劳为德
- 作品数：44 被引量：357H指数：13
- 供职机构：中国科学院遗传与发育生物学研究所更多>>
- 发文基金：中国科学院知识创新工程天津市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学化学工程更多>>
- 旋毛虫p49基因的克隆、序列分析及表达被引量：5
- 2002年
- 目的 获得旋毛虫排泄分泌抗原(excretory antigen,ES)p49基因的克隆、测序及表达。 方法 通过RT-PCR,从旋毛虫幼虫总RNA中扩增得到特异片段,利用TA克隆将PCR产物克隆入pUC-T载体中并进行测序及同源性比较,并定向克隆到表达载体pEG-4T-3中,转化感受态细胞,诱导表达。 结果 RT-PCR扩增得到p49基因,其核苷酸序列与已发表的p49基因序列一致;BLAST分析表明其与旋毛虫p49基因、43 KDa分泌性糖蛋白同源性均为99％。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,重组蛋白诱导表达在67 KDa处有一新蛋白带。 结论 提取旋毛虫幼虫总RNA,用RT-PCR方法克隆并表达了p49基因。
- 温艳甘绍伯劳为德高虹张传生刘思国
- 关键词：旋毛虫基因克隆基因表达
- 乳腺特异性基因转基因山羊表达特性的研究被引量：3
- 1999年
- 采用胚胎显微注射的方法，将牛乳酪蛋白（αｓｌｃａｓｅｉｎ）基因作为乳腺定位表达调控序列与人乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ／ａｙｗ）基因组成的两个融合构件（λ１０６和λ２０７）导入山羊原核期受精卵。产出的Ｇ０代羊用ＨＢｘ和ｃａｓｅｉｎ８００两个探针进行ＰＣＲ＋Ｓｏｕｔｈｅｒｎ整合检测，分别获得λ１０６和λ２０７构件整合阳性羊１６和２４只。用ＥＬＩＳＡ／ＨＢｓＡｇ试剂盒检测转基因羊乳汁中的重组人乙型肝炎表面抗原（ｒＨＢｓＡｇ），在Ｇ０代转基因羊中，λ１０６乳腺表达率是４７２％（１７／３６）；λ２０７是６８６％（２４／３５）。Ｇ０代转基因母羊与正常公羊交配，所产的４１只Ｇ１代羊中有１３只整合阳性（３１７％），其中６只Ｇ１代整合羊中，乳腺表达率为６６６７％（４／６）。表达阳性羊乳免疫注射６只成年兔，结果在它们的血清中全部检测到ＨＢｓＡｂ（６／６）。试验表明，由αｓｌｃａｓｅｉｎ和ＨＢｓＡｇ／ａｙｗ基因组成的λ１０６和λ２０７两个融合基因构件导入山羊原核期受精卵后均可获得乳腺特异性表达转基因羊，最高表达量达１３０７μｇ／ｌｉｔｅｒ，由此证明通过牛αｓｌ酪蛋白调控序列作为定位基因来指导ＨＢｓＡｇ／ａｙｗ基?
