序列,开放阅读框全长1248 bp,编码415个氨基酸残基,GenBank登录号为HQ456918,与人参的SS1、SS2和SS3氨基酸序列一致性分别为91.73%、97.59%和96.63%。首次分离并报道了刺五加SS基因cDNA序列,为刺五加苷生物合成中关键酶的表达分析及调控机理研究提供参考。
- 龙月红邢朝斌王明艳吴鹏陈龙梁能松何闪
- 关键词：刺五加克隆RT-PCR
- 刺五加GAPDH基因的克隆及序列分析被引量：25
- 2012年
- 目的对刺五加Eleutherococcus senticosus GAPDH基因进行克隆及序列分析,使其成为可用的内参照基因。方法采用改良的异硫氰酸胍法提取刺五加总RNA,运用RT-PCR法克隆GAPDH基因的部分序列,并以其为内参照基因进行半定量PCR。结果克隆了长度为627 bp的刺五加GAPDH基因,推测其编码209个氨基酸,与三七、人参、拟南芥的GAPDH氨基酸序列同源性分别为97%、93%、93%,核苷酸同源性分别为94%、86%、84%。其作为内参照基因的半定量PCR具有良好的扩增效果和重现性。结论首次分离并克隆了刺五加GAPDH cDNA,证实该序列可以作为基因表达分析的内参照基因,为刺五加苷生物合成中关键酶的表达分析及调控机制研究奠定基础。
- 邢朝斌吴鹏陈龙梁能松何闪
- 关键词：刺五加克隆
- 刺五加甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶基因的克隆与表达分析被引量：11
- 2012年
- 利用RACE技术克隆刺五加甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶(mevalonate diphosphate decarboxylase,MDD)基因的全长cDNA序列,运用生物信息学方法对该基因进行分析,并通过RT-PCR法检测MDD在刺五加不同生长发育时期和不同器官中的表达情况。结果表明:(1)刺五加MDD基因cDNA序列全长1 769bp(GenBank登录号为JQ905594),开放阅读框全长1 263bp,编码420个氨基酸残基,包含GHMP激酶超家族的特异性识别序列;刺五加MDD蛋白的二级结构中含有161个α螺旋,占38.33%;68个延伸链,占16.19%;19个β折叠,占4.52%;172个无规则卷曲,占40.95%;刺五加MDD蛋白无跨膜区域,定位于膜外。(2)刺五加MDD基因在不同生长发育时期和器官中均有表达,但表达量具有显著差异(P<0.05)。在整个生长期中,MDD的表达呈现高-低-高-低的变化趋势,第一个表达高峰出现在萌芽期至叶片完全展开时,第二个高峰出现在果实体积快速增长期,最高表达量(叶片完全展开期)为最低表达量(叶片衰老期)的4.51倍;不同器官中,幼茎的表达量最高,为最低表达量(叶片)的7.22倍,但叶片、叶柄和根中的表达量差异不显著。研究结果为阐明刺五加皂苷的生物合成及对其进行表达调控奠定了基础。
- 邢朝斌龙月红何闪周秘修乐山
- 关键词：刺五加
- 应用SEFA-PCR扩增刺五加内生青霉鲨烯合酶基因的旁邻序列
- 2012年
- ①目的克隆刺五加内生青霉Penicillium minioluteum P116-1a鲨烯合酶(squalene synthase,SS)基因的旁邻序列。②方法根据已经获得的P.minioluteum P116-1a SS DNA序列设计特异性性引物,采用SEFA-PCR(self-formed adaptor PCR)扩增其3'和5'末端未知序列。③结果 3'末端扩增获得长约5 000 bp的片段,5'末端扩增获得长约3 000bp的片段。④结论首次应用SEFA-PCR技术扩增获得P.minioluteum P116-1a SS基因的末端序列,为进一步研究该基因对刺五加皂苷含量的作用机制奠定了基础。
- 朱金丽何闪周秘修乐山邢朝斌
- 关键词：染色体步移
- 内生真菌对刺五加皂苷合成关键酶基因表达及皂苷含量的影响被引量：17
- 2012年
