郭跃
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 供职机构：辽宁医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 大鼠ZnT1基因siRNA慢病毒载体构建及筛选被引量：1
- 2012年
- 目的:构建并筛选针对SD大鼠锌离子转运体1(ZnT1)的siRNA慢病毒载体。并检测其在大鼠神经元中的作用。方法:设计并合成针对ZnT1基因的3条(A,B,C)siRNA序列与1条阴性对照序列,将以上序列退火与pFU-GW-iRNA质粒相连接,通过测序鉴定后,分别与慢病毒包装质粒共感染293T细胞,检测收获病毒滴度后感染体外培养的SD大鼠脑皮层神经细胞,设置感染复数(MOI)分别为1,3,6,8,于转染后72 h计算转染效率。在最佳MOI值下,设置未经病毒感染组(CON组)、阴性对照病毒感染组(NC组)和慢病毒阳性干扰组(ZnT1-siR-NA-A组,ZnT1-siRNA-B组,ZnT1-siRNA-C组),72 h后利用Western blot技术检测ZnT1的表达情况,确定对ZnT1蛋白的最有效的干扰序列与抑制效率。结果:测序证实目的干扰序列已被准确克隆到pFU-GW-iRNA质粒,收获的慢病毒颗粒滴度为8×108TU/ml,其在MOI=6时对神经细胞的转染效率最高(93%),并保持神经细胞良好的生存状态。转染后ZnT1的表达被不同程度的抑制,A,B,C三种干扰序列对ZnT1的抑制率分别为47.74%±1.40%,81.19%±1.36%,94.10%±2.41%。结论:成功构建了ZnT1-siRNA慢病毒载体,其在MOI=6时对神经细胞具有最佳的转染效率,并有效沉默神经细胞中ZnT1蛋白的表达。
- 房师强梅晰凡袁亚江郭占鹏郭跃曾锦浩王岩松尹海楠
- 关键词：SIRNA慢病毒载体GFP
- 补阳还五汤对大鼠肌源性干细胞体外生长分化的影响被引量：4
- 2015年
- 目的观察补阳还五汤含药血清对体外培养的大鼠乳鼠肌源性干细胞生长及分化的影响。方法取3 d内大鼠乳鼠骨骼肌,分离纯化肌源性干细胞,分别接种在含对照血清培养基和含药血清培养基的培养孔内,观察细胞形态变化;通过免疫荧光法和Western blot对2组细胞的神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达进行对比分析。结果药物血清组中的细胞可见多边形改变类似神经样突起,而对照组细胞呈纺锤状;药物血清组中细胞的NSE和GFAP表达均明显高于对照组(P<0.05)。结论补阳还五汤含药血清可促进肌源性干细胞向神经元样细胞分化。
- 郭占鹏刘堃黄米娜王岩松袁亚江郭跃刘安琪梅晰凡
- 关键词：肌源性干细胞补阳还五汤
- 甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤节段炎性细胞因子和自噬因子表达的影响被引量：3
- 2014年
- 目的:探究脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后应用甲基强的松龙(methylprednisolone,MP)治疗对损伤脊髓节段中的炎性细胞因子IL-6、IL-10和自噬因子LC3B表达的影响。方法:采用改良Allen氏法建立大鼠脊髓(T10)损伤模型,60只SD雌性大鼠随机分为假手术组(n=20)、手术组(n=20)和MP组(n=20)。MP组于SCI后立刻经尾静脉给予MP(30 mg/kg),假手术组只打开椎板不损伤脊髓。分别于损伤后4 h、12 h、1 d、3 d和7 d取材,采用半定量RT-PCR方法检测损伤段脊髓组织中炎症因子IL-6、IL-10 mRNA和自噬因子LC3B mRNA的表达变化。结果:假手术组动物脊髓组织中IL-6、IL-10、LC3B mRNA的表达微弱。手术组的IL-6、IL-10、LC3B mRNA的表达均在损伤后4 h开始明显升高,于损伤后1 d达最高峰值,之后逐渐降低(P﹤0.05)。手术组的LC3B与IL-6和IL-10的表达呈现相似的趋势,IL-6、IL-10均与LC3B呈正相关。MP组的IL-6、IL-10、LC3B mRNA的表达在损伤后12 h开始明显受到抑制,到1 d时达最低值,7 d时LC3B mRNA的表达仍低于手术组(P﹤0.05),MP组的LC3B与IL-6和IL-10的表达也是呈现相似的趋势,IL-6、IL-10也均与LC3B呈正相关。结论:大鼠脊髓损伤后应用甲基强的松龙可以通过抑制炎症而抑制损伤节段的自噬活动。
- 柏亮杰梅晰凡袁亚江郭占鹏房师强曾锦浩郭跃
- 关键词：脊髓损伤自噬炎症
