王军伟
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划陕西省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗肿瘤疫苗MAGE1-MAGE3-HSP70蛋白特性及其纯化策略的研究
- 2011年
- 目的:对MAGE1-MAGE3-HSP70(M1-M3-HSP70)融合蛋白的理化性质及其纯化策略进行初步研究,为后期的临床前试验提供数据和依据。方法:以本实验室构建的菌种(BL21(DE3)pLysS-M1-M3-HSP70)为材料,采用常规细菌培养及诱导方法进行诱导表达,用聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳、免疫印迹(Western blotting)对目的蛋白进行分析,然后确定盐析条件,使用ButylSepharose HP疏水相互作用层析以及阴离子交换(Source 30Q填料)对目的蛋白的纯化进行分析。结果:M1-M3-HSP70蛋白在大肠杆菌中表达后,目的蛋白分为两部分,一部分为包涵体形式(44.9%),一部分为可溶表达(55.1%)。对其可溶部分进行研究发现,细菌裂解后,目的蛋白存在聚合和降解现象;确定了盐析条件、洗脱缓冲液以及稳定的PH值范围,基本确定了目的蛋白的纯化工艺。结论:明确了M1-M3-HSP70融合蛋白的基本性质,确定了目的蛋白的纯化方法,为基于融合蛋白的肿瘤疫苗的进一步研究提供了参考。
- 张秀敏史琪琪林慧王军伟李增山
- 关键词：融合蛋白降解
- 新基因MAGE-n表位肽与人HSP70融合基因的构建及表达纯化被引量：1
- 2010年
- 目的构建MAGE-n159-167(QLVFGIEVV)表位肽与人热休克蛋白70(HSP70)的融合基因并表达纯化。方法应用PCR方法,将QLVFGIEVV的cDNA序列融合到人HSP70基因的3'端,将融合基因克隆入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)QLVFGIEVV-HSP70;采用双酶切(Sac Ⅰ、Hind Ⅲ)及PCR鉴定后测序;转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),用IPTG诱导表达,Ni Sepharose6FF亲和填料进行分离纯化,SDS-PAGE检测表达及纯化结果。结果经PCR扩增成功获得约2.0kb的目的片段,重组体经Sac Ⅰ、Hind Ⅲ双酶切分析及PCR结果与预期结果一致,测序正确。转入重组质粒的E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导、SDS-PAGE分析得到71kD左右的目的蛋白条带。用Ni Sepharose6FF亲和填料分离纯化,获得了纯化的融合蛋白。结论成功构建原核表达载体pET-28a(+)QLVFGIEVV-HSP70,并获得纯化的融合蛋白,为基于MAGE-n的肿瘤疫苗研制提供良好的抗原奠定了实验基础。
- 张秀敏史琪琪李增山叶菁王军伟林慧曲萍胡沛臻隋延仿
- 关键词：基因融合癌症疫苗MAGE-N表位肽
- 肝癌相关肿瘤抗原AFP新的HLA-A2/A24限制性CTL表位的预测及分析
- 2009年