- 目的:分析刺五加内生真菌菌株P116-1a,P116-1b,P109-4,P312-1对刺五加中皂苷合成关键酶基因SS(squalenesynthase),SE(squalene epoxidase),bAS(β-amyrin synthase)表达量和皂苷含量的影响。方法:伤口法回接内生真菌。以GAPDH为内参照基因,Real time PCR法检测关键酶基因表达量的变化。分光光度法测定刺五加的总皂苷含量。结果:回接P116-1a和P116-1b 30 d,刺五加SS基因的表达量显著提高(P<0.05),P109-4和P312-1无显著变化,之后出现降低-相等-降低的变化趋势。回接菌株P312-1 30 d,刺五加SE的表达量显著提升(P<0.05),回接菌株P116-1b和P312-1 90 d,SE的表达量分别显著提升至对照的130%,161%(P<0.05)。回接120 d,4个菌株处理的SE表达量均显著高于对照(P<0.05)。各处理bAS的表达量在回接60～120 d时均显著高于对照(P<0.05)。4个菌株均显著提高了刺五加的皂苷含量(P<0.05)。结论:菌株P116-1a,P116-1b,P109-4,P312-1可显著影响刺五加SS,SE,bAS的表达量,进而影响刺五加的皂苷含量,其中bAS为主要靶点基因。
- 邢朝斌龙月红劳凤云何闪梁能松李宝财
- 关键词：刺五加内生真菌关键酶基因
- 刺五加Cu/Zn SOD的克隆及内生真菌对其表达的影响被引量：3
- 2013年
- 利用RACE技术从刺五加(Eleutherococcus senticosus Harms)中克隆到铜锌型超氧化物歧化酶基因(Cu/Zn SOD)的cDNA序列。获得的刺五加Cu/Zn SOD的cDNA长641 bp。基因内部含有1个长度为459 bp的开放阅读框,编码长度为152个氨基酸残基的蛋白质,预测分子质量为15.162 ku,理论等电点为5.29。刺五加Cu/Zn SOD氨基酸序列与其它植物的Cu/Zn SOD具有很高的相似性。相对定量RT-PCR的结果表明,回接内生真菌菌株P116-1a、P116-1b、P109-4和P312-1后可显著提高刺五加Cu/Zn SOD基因的表达量(P<0.05),最大表达量出现在菌株P312-1回接60 d时,达对照的4.99倍。
- 邢朝斌龙月红李宝财何闪梁能松朱金丽
- 关键词：刺五加铜锌超氧化物歧化酶克隆内生真菌
- 刺五加法尼基焦磷酸合酶基因的克隆、生物信息学及表达分析被引量：23
- 2012年
- 目的:克隆刺五加的法尼基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)基因,并对其进行生物信息学和表达分析。方法:采用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆刺五加FPS基因的全长cDNA序列。运用生物信息学方法对该基因进行分析,预测其编码蛋白的结构与功能。并通过RT-PCR法检测FPS在不同器官中的表达情况。结果:刺五加FPS基因的cDNA全长为1 499 bp,开放阅读框长1 029 bp,编码342个氨基酸的蛋白,包含2个富含天冬氨酸(DDXXD)的保守功能域。FPS蛋白无跨膜区域,定位于细胞质中。RT-PCR的结果显示,刺五加FPS基因在各器官中均有表达,但表达量具有显著差异(P<0.05)。结论:首次分离并报道了刺五加FPS的cDNA克隆,并证实其在不同器官中的表达量不同,为进一步研究FPS对刺五加皂苷合成的影响和表达调控奠定了基础。
- 邢朝斌龙月红何闪梁能松李宝财
- 关键词：刺五加克隆
- 刺五加内生青霉鲨烯合酶基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2012年
- 【目的】克隆刺五加内生青霉Penicillium minioluteum P116-1a的鲨烯合酶(Squalene synthase,SS)基因。【方法】采用cDNA 5末端快速扩增(Rapid Amplification ofcDNA 5 Ends,5 RACE)技术扩增P.minioluteum P116-1a SS基因的全长cDNA序列和DNA序列;运用生物信息学方法对该基因进行分析,预测其编码蛋白的结构与功能;并通过RT-PCR法和SDS-PAGE法检测SS的表达情况。【结果】P.minioluteum P116-1a的SS基因含有4个外显子和3个内含子,开放阅读框长1 416 bp,编码471个氨基酸,预测蛋白含67.73%的α螺旋,5.31%的延伸链,2.97%的β折叠,23.99%的无规则卷曲,含有鲨烯合酶和八氢番茄红素合成酶的特异性识别区域,定位于内质网膜。与P.marneffei和Talaromyces stipitatus中SS蛋白的氨基酸同源性达90%以上。不同温度下SS的表达情况不同。【结论】首次在刺五加内生青霉P.minioluteum P116-1a中克隆到SS基因,为进一步研究P.minioluteum P116-1a提高刺五加皂苷含量的机制奠定基础。
- 邢朝斌何闪朱金丽龙月红梁能松李宝财
- 关键词：PENICILLIUM鲨烯合酶
