郭鹭
- 作品数：4 被引量：12H指数：3
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划项目黑龙江省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鹅细小病毒野毒株VP3基因的原核表达及抗原性检测被引量：7
- 2009年
- 根据发表的鹅细小病毒(GPV)基因序列设计合成了2对检测GPV的特异性引物,用其对疑似小鹅瘟的病料进行PCR检测,经序列比对后确定为GPV感染;利用引物Gs/Ga扩增获得的GPV野毒株VP3基因,测序后将VP3基因连接到原核表达载体pET-30a上,获得重组质粒pET-30a-VP3,将其转化感受态菌Rosetta(DE3)pLysS中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析。结果显示,重组菌可表达出分子质量约为66 000 u的重组融合蛋白,表达的蛋白以包涵体形式存在于菌体中。表达产物经Ni2+亲和层析柱纯化,获得了纯度较高的目的蛋白。Western-blot分析结果显示,纯化的蛋白能与GPV阳性血清发生特异性反应,证实表达的蛋白具有较好的抗原性。
- 鞠环宇卫娜尚绪增荆志强郭鹭马波王君伟
- 关键词：鹅细小病毒VP3基因原核表达纯化抗原性
- 抗鹅细小病毒VP3蛋白单克隆抗体的制备及对应抗原表位的定位
- 小鹅瘟（Goslingplague，GP）又名鹅细小病毒病，是由鹅细小病毒（GooseParvovirus，GPV）引起雏鹅、雏番鸭以急性肠炎及肝、肾、心实质器官炎症为特征的烈性传染病。GPV的致病性强，致死率高，对养鹅...
- 郭鹭
- 关键词：鹅细小病毒单克隆抗体抗原表位
- 文献传递
- 鹅细小病毒VP3蛋白B细胞线性表位的精确定位被引量：3
- 2010年
- 本试验旨在利用获得的4株抗鹅细小病毒(GPV)VP3的单克隆抗体,进一步对GPV VP3 B细胞线性抗原表位精确定位。根据笔者实验室已鉴定的线性抗原表位区结果,筛选出单抗所针对的优势抗原表位区。设计并合成互相重叠5 aa的10 aa短肽寡聚核酸片段,退火后,连入pET-32a载体,经转化鉴定,诱导表达后,获得相应的小片段融合蛋白,并利用单抗通过Western blot进行抗原性鉴定。同样方法进行短肽片段两端氨基酸的逐个缺失设计,进一步精确定位,结果鉴定出2个抗原表位,分别为430-435 aa和643-647 aa。
- 郭鹭鞠环宇于天飞荆志强马波王君伟
- 关键词：鹅细小病毒VP3蛋白单克隆抗体
- 抗鹅细小病毒VP3蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：3
- 2010年
- 利用已构建好的pET-30a重组菌E.coli Rosetta(DE3)表达鹅细小病毒(GPV)VP3重组蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化后作为免疫原,经腹膜腔接种4～6周龄BALB/c小鼠3次,末次免疫后第3d取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合。用建立的间接ELISA方法进行筛选,经4次亚克隆,最终获得4株能稳定分泌抗GPVVP3单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1F1、2A9、3B11和4A2。亚类鉴定结果显示,单抗1F1为IgG2b亚型,其余3株单抗为IgG1亚型,轻链均为κ链。经间接ELISA检测,单抗1F1、2A9、3B11和4A2的腹水效价分别为1:819200、1:1638400、1:409600和1:819200。Western-blot分析表明,获得的4株单克隆抗体均能特异性识别GPVVP3重组蛋白;间接免疫荧光试验证明,这4株单抗能够与天然GPV结合。
- 郭鹭荆志强李俚鞠环宇马波王君伟
- 关键词：鹅细小病毒单克隆抗体
