鞠环宇
- 作品数：11 被引量：20H指数：3
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划黑龙江省科技攻关计划项目黑龙江省“十五”科技攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鹅细小病毒野毒株VP3基因的原核表达及抗原性检测被引量：7
- 2009年
- 根据发表的鹅细小病毒(GPV)基因序列设计合成了2对检测GPV的特异性引物,用其对疑似小鹅瘟的病料进行PCR检测,经序列比对后确定为GPV感染;利用引物Gs/Ga扩增获得的GPV野毒株VP3基因,测序后将VP3基因连接到原核表达载体pET-30a上,获得重组质粒pET-30a-VP3,将其转化感受态菌Rosetta(DE3)pLysS中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析。结果显示,重组菌可表达出分子质量约为66 000 u的重组融合蛋白,表达的蛋白以包涵体形式存在于菌体中。表达产物经Ni2+亲和层析柱纯化,获得了纯度较高的目的蛋白。Western-blot分析结果显示,纯化的蛋白能与GPV阳性血清发生特异性反应,证实表达的蛋白具有较好的抗原性。
- 鞠环宇卫娜尚绪增荆志强郭鹭马波王君伟
- 关键词：鹅细小病毒VP3基因原核表达纯化抗原性
- 鹅细小病毒PCR检测方法的建立及初步应用被引量：2
- 2012年
- 根据GenBank中鹅细小病毒(GPV)的7株全基因序列,在相对保守的NS区域设计了一对引物,以GPV-98E株鹅胚尿囊液的核酸提取物为模板,经优化反应条件,建立了特异性检测GPV的PCR方法。敏感性试验结果显示,该方法对GPV核酸的最小检出量为4.194 pg,尿囊液的最小检出量为3.09个ELD50;特异性试验结果显示,采用该方法检测GPV能够扩增出与预期大小相符的476 bp的特异性片段,而对作为对照的鸭瘟病毒(DPV)、禽流感病毒(AIV)、鹅副粘病毒(GPMV)的核酸均未扩增出任何条带。在临床检测中,对52份雏鹅的心、肝、肠等组织进行PCR扩增,能够检测到相应的特异性病毒核酸片段,表明建立的鹅细小病毒PCR检测方法具有敏感性高、特异性强的特点,具有潜在的临床应用价值。
- 王倩鞠环宇荆志强李彦伟王春媛马波王君伟
- 关键词：鹅细小病毒PCR
- 鹅IL-2成熟基因的表达及重组蛋白生物活性检测
- 2009年
- 从PHA活化的东北白鹅外周血淋巴细胞中分离提取总RNA,利用反转录PCR技术扩增获得鹅IL-2(GoIL-2)基因,连接至克隆载体后进行测序鉴定,结果与预期大小一致。将去除信号肽的成熟基因亚克隆至原核表达载体,构建原核重组表达质粒并转化至大肠杆菌中进行诱导表达,用表达纯化的融合蛋白制备多克隆抗血清。此外,体外淋巴细胞增殖实验结果显示,鹅GoIL-2重组蛋白具有促进淋巴细胞增殖的活性,这为进一步研究GoIL-2的功能奠定了基础。
- 卫娜鞠环宇王君伟
- 关键词：白细胞介素-2克隆多克隆抗体生物活性
- 鹅细小病毒VP3蛋白B细胞线性表位的精确定位被引量：3
- 2010年
- 本试验旨在利用获得的4株抗鹅细小病毒(GPV)VP3的单克隆抗体,进一步对GPV VP3 B细胞线性抗原表位精确定位。根据笔者实验室已鉴定的线性抗原表位区结果,筛选出单抗所针对的优势抗原表位区。设计并合成互相重叠5 aa的10 aa短肽寡聚核酸片段,退火后,连入pET-32a载体,经转化鉴定,诱导表达后,获得相应的小片段融合蛋白,并利用单抗通过Western blot进行抗原性鉴定。同样方法进行短肽片段两端氨基酸的逐个缺失设计,进一步精确定位,结果鉴定出2个抗原表位,分别为430-435 aa和643-647 aa。
- 郭鹭鞠环宇于天飞荆志强马波王君伟
- 关键词：鹅细小病毒VP3蛋白单克隆抗体
- 抗鹅细小病毒VP3蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：3
- 2010年
