薛雯雯
- 作品数：10 被引量：68H指数：5
- 供职机构：河南工业大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家自然科学基金郑州市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 枯草杆菌B_s501抗稻瘟病菌条件优化被引量：6
- 2007年
- [目的]提高枯草芽孢杆菌的拮抗作用。[方法]通过正交试验和单因素试验研究了枯草杆菌Bs501的发酵基础培养基和最适发酵条件,明确了几丁质的添加量及添加时机,分析了二价金属离子对枯草杆菌发酵液的影响。[结果]枯草杆菌在LB培养基上培养12 h达到对数生长末期,随后生长曲线快速下降,56 h出现小波峰。各因子对枯草杆菌Bs501生长量的影响为蛋白胨>蔗糖>酵母膏>K2HPO4,它们对枯草杆菌Bs501的抑菌活性为蔗糖>蛋白胨>酵母膏>K2HPO4。最佳基础培养基确定为3%蔗糖、1%蛋白胨、0.5%酵母膏0、.45%K2HPO4。最适发酵条件为:起始pH值7.0、培养温度30℃、发酵时间48 h。培养12 h添加0.5%几丁质诱导枯草芽孢杆菌Bs501产生拮抗物质的效果最显著。Ca2+可显著提高发酵液的抑菌活性。[结论]该研究为枯草芽孢杆菌的工业深层发酵提供了技术参考。
- 李瑞芳徐怡薛雯雯张志杰
- 关键词：枯草芽孢杆菌稻瘟病菌发酵条件优化抗菌效果
- 一株芽孢杆菌16SrRNA的基因序列测定和系统进化分析被引量：10
- 2011年
- 从河南黄河稻区土壤中分离出一株具有较强稻瘟病菌拮抗活性的芽孢杆菌菌株BS501,经过形态观察、生理生化特性检测和电镜技术,确定其为芽孢杆菌属细菌。为进一步确定其分类学地位,扩增了BS501基因组的16S rDNA,并将测序结果提交GenBank数据库(登录号:FJ755787)。利用BLAST软件将该序列与枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌等芽孢菌属细菌及大肠杆菌16S rDNA序列进行同源性比对。系统进化树表明,BS501与芽孢菌属细菌在进化关系上组成一个大的分支,与枯草芽孢杆菌最为接近,与大肠杆菌较远。同源性分析表明该序列与枯草芽孢杆菌PRE23同源性达99%,证实该菌株的分类学地位为枯草芽孢杆菌。
- 李瑞芳赵玉峰薛雯雯田泱源张长付
- 关键词：芽孢杆菌基因测序系统进化分析
- 抗真菌活性肽段CGA-N46的免疫学鉴定及其高效表达条件研究被引量：1
- 2008年
- [目的]嗜铬粒蛋白Chromogranin AN端31-76位氨基酸组成的多肽CGA-N46具有较强的抗真菌活性,对其表达条件进行研究具有重要意义。[方法]将CGA-N46基因重组大肠杆菌BL21(DE3,pET-N46)接种于含有氨苄青霉素的2×YT培养基中,于37℃、230r/min振荡培养3 h后加入诱导剂IPTG至终浓度1 mmol/L,25℃条件下诱导6 h,离心收集菌体进行SDS-PAGE蛋白电泳。利用抗6-His的单克隆抗体进行免疫印迹,结果有免疫印迹条带,但表达量不高。鉴于此,对CGA-N46基因的表达条件进行了优化。[结果]在37℃下培养3 h后加入IPTG25℃诱导9 h,目的蛋白表达量较高,当诱导剂IPTG的浓度超过0.4 mmol/L时,其浓度的改变对目的蛋白的表达没有多大影响。
- 李瑞芳薛雯雯赵玉峰
- 关键词：免疫印迹
- CGA-N46基因大肠杆菌工程菌的构建与表达被引量：2
- 2008年
- 嗜铬粒蛋白N端31-76位氨基酸组成的多肽CGA-N46具有很强的抑制白念珠菌活性,具有重要的研究价值。通过基因工程技术构建了能表达CGA-N46蛋白的大肠杆菌工程菌BL21(DE3,pET-N46),诱导表达后,进行SDS-PAGE及western-blotting。结果表明在IPTG诱导下,CGA-N46蛋白基因在BL21(DE3,pET-N46)中获得表达,表达产物主要以可溶性蛋白的形式存在。
- 李瑞芳薛雯雯
- 关键词：大肠杆菌工程菌
- 一种多顺反子表达载体构建方法
- 一种多顺反子表达载体构建方法，利用商品化T－载体作为中间载体，设计两对引物，在引物中引入NheI和SpeI酶切位点及核糖体结合位点(RBS)，将扩增产物与T－载体相连，所得重组T－载体用NdeI+NheI、NdeI+Sp...
