秦红
- 作品数：12 被引量：14H指数：2
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 迟缓爱德华菌抗独特型单链抗体基因的构建、表达及鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的构建、表达及鉴定迟缓爱德华菌抗独特型单链抗体基因。方法采用RT-PCR方法从分泌迟缓爱德华菌独特型单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1E11)中克隆出VH和VL可变区基因,再通过重叠延伸拼接PCR方法在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建单链抗体基因;将其克隆至表达载体pET-28a并在大肠杆菌中表达,表达产物纯化后,用SDS-PAGE、Western blot及ELASA进行鉴定。结果迟缓爱德华菌抗独特型单链抗体基因scFv在BL21(DE3)菌中获得表达,表达产物以不溶性包涵体形式存在,经过溶解包涵体、纯化和体外复性,获得了高纯度的单链抗体片段,重组蛋白的分子质量为27 ku。ELASA分析结果证实迟缓爱德华菌抗独特型单链抗体基因scFv与原代抗体一样,具有较高的抗原亲和力。结论成功构建了迟缓爱德华菌抗独特型单链抗体基因scFv,为进一步制备迟缓爱德华菌抗独特型抗体基因工程疫苗奠定基础。
- 秦红金晓航黄威权刘玉林
- 关键词：迟缓爱德华菌抗独特型单链抗体
- 核基质MINT N端片段(365～1084aa)相互作用蛋白的筛选及鉴定
- 2004年
- 目的 :确定核蛋白MINT(Msx2 interactingnucleartargetProtein)的功能及作用机制 .方法 :利用酵母双杂交的方法 ,以MINTN端第 36 5～ 1 0 84位氨基酸 (MINT F2 )为诱饵用酵母双杂交法筛选小鼠胚胎 9日的cDNA文库 .用诱饵质粒和文库先后转化酵母宿主后 ,对 1 .0× 1 0 8个酵母克隆进行营养筛选和 β 半乳糖苷酶筛选 ,获得 1 2 8个阳性克隆 .并提取质粒进行酶切鉴定 ,将获得的 4个非重复克隆并进行序列分析 .结果 :筛选出 4个与MINT F2相互作用的蛋白 ,它们分别是 :6 7ku层黏连蛋白受体 ,,2个 1 6S核糖体RNA ,精氨酰 tRNA合成酶 .结论 :成功筛选出与MINT F2相互作用的蛋白 。
- 秦红孙强周鹏李军锋韩骅罗晓星
- 关键词：NOTCH信号途径
- MINT蛋白(1-365氨基酸)相互作用分子的筛选被引量：1
- 2003年
- 目的 :用酵母双杂交技术筛选与MINT(Msx2 in teractingnucleartargetprotein) F1片段相互作用的分子 ,对MINT转录抑制的机制进行探讨 .方法 :以Mint F1片段 (1～ 36 5氨基酸残基 )连入载体pGBKT7构建的质粒为诱饵 ,利用酵母双杂交技术对人淋巴结cDNA文库进行筛选 ,并分析所获得的阳性克隆 .结果 :从 6× 1 0 7个克隆中共获得 1 2个不重复的阳性克隆 .经序列分析 ,得到 3个有意义的基因 ,分别为人小核RNA 蛋白复合体多肽G(SNRPG)、癌基因Vav和人微球蛋白 1 (MCRS1 ) .结论 :从筛选到的这 3个分子的定位与功能来看 ,MINT分子的N端片段可以与小核RNA 蛋白复合体 (snRNPs) ,Vav,MCRS1和RBP Jκ等相互作用 ,参与细胞内的信号传递 ,调控细胞周期 。
- 周鹏李军锋秦红韩骅
- 关键词：MINT酵母双杂交
- 抗迟缓爱德华菌独特型单克隆抗体轻链可变区基因的克隆及序列分析
- 2007年
- 秦红金晓航杨向民温伟红杨安钢黄威权
- 关键词：迟缓爱德华菌基因克隆
- 用suc2信号肽捕获系统筛选小鼠胚胎cDNA文库基因被引量：2
- 2004年
- PCR扩增 1 1d小鼠胚胎cDNA文库插入片段 ,将 0 .5～ 2 0kb的扩增产物插入筛选载体的多克隆位点 ,转化suc2基因缺陷酵母宿主菌 .然后将约 1 0 5个酵母菌落接种于选择性平板上进行筛选 ,得到了 1 82个可在选择性培养基上生长的菌落 .PCR扩增显示 ,插入片段大小分布于 0 1～ 1 5kb之间 .对其中 1 4个阳性菌落的重组子进行序列测定 ,分别代表 6种不同的基因序列 ,与报告基因都有正确的读框内融合 .其中两种基因序列反复被筛到 ,分别命名为spt1、spt2 .spt1 [gi:2 772 876 6 ],可能以非编码RNA的身份参与蛋白质向细胞外分泌的过程 ,而spt2编码多个连续的赖氨酸 。
- 孙强黄红艳周鹏冯蕾秦红韩骅
- 关键词：非编码RNA蛋白质分泌
- 抗创伤弧菌mAb的制备与鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的:制备抗创伤弧菌mAb并用于创伤弧菌感染的快速诊断.方法:用灭活创伤弧菌免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗创伤弧菌的mAb,ELISA法用于mAb的Ig效价,亚类及特异性鉴定.结果:获得了2株可持续分泌抗创伤弧菌mAb的杂交瘤细胞株.结论:获得的高特异性的抗创伤弧菌mAb不仅为创伤弧菌感染的快速诊断奠定了坚实的基础,而且为其进一步的治疗方面的研究提供了理论依据.