- 利用已构建好的pET-30a重组菌E.coli Rosetta(DE3)表达鹅细小病毒(GPV)VP3重组蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化后作为免疫原,经腹膜腔接种4～6周龄BALB/c小鼠3次,末次免疫后第3d取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合。用建立的间接ELISA方法进行筛选,经4次亚克隆,最终获得4株能稳定分泌抗GPVVP3单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1F1、2A9、3B11和4A2。亚类鉴定结果显示,单抗1F1为IgG2b亚型,其余3株单抗为IgG1亚型,轻链均为κ链。经间接ELISA检测,单抗1F1、2A9、3B11和4A2的腹水效价分别为1:819200、1:1638400、1:409600和1:819200。Western-blot分析表明,获得的4株单克隆抗体均能特异性识别GPVVP3重组蛋白;间接免疫荧光试验证明,这4株单抗能够与天然GPV结合。
- 郭鹭荆志强李俚鞠环宇马波王君伟
- 关键词：鹅细小病毒单克隆抗体
- 抗鹅细小病毒NS1蛋白单链抗体的构建、表达及活性初步鉴定被引量：1
- 2009年
- 王锐鞠环宇王兆鹏卫娜霍慧仇铮马波王君伟
- 关键词：鹅细小病毒单链抗体活性核苷酸组成病毒分类
- 鹅源新城疫病毒HN基因在Bac to Bac系统中的表达及抗原性检测被引量：2
- 2010年
- 血凝素-神经氨酸酶蛋白(Haemagglutinin Neuramindase,HN)是鹅源新城疫病毒诱导体液免疫的重要靶抗原。经pMD18-T-HN阳性质粒扩增了HN基因,扩增的片段亚克隆到转座载体pFastHTb中构建重组转座载体pFastHTb-HN。将其转化到DH10Bac感受态细胞中,得到重组杆粒rBacmid-HN,重组杆粒rBacmid-HN转染sf9昆虫细胞,收获的重组病毒盲传两代。PCR鉴定重组病毒,获得的重组杆状病毒命名为rBv-HN。经间接免疫荧光(IFA)和SDS-PAGE鉴定,获得的重组杆状病毒rBv-HN在sf9昆虫细胞中获得表达,且表达的蛋白大小为75ku左右,与理论值相当。Western blot和Dot-ELISA检测结果表明,表达的蛋白可与鸡抗NDV血清发生特异性抗原反应,证实所表达的蛋白具有良好的反应原性。
- 杨雪晶鞠环宇高明春马波王君伟
- 关键词：HN基因BACBAC抗原性
- 鹅细小病毒NS2蛋白间接ELISA方法的建立被引量：4
- 2010年
- 为建立检测鹅细小病毒(GPV)的间接ELISA方法,本研究表达了GPV重组NS2蛋白,并以Ni-NTA亲和层析柱纯化的蛋白作为检测抗原,建立间接ELISA检测方法,并进行抗体消长规律的检测。用该方法检测阴性血清样本30份,确定检测临界值为0.281。与琼脂扩散试验结果的阳性符合率为100%,阴性符合率为86.67%。与抗鹅H5、H7、H9亚型禽流感病毒阳性血清和抗鹅副粘病毒阳性血清无交叉反应。在此基础上组装检测试剂盒,试剂盒批内变异系数为4.2%,批间变异系数为8.3%,包被抗原的酶标板在4℃可保存6个月。该方法对人工感染GPV血清检测结果表明,接种病毒后第8周,NS2蛋白的抗体水平达到峰值。本研究为GPV流行病学调查提供了一种快速、方便、敏感的抗体检测方法。
- 尚绪增张雅为王兆鹏鞠环宇马波王君伟
- 关键词：小鹅瘟间接ELISA
- 鹅细小病毒VP3基因植物表达载体的构建及对烟草的遗传转化
- 鞠环宇
- 关键词：鹅细小病毒VP3基因烟草植物表达载体
- 重组鸡痘病毒rFPV-VP3-F的遗传稳定性及在鸡体内的表达被引量：1
- 2009年
- 为了评价重组禽痘病毒rFPV-VP3-F的遗传稳定性,将rFPV-VP3-F在鸡胚成纤维细胞(CEF)连续培养20代。对第5、10、15和20代病毒的F基因进行扩增及序列分析,未发现F基因发生氨基酸改变;通过间接免疫荧光方法检测各个代次rFPV-VP3-F中F基因特异表达的情况;将rFPV-VP3-F和禽痘病毒FPV017分别接种于35日龄商品鸡,在免疫后第7、14、21、28、35 d采集各组血清,检测中和抗体效价。结果显示,F基因在重组禽痘病毒中可以稳定遗传,可在CEF中表达相应蛋白,可刺激鸡产生相应的抗体。
- 李丹王君伟于志丹赵妍尚绪增鞠环宇杨雪晶
- 关键词：重组鸡痘病毒中和抗体