- 李瑞芳薛雯雯
- 文献传递
- 一种多顺反子表达载体构建方法
- 一种多顺反子表达载体构建方法，利用商品化T-载体作为中间载体，设计两对引物，在引物中引入NheI和SpeI酶切位点及核糖体结合位点(RBS)，将扩增产物与T-载体相连，所得重组T-载体用NdeI+NheI、NdeI+Sp...
- 李瑞芳薛雯雯
- 文献传递
- 具有稻瘟病菌拮抗活性的枯草芽孢杆菌的分离与鉴定被引量：9
- 2010年
- 采用梯度稀释分离法,从黄河稻区水稻根际土壤中分离出耐高温芽孢菌722株。通过真菌生长抑制试验,获得具有稻瘟病菌拮抗活性的菌株27株。通过形态学观察和生理生化指标鉴定,获得具有稻瘟病菌拮抗活性的枯草芽孢杆菌疑似菌株7株。挑取其中抑菌活性最强的1株进行16SrDNA鉴定,将其16SrDNA基因序列与GenBank中基因序列进行同源性比较,发现与枯草芽孢杆菌16SrDNA有99%同源性,判定此菌为枯草芽孢杆菌,命名为BS501a。
- 李瑞芳赵玉峰魏建薛雯雯刘冰
- 关键词：枯草芽孢杆菌拮抗活性稻瘟病菌
- 枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备及质粒转化方法研究被引量：39
- 2011年
- 为便于枯草芽孢杆菌工业化生产应用,对Spizizen创立的枯草芽孢杆菌DNA转化方法进行改进。用GMI和GMII溶液处理枯草芽孢杆菌野生型菌株BS501a、营养缺陷型突变株DB1342和非营养缺陷型突变株WB800,用改进的方法制备感受态细胞,用7.5 kb质粒pSBPTQ进行转化,并研究RNA、酵母粉、水解酪蛋白、培养方法对枯草芽孢杆菌质粒转化的影响。结果表明,该方法适用于不同基因型枯草芽孢杆菌的质粒转化,营养缺陷型突变株DB1342的转化率为750 CFU/μgDNA,非营养缺陷型突变株WB800转化率为1 070 CFU/μg DNA,野生型菌株BS501a转化率为270 CFU/μg DNA。根据影响转化效率的因素,推测在该方法中,枯草芽孢杆菌质粒转化原理:一定生物量的枯草芽孢杆菌在外界营养条件和钙、镁离子作用下,细胞壁和细胞膜形成缺陷,使外源DNA转入枯草芽孢杆菌细胞内。
- 李瑞芳薛雯雯黄亮熊前程王彬
- 关键词：枯草芽孢杆菌感受态细胞
- CGA-N46基因在枯草杆菌中的多顺反子表达及表达条件优化
- 由白假丝酵母等病原真菌引起的艾滋病等免疫机能受损病人死亡的增加、现有抗真菌药物对宿主细胞的潜在毒性及耐药病原真菌的增多,使得对高效低毒的新型抗真菌药物的研究具有重要意义。嗜铬粒蛋白A是多种生物活性多肽的前体,其N端衍生多...
- 薛雯雯
- 关键词：多顺反子基因工程抗真菌活性发酵条件
- 文献传递
- 枯草芽孢杆菌不同生长时期抗稻瘟病菌活性研究被引量：5
- 2008年
- 将枯草芽孢杆菌Bs501接种于LB液体培养基中,30℃,230 r/min振荡培养,每2 h测一次OD600,镜检观察芽孢形成情况,并用保湿培养法测其稻瘟病菌孢子萌发抑制率。结果表明,枯草芽孢杆菌Bs501培养6 h进入对数期,12 h进入稳定期,14 h后进入衰亡期;36 h开始形成芽孢,56 h芽孢形成率大于95%;8 h开始有抑菌作用,48 h抑菌作用最强,以后不再有明显变化。说明拮抗物质在前芽孢的发育成熟期产生。
- 李瑞芳徐怡赵玉峰薛雯雯张志杰
- 关键词：枯草芽孢杆菌营养状态稻瘟病菌拮抗活性