- 成勇成国祥王杏龙穆宗尧陈建泉徐少甫劳为德张靖溥张旭晨魏允影
- 关键词：乙肝表面抗原乳腺转基因山羊基因表达山羊
- 由成年转基因山羊体细胞而来的克隆山羊被引量：64
- 2002年
- 在已经获得的乳腺特异性表达人促红细胞生成素 (rhEPO)成年转基因山羊 (Caprahircus)的基础上 ,取其耳尖成纤维细胞和卵巢颗粒细胞 ,进行体外传代培养 ,然后将这种培养的转基因山羊的体细胞移入去核的处于第Ⅱ次减数分裂中期的卵母细胞中 ,并进行电融合 ,构建重构胚胎 ,重构胚胎在体内培养 6d ,再将发育至囊胚或桑椹胚的重构胚胎移入同步情期的寄母羊子宫内。结果 ,有 2只寄母羊妊娠并最终产下 2只成活的克隆山羊。她们分别来自同一成年母羊的耳尖成纤维细胞和卵巢颗粒细胞。克隆羊经PCR RFLP图谱分析显示 :以克隆羊组织DNA为模板的PCR产物与相应的提供体细胞的基因羊的PCR产物的酶切图谱完全一致 ;并且经PCR对外源hEPO基因检测表明 2只克隆山羊均携带hEPO外源基因。
- 成勇王玉阁罗金平沈玉杨跃飞鞠辉明邹贤刚徐少甫劳为德杜淼
- 关键词：体细胞克隆山羊
- 正常饮食中短期补充钙剂对双侧卵巢切除大鼠骨质量及骨代谢的影响被引量：1
- 2004年
- 刘思金刘建刚薛延王芊劳为德
- 关键词：卵巢切除术骨质量骨代谢
- 兔乳腺组织中与牛α_(s1)酪蛋白基因5′调节区特异结合的蛋白
- 1991年
- α_((?)1)酪蛋白基因为编码ca^(++)敏感性酪蛋白的基因家族成员之一,在催乳素的作用下由乳腺组织特异地合成和分泌,并受糖皮质激素、孕酮等多种激素的诱导和调节。在酪蛋白基因的5′端存在数个可能起顺式调节作用的元件,
- 陈瑞环劳为德
- 关键词：乳腺组织DNA结合蛋白
- 小鼠血管内皮细胞表达人DAF和CD59对其心脏在人血清灌注下做功的影响
- 2007年
- 目的探讨联合转入衰变加速因子(DAF)和CD59基因对小鼠心脏在人血清灌注下做功及组织结构的影响。方法采用受精卵显微注射技术,将人DAF和CD59基因注入昆明小鼠受精卵的原核中,选取注射后仍健康的受精卵植入假孕母鼠的输卵管中待分娩。提取足月产小鼠(G_0代)基因组DNA,以聚合酶链反应(PCR)及Southern印迹杂交确定外源基因整合情况,应用流式细胞术检测人DAF和CD59在转基因小鼠白细胞上的表达,免疫组织化学染色检测人DAF和CD59在转基因小鼠心脏、肝脏及肾脏组织中的表达。取出转基因成功小鼠的心脏,在体外以人血清进行灌注,测定其做功能力,HE染色及免疫组化染色观察灌注后心脏的组织学变化以及补体C3c的沉积情况。以单一转DAF基因的小鼠为对照。结果共获得G_0代小鼠135只,经PCR及Southern印迹杂交分析,11只(8.1%,11/135)整合有人DAF和CD59外源基因,其中6只的白细胞膜表面人DAF和CD59表达阳性,强度分别为(86±6)%和(85±8)%,单转人DA F基因者(87±7)%,差异无统计学意义。人DAF及CD59仅表达于转基因小鼠心脏、肝脏及肾脏组织中的血管内皮细胞上。在人血清灌注后60min内,普通小鼠的心脏做功急剧下降,接近40min时心脏停止搏动;转DAF基因小鼠的心脏做功也下降,但仍维持在最大值的20%以上;转DAF和CD59双基因小鼠的心脏做功维持在最大值的40%以上。在人血清灌注的10～60min,转基因小鼠心脏做功能力明显强于普通小鼠心脏(P<0.05);灌注20～60min时,转双基因小鼠的心脏做功能力明显强于转DAF基因小鼠心脏(P<0.05)。普通小鼠心脏在人血清灌注后组织裂解较多见,肿胀严重,而转基因小鼠心脏组织的病理改变明显轻于普通小鼠,转双基因者的病理变化又明显轻于单一转DAF者,心肌血管中人C3c的沉积也明显少于单一转DAF者。结论血管内皮细胞特异性表达人DAF和CD59,可明显阻抑其心脏在�
