李春春
- 作品数：16 被引量：7H指数：2
- 供职机构：浙江大学医学院附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金浙江省教育厅科研计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 诱导上调和下调eIF3g的细胞系的建立
- 目的：分别建立诱导上调和下调真核翻译起始子eIF3g表达的细胞系,以进一步研究eIF3g对肿瘤细胞的作用及机制.方法：利用RT-PCR法克隆eIF3g全长编码区序列,测序验证后连接到四环素调控的慢病毒诱导表达系统中的载体...
- 李春春魏群褚丽莎陈丽红叶景佳张行曹江
- 下调蛋白酶活化受体4(PAR4)的表达抑制SW620结直肠癌细胞迁移
- 2016年
- 目的建立诱导型蛋白酶活化受体4(PAR4)表达抑制的人肠癌细胞SW620/PAR4D细胞模型,探讨PAR4对肠癌细胞增殖迁移的影响。方法建立带有四环素诱导表达调控系统的SW620/Tet-On人肠癌细胞,并构建针对PAR4的诱导型人工小RNA(miRNA)表达慢病毒载体p LVX-Tight-Puro-PAR4-miR,获得诱导型PAR4表达抑制的SW620/PAR4D细胞模型。用Western blot法对经强力霉素(DOX)药物诱导后SW620细胞中PAR4的表达抑制情况进行验证,采用CCK-8法检测抑制PAR4对SW620细胞增殖的影响,划痕实验检测SW620细胞的迁移情况。结果成功建立了PAR4低表达的SW620/PAR4D细胞模型。与对照组细胞相比,DOX诱导PAR4表达抑制前后,SW620/PAR4D细胞的生长增殖情况无明显变化,但运动迁移能力明显下降。结论下调PAR4水平不影响SW620细胞的增殖但抑制其迁移。
- 陈丽红李春春谢雨琼叶景佳曹江
- 关键词：蛋白表达结直肠癌细胞迁移
- 自噬与非小细胞肺癌EGFR-TKI耐药的研究进展被引量：3
- 2016年
- 肺癌是目前世界上发病率和死亡率均居首位的恶性肿瘤,其中大多数是非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)。在对NSCLC的治疗中,酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)的应用已成为靶向表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的重要治疗手段。但由于获得性耐药问题的出现,使得这类靶向药物的作用受到限制。近年来大量研究表明,除了基因突变等分子水平的因素外,细胞自噬(autophagy)在非小细胞肺癌EGFR-TKI靶向药物耐药中也发挥了重要的作用。该文重点就自噬与非小细胞肺癌EGFR-TKI靶向药物耐药的研究进展进行分析,旨在为解决自噬相关的EGFR-TKI耐药提供更多思路。
- 谢雨琼李春春曹江
- 关键词：非小细胞肺癌表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂获得性耐药自噬
- Ad-FGF-Trap对头颈部鳞癌细胞的抑制及其与西妥昔单抗的联合作用
- 2021年
- 西妥昔单抗的耐药问题在头颈部鳞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)的治疗过程中较为突出,成纤维生长因子受体1(fibroblast growth factor receptor 1,FGFR1)旁路活化是一个重要原因。在抑制FGFR1活性方面,已有的FGFR小分子抑制剂副作用较大,"诱饵受体"蛋白可能具有优势。该工作通过分子克隆方法构建了腺病毒穿梭质粒pDC316-FGFR1 Ig2+Ig3用以表达人FGF的"诱饵受体",利用AdMax;腺病毒系统包装、扩增、纯化获得了高滴度的Ad-FGF-Trap重组腺病毒。Ad-FGF-Trap感染HNSCC细胞CAL 27、WSU-HN6后,可显著抑制细胞增殖、迁移、侵袭能力。CAL 27细胞感染Ad-FGF-Trap后发生凋亡,同时PI3K/MAPK信号通路受到抑制,PARP剪切增加。WSU-HN6细胞感染Ad-FGF-Trap后,p27、p53、PCNA等周期相关蛋白表达量增加,细胞发生G;/S期阻滞,但EGFR通路代偿性激活,显示出FGFR1和EGFR两个信号通路之间有重要的相关性。利用CAL 27细胞进行的裸鼠体内实验表明Ad-FGF-Trap可抑制肿瘤生长。进一步研究表明,Ad-FGF-Trap联合西妥昔单抗,可更有效地抑制FGFR1及EGFR同时高表达的WSU-HN6细胞增殖,显示出联合用药将获得更佳疗效。该研究表明可表达"诱饵受体"的Ad-FGF-Trap能够为HNSCC的靶向治疗提供新的思路。
- 谢雨琼李春春辛永萍余美荣李祎严毛晓曹江
- 关键词：头颈部鳞癌西妥昔单抗
- 一种双增强子甲胎蛋白重组启动子及其应用
- 本发明提供一种双增强子甲胎蛋白重组启动子，是一种基因表达调控元件，为一种DNA分子，其核苷酸序列如SEQIDNo：1所示。该基因表达调控元件为带有CMV早期转录增强子和甲胎蛋白增强子双重增强子的重组人甲胎蛋白启动子，能够...
