胡国法
- 作品数：7 被引量：63H指数：4
- 供职机构：中国科学院遗传与发育生物学研究所更多>>
- 发文基金：中国科学院知识创新工程更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- NS基因克隆及人成骨肉瘤细胞和人胚胎肾细胞NS基因的表达被引量：21
- 2003年
- 目的 :研究nucleostemin(核干细胞因子 ,NS)基因在人成骨肉瘤细胞 (OS - 732 )和人胚胎肾细胞 (HEK -2 93)的表达情况 ,并克隆该基因的部分片段。方法 :以OS - 732细胞和HEK - 2 93细胞为实验材料 ,进行细胞总RNA的提取、反转录反应、PCR反应、NS基因片段的克隆及测序等。结果 :(1)提取的总RNA质量很高 ,基本上无降解 ;(2 )OS - 732细胞和HEK - 2 93细胞中均有NS基因的表达 ,并且在相同量底物的情况下 ,OS- 732细胞NS基因的表达量明显高于HEK - 2 93细胞 ;(3)将PCR产物成功地与pGEM -T克隆载体连接 ,构建为pGEM -T -NS质粒 ,测序结果表明NS基因片段序列与基因库中登陆的序列完全一致。结论 :本文成功地从OS - 732细胞和HEK - 2 93细胞克隆到NS基因片段 ,OS - 732细胞NS基因的表达量明显高于HEK- 2
- 刘思金蔡子微胡国法魏影允劳为德
- 关键词：核干细胞因子NS克隆胚胎肾细胞PCR反应
- 牛乳腺核基质附着区多重顺式作用序列表明其功能的多样性(英文)
- 2003年
- 高等真核细胞的染色体DNA通过基质结合区 (MAR)不时地与核基质特异性结合而组织成一种空间环状结构。为了研究以DNA套环形式附着于核基质上的DNA序列的特性 ,从处于泌乳期的乳腺组织中克隆了多个MARDNA序列。体外结合实验表明 ,这些序列能够同核基质蛋白共结合成不溶性的复合物 ,这些复合物可较容易的通过离心去除。其中 ,两个MAR序列中包含有TG 、CA 和GA 阻断以及ATTA基序。这两个序列中含有多个复制 转录因子的结合位点、增强子基序、多个完全的和非完全的反向重复序列以及潜在的DNA弯曲核心序列样结构。同一DNA序列中存在不同元件的组合可能说明在控制一系列细胞的发育过程中 ,它们可能发挥有正的或负的调控元件的功能。
- 劳为德张传生胡国法张旭晨魏影允
- 关键词：基质转录因子
- 位点特异性重组酶Cre的克隆、表达、纯化及体外活性鉴定
- 2002年
- 克隆了Cre基因 ,分别构建了真核表达载体 pEF EBFP Cre和 pGEX Cre,在大肠杆菌中表达了Cre重组酶 ,并证明了重组酶的删除特性 。
- 高虹张传生魏影允胡国法劳为德
- 关键词：克隆纯化体外活性CRE/LOXP系统原核表达CRE基因
- 嵌合分子VEGI^+的构建、表达及其抗血管生成和抗肿瘤活性被引量：3
- 2003年
- 血管内皮细胞生长抑制因子VEGI是肿瘤坏死因子超家族新成员 ,通过诱导内皮细胞凋亡而抑制肿瘤生长。通过PCR方法将CTTHWGFTLC与VEGI2 3- 1 74氨基酸相连 ,构成嵌合分子VEGI+。原核表达的VEGI+经过纯化后 ,以非重折叠的沉淀形式进行活性实验 ,VEGI+能够抑制鸡胚尿囊膜血管新生 ,对于Lewis肺癌小鼠移植瘤 ,5mg L组抑瘤率 99.7% ,1 0mg L组抑瘤率96% ,2 5mg L组抑瘤率 83%。实验说明VEGI+通过抑制血管新生对移植瘤的早期发展起抑制作用。
- 高虹刘思国刘思金魏影允胡国法张传生劳为德
- 关键词：嵌合分子抗肿瘤活性VEGI基质金属蛋白酶抗血管生成
- NS特异性siRNA真核表达载体的构建被引量：15
- 2003年
- 目的 :构建nucleostemin(核干细胞因子 ,NS)特异性siRNA真核表达载体。方法 :以小鼠组织基因组DNA为模板 ,PCR方法克隆小鼠编码U6snRNA基因的启动子 ,将NS -siRNA表达序列、PolⅢ识别的终止信号与U6启动子连接起来 ,并将其插入 pcDNA4 /C载体中。 结果 :(1 )从小鼠基因组DNA中克隆到编码U6snRNA基因的启动子 ,(2 )构建了含有U6启动子、NS -siRNA表达序列和PolⅢ识别终止信号的NS -siRNA表达的片段 ,(3)将NS -siRNA表达片段插入了 pcDNA4 /C真核表达载体。 结论 :构建了针对NS特异性的siRNA真核表达载体 pcDNA4 /C -NS -Silencer。
- 蔡子微刘思金胡国法魏影允劳为德
- 关键词：核干细胞因子NSSIRNA克隆
- 人α-乳白蛋白在转基因小鼠乳汁中的动态表达图貌被引量：7
- 2003年
- 利用人α-乳白蛋白基因(hα-Lac)探针从8×105个噬斑中筛选出两个阳性克隆,以此构建了包含有7.3kb的hα-lac的5′调控序列、2.0kb的编码区和227 bp的牛生长激素3′UTR的乳腺表达框架.通过显微注射方法获得5只hα-Lac转基因整合雌性小鼠.对其中1只转基因表达量较高(达到0.3 mg/mL)的小鼠的一个泌乳期中人乳白蛋白的表达过程分析表明:转基因并不遵从小鼠内源的α-Lac的表达图貌,而是以转基因特异的方式表达,表现为在分娩后的前3天转基因的表达低,自第4天开始逐渐增高,到第13～14天达到峰值后渐趋稳定,并持续到泌乳期结束.在第2个泌乳期中,转基因的表达量与首次泌乳期的水平相当.此外,转基因表达小鼠的泌乳量较正常小鼠和非表达整合小鼠有一定的增加,提示泌乳过程中较高浓度的α-Lac可能引发了产乳量的增加.
- 刘思国魏影允胡国法高虹刘思金劳为德
- 关键词：转基因小鼠乳汁基因表达乳腺表达产乳量
- 人类骨桥蛋白(hOPN)在细胞增殖中的功能研究被引量：29
- 2003年
- 为了研究人类骨桥蛋白 (hOPN)与 2 93细胞增殖、细胞周期及与细胞周期有关基因表达的关系 ,并对其机制进行探讨 ,成功地构建了hOPN真核表达载体并获得了稳定表达hOPN的细胞系 ,也同时获得了稳定表达EGFP的细胞系。hOPN对 2 93细胞具有促增殖效应 ,hOPN蛋白激活了 2 93细胞细胞周期蛋白A的表达。实验结果表明 :hOPN通过一定的信号通路刺激了细胞周期蛋白A的表达 ,加快了细胞进入并通过S期 ,从而促进了细胞的增殖。
- 刘思金胡国法刘思国魏影允薛延劳为德
- 关键词：细胞增殖骨桥蛋白293细胞流式细胞术细胞周期蛋白A细胞周期发生学