- 目的:预测肝癌肿瘤抗原AFP新的HLA-A2/A24限制性CTL表位,为肝癌CTL表位肽的筛选及鉴定提供依据。方法:选择与肝癌密切相关的肿瘤抗原AFP为研究目标,采用NetCTL1.2Server远程预测系统进行HLA-A2/A24限制性CTL表位预测。结果:共预测出与肝癌相关的肿瘤相关抗原AFP的8个HLA-A2限制性CTL表位,13个HLA-A24限制性CTL表位。结论:应用NetCTL1.2Server法预测CTL表位是一种高效准确的预测方法。所预测的肿瘤抗原AFP的HLA-A2/24限制性CTL表位经实验筛选、鉴定后,可为肝癌治疗性疫苗的制备选择合适的CTL表位提供依据。
- 张秀敏王军伟李增山郭风隋延仿
- 关键词：甲胎蛋白细胞毒性T淋巴细胞表位
- 免疫重建荷人高转移肝癌SCID鼠模型的建立及其鉴定被引量：5
- 2009年
- 目的:建立具有人免疫学特性的高转移肝癌SCID鼠模型。方法:SCID小鼠腹腔注射人外周血淋巴细胞,皮下接种人高转移肝癌细胞MHCC97-H,免疫重建人高转移肝癌SCID小鼠模型,并鉴定建立的结果。结果:①免疫重建荷人高转移肝癌细胞小鼠的成瘤率为100%,较荷瘤组成瘤潜伏期延长,体积缩小(P<0.05);转移率为100%,其从皮下转移到肝脏所需时间较荷瘤组延长(P<0.05)。②第2、4、6周小鼠血中人IgG含量的测定:同期相比,人化荷瘤组小鼠血中人IgG含量高于人化组(P<0.05)。③第6周SCID小鼠外周血中人CD3+T淋巴细胞和人CD20+B淋巴细胞含量的测定:人化荷瘤组小鼠血中人CD3+T淋巴细胞和人CD20+B淋巴细胞含量高于人化组(P<0.05)。④免疫组化检测人化荷瘤组小鼠脾脏中存在人CD3+T淋巴细胞和CD20+B淋巴细胞。结论:成功建立免疫重建荷人高转移肝癌SCID鼠模型,为肝癌转移的研究及治疗提供了理想的动物模型。
- 李文新张秀敏胡沛臻隋延仿师建国王军伟史琪琪
- 关键词：肝癌转移SCID小鼠免疫重建动物模型
- ^(99m)Tc螯合两种抗肝癌单链抗体的标记条件被引量：1
- 2006年
- 目的:研究两种全新的抗肝癌基因工程单链抗体hdsFv和scFv-PE38的99mTc标记方法及适宜条件以应用于放免显像.方法:选用二乙烯三胺五乙酸环酐(cDTPAa)作为螯合剂,沿用比较成熟的标记方法,以标记率和标记物免疫活性为指标分别测定两种单链抗体与99mTc偶联的适宜条件,并测定标记物的比活度和体外稳定性.结果:其他理化条件不变,cDTPA与hdsFv的浓度比为20∶1~40∶1,99mTc活度37~148MBq时,hdsFv标记率为62%~84%;cDTPA对scFv-PE38的浓度比为20∶1~100∶1,99mTc活度为37~148 MBq时,scFv-PE38标记率为68%~89%;且两种标记单链抗体的免疫活性均在60%以上.结论:通过对这两种全新的单链抗体的标记和检测,得到了尽可能保持其原有免疫活性的标记条件,为通过放免显像在活体内检验单链抗体亲瘤性奠定了基础.
- 王军伟师建国汪静舒博学刘彦仿
- 关键词：单链抗体同位素标记肝肿瘤
- ^(99m)Tc标记抗肝癌单链抗体的生物分布及放射免疫显像的初步研究被引量：2
- 2006年
- 目的:研究全新的抗肝癌单链抗体scFv-PE38在活体内的生物分布和对肝癌组织的亲和性。方法:双功能螯合剂cDTPA间接标记99mTc于抗体。分组建立荷瘤裸鼠模型,标记抗体注射试验组,对照组注射相当剂量的锝盐溶液。分别在各时间点进行SPECT平面显像,观察病灶浓集情况,计算T/NT比值;并分离各主要组织器官测定放射性,计算各时间点组织摄取和瘤肝比。结果:注射30分钟后肿瘤开始显像,24小时显像最明显,T/NT达1.89±0.84;36小时各组织器官中肿瘤摄取最高,瘤肝比达1.64±1.12。结论:该抗体经标记后在活体内表现出对瘤组织的特异亲和性,为抗体应用于诊治奠定了初步的实验基础。
- 王军伟师建国汪静刘彦仿
- 关键词：单链抗体^99MTC放射免疫显像肝癌