- 张志宏马腾骧王广有李胜芝张月刘思金劳为德李光三
- 关键词：小鼠做功
- NS基因克隆及人成骨肉瘤细胞和人胚胎肾细胞NS基因的表达被引量：21
- 2003年
- 目的 :研究nucleostemin(核干细胞因子 ,NS)基因在人成骨肉瘤细胞 (OS - 732 )和人胚胎肾细胞 (HEK -2 93)的表达情况 ,并克隆该基因的部分片段。方法 :以OS - 732细胞和HEK - 2 93细胞为实验材料 ,进行细胞总RNA的提取、反转录反应、PCR反应、NS基因片段的克隆及测序等。结果 :(1)提取的总RNA质量很高 ,基本上无降解 ;(2 )OS - 732细胞和HEK - 2 93细胞中均有NS基因的表达 ,并且在相同量底物的情况下 ,OS- 732细胞NS基因的表达量明显高于HEK - 2 93细胞 ;(3)将PCR产物成功地与pGEM -T克隆载体连接 ,构建为pGEM -T -NS质粒 ,测序结果表明NS基因片段序列与基因库中登陆的序列完全一致。结论 :本文成功地从OS - 732细胞和HEK - 2 93细胞克隆到NS基因片段 ,OS - 732细胞NS基因的表达量明显高于HEK- 2
- 刘思金蔡子微胡国法魏影允劳为德
- 关键词：核干细胞因子NS克隆胚胎肾细胞PCR反应
- 黑麦和水稻与脯氨酸合成有关的基因片段的克隆和鉴定被引量：10
- 1991年
- 用大肠杆菌营养缺陷互补法得到了含黑麦和水稻染色体DNA片段能互补于proA2^-的转化体.在渗透胁迫下,黑麦和转化体中这些片段的转录物都有明显增加,转化体中游离脯氨酸量也增加了.转化体的抗旱抗盐能力明显优于对照菌.初步分析,所克隆的片段和植物的调渗作用有关.
- 陈受宜王阁劳为德
- 关键词：黑麦水稻基因片段克隆
- 旋毛虫ES抗原基因的克隆和序列分析被引量：11
- 2002年
- 目的 完成旋毛虫ES抗原 (Excretory -secretoryAntigen)中 4 3kDa分泌性糖蛋白基因和 5 3kDa分泌性抗原基因的克隆和测序 ,并与已发表的该两种基因的相关序列比较、分析。方法 通过RT -PCR ,从旋毛虫幼虫总RNA中扩增得到特异性片段 ,利用TA克隆将PCR产物克隆入 pUC -T载体中并进行测序及同源性比较。 结果 RT -PCR扩增得到 4 3kDa分泌性糖蛋白基因和 5 3kDa分泌性抗原基因 ,序列分析表明 ,其核苷酸序列与已发表的 4 3kDa分泌性糖蛋白基因和 5 3kDa分泌性抗原的同源性均为 99%。结论 成功提取了旋毛虫幼虫的总RNA ,并用PT -PCR方法克隆了 4 3kDa分泌性糖蛋白基因和 5 3kDa分泌性抗原基因 ,这为两基因的表达及在医学、兽医学中应用研究奠定了基础。
- 温艳劳为德刘思国高虹张传生甘绍伯
- 关键词：旋毛虫基因克隆免疫学基因序列
- 对我国五株旋毛虫基因组DNA限制性片段长度多态性的研究被引量：14
- 1994年
- 本文用５种限制性内切酶（包括ＥｃｏＲⅠ及ＤｒａⅠ）消化５株来自长春（分自犬）、天津、西安、河南及云南（分自猪）的旋毛虫基因组ＤＮＡ，结果显示：长春株与其它各地域株的酶切图谱间存在着差异。曾选其中经ＥｃｏＲⅠ酶切的特异性ＤＮＡ片段（１．１２ｋｂ），经克隆制备成探针，与经ＥｃｏＲⅠ酶切的上述５株虫体ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交。结果显示，仅长春株出现１．１２ｋｂ杂交带，其它４株均未出现该杂交带，提示不同地理分布区和／或不同宿主来源的旋毛虫虫株间存在着一定的差别。
- 王虹张月清吴赵永劳为德
- 关键词：旋毛虫多态性SOUTHERN杂交