- 庞晓雯秦红师建国
- 关键词：杂交瘤
- 溶藻弧菌抗独特型抗体单链抗体基因真核表达载体的构建被引量：2
- 2007年
- 目的:构建溶藻弧菌抗独特型抗体的单链抗体(scFv)基因的毕赤酵母分泌型表达载体。方法:从分泌溶藻弧菌抗独特型抗体的杂交瘤细胞株(2F4)中克隆该抗体的重链可变区(VH)基因和轻链可变区(VL)基因(GenBank acces-sion No:DQ011530和DQ011531),并通过基因重组为scFv基因。然后将其克隆入毕赤酵母菌分泌型表达载体pPIC9K中,经序列测定后,电转化入毕赤酵母菌SMD1168中,将经表型筛选和G418抗性筛选的重组酵母菌株进行PCR鉴定。结果:获得毕赤酵母菌分泌型表达载体pPIC9K-scFv,经G418浓度梯度筛选及PCR鉴定得到高拷贝整合的重组酵母菌株。结论:成功地构建溶藻弧菌抗独特型抗体的scFv基因的真核表达载体,为进一步研究其生物学活性奠定了基础。
- 付建芳黄威权秦红金晓航杨安钢
- 关键词：溶藻弧菌单链抗体真核表达毕赤酵母菌
- 医学遗传学教学改革的探索与体会被引量：1
- 2004年
- 在生命科学飞速发展的今天,高等医学教育如何进行教学改革以适应未来,对培养高素质的医学人才有着深远的意义.在医学遗传学教学中,分别从教学内容、授课方式等方面进行了一些有意义的探索.
- 秦红舒青衡恩良
- 关键词：医学遗传学教学改革医学教育多媒体教学教学内容
- 溶藻弧菌抗独特型抗体单链抗体在毕赤酵母中的表达
- 2009年
- 目的构建溶藻弧菌抗独特型抗体的单链抗体(scFv)基因的毕赤酵母分泌型表达载体,并对其表达的蛋白进行免疫原性鉴定。方法从分泌溶藻弧菌抗独特型抗体的杂交瘤细胞株(2F4)中克隆该抗体的重链可变区(VH)基因和轻链可变区(VL)基因(GenBank accession No:DQ011530和DQ011531),并通过基因重组为scFv基因。然后将其克隆入毕赤酵母菌分泌型表达载体pPIC9K中,经序列测定后,电转化入毕赤酵母菌SMD1168中,将经表型筛选和G418抗性筛选的重组酵母菌株进行PCR鉴定。以甲醇进行诱导表达,表达后的重组蛋白利用动物免疫试验进行免疫原性鉴定。结果获得毕赤酵母菌分泌型表达载体pPIC9K-scFv,经G418浓度梯度筛选及PCR鉴定得到高拷贝整合的重组酵母菌株,ELISA测定和动物免疫试验显示抗独特性抗体的scFv具有与溶藻弧菌一样的免疫原性。结论构建溶藻弧菌抗独特型抗体的scFv基因的真核表达载体并成功表达,为进一步研究其生物学活性奠定了基础。
- 付建芳涂艳阳秦红黄威权
- 关键词：溶藻弧菌单链抗体真核表达毕赤酵母菌
- 溶藻弧菌抗独特型抗体scFv的原核表达及免疫原性鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的构建溶藻弧菌抗独特型单链抗体(scFv)的原核表达载体,并对其表达的蛋白进行免疫原性鉴定。方法从分泌溶藻弧菌抗独特型单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2F4)中已获得的该抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),通过基因重组构建scFv及原核表达载体pET32a-AL,转化大肠杆菌BL21后用IPTG诱导表达。表达后的重组蛋白利用动物免疫试验进行免疫原性鉴定。结果scFv基因序列全长747碱基对,编码249个氨基酸,符合小鼠免疫球蛋白可变区基因特征,含有框架区(FRs)、抗原互补决定区(CDRs)及抗体特征性的半胱氨酸残基。ELISA测定和动物免疫试验显示抗独特性抗体的scFv具有与溶藻弧菌一样的免疫原性。结论成功构建了抗溶藻弧菌独特型抗体scFv原核表达载体并表达于包涵体中,表达的融合蛋白具有与溶藻弧菌一样的免疫原性,为溶藻弧菌抗独特型单链抗体scFv成为鱼用基因工程疫苗奠定了初步基础。
- 付建芳夏永娟秦红王世鄂金晓航初晨宇黄威权
- 关键词：溶藻弧菌单链抗体原核表达免疫原性基因工程疫苗