- 叶景佳曹江陈萍李春春陈丽红
- 文献传递
- 一种真核细胞分泌型重组融合蛋白rPC的构建、表达与纯化
- 2020年
- 抑制性免疫检查点PD-1或CTLA-4靶向治疗药物已用于肿瘤的临床治疗,但单一靶点药物会有耐药发生,联合使用同时封闭多个靶点可提高疗效,因此拟构建一个可封闭多个靶点的新型重组蛋白。首先设计并合成了一个由人类PD-1和CTLA-4两个受体的胞外功能域组成并且C端带6´His标签的分泌型重组融合蛋白rPC编码序列,插入真核细胞表达载体pLVX-IRES-ZsGreen1,稳定转染HEK293细胞,收集细胞培养上清,以亲和方法纯化重组蛋白rPC,通过实时荧光定量PCR检测多个人类肿瘤细胞系中PD-1配体PD-L1、PD-L2和CTLA-4配体CD80、CD86的表达,以选择相对高表达的细胞,利用细胞免疫荧光染色方法检验rPC与肿瘤细胞的结合能力,并用CCK-8法检测rPC是否对肿瘤细胞的生长有影响。结果表明,重组融合蛋白rPC可由稳定转染表达载体的HEK293细胞表达并分泌,纯化后的rPC可以与PD-1和CTLA-4配体表达相对较高的肺癌细胞NCI-H226结合,并且rPC处理对其生长并无直接影响,与预期一致。成功获得的重组融合蛋白rPC可用于进一步的体内外功能研究,也为今后研发新型多靶点肿瘤免疫治疗蛋白药物打下了坚实的基础。
- 李春春谢雨琼曹江邵吉民
- 关键词：重组融合蛋白PD-1CTLA-4
- 表没食子儿茶素没食子酸酯通过下调表皮生长因子受体发挥抑制喉癌细胞的作用机制研究
- 2024年
- 目的探究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)抑制喉癌细胞的作用机制。方法利用Western blotting检测喉癌细胞株AMC-HN-8、TU686和TU212中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的表达,并采用CCK-8法检测西妥昔单抗和EGCG对3种喉癌细胞的抑制作用;构建含有EGFR启动子以及Luc报告基因的慢病毒载体并感染TU686细胞,获得EGFR启动子调控表达荧光素酶的TU686-EGFR-Luc报告基因细胞系,检测EGCG处理后的荧光素酶活性;利用流式细胞术检测EGCG作用后的喉癌细胞的细胞周期和凋亡情况,并用Western blotting检测分析EGFR及下游信号通路分子ERK的表达与活化、细胞周期相关分子P53及P27、凋亡相关分子BCL2及PARP、自噬相关指标LC3A/B的水平情况。结果喉癌细胞株对西妥昔单抗不敏感,但EGCG能有效抑制喉癌细胞的生长;EGCG能有效抑制EGFR启动子的转录活性;在亚IC_(50)剂量的EGCG作用下,TU686细胞出现明显的S期细胞周期阻滞和部分凋亡;EGFR和下游信号通路的表达和激活受到明显抑制。结论EGCG可有效下调喉癌细胞的EGFR表达并抑制喉癌细胞生长,其进一步的体内作用及机制有待研究。
- 陈丽红李春春陈嘉邵吉民曹江
- 关键词：表皮生长因子受体表没食子儿茶素没食子酸酯喉癌细胞细胞周期阻滞
- 一种双增强子甲胎蛋白重组启动子及其应用
- 本发明提供一种双增强子甲胎蛋白重组启动子，是一种基因表达调控元件，为一种DNA分子，其核苷酸序列如SEQIDNo：1所示。该基因表达调控元件为带有CMV早期转录增强子和甲胎蛋白增强子双重增强子的重组人甲胎蛋白启动子，能够...
- 叶景佳曹江陈萍李春春陈丽红
- 文献传递
- Ad-ERα-36-Fc-GFP的制备及鉴定被引量：1
- 2022年
- ERα-36是雌激素受体α新亚型,促进肿瘤细胞增殖、侵袭及耐药,可作为治疗靶点,但目前仅有小分子靶向药物研发。利用重组腺病毒携带诱饵受体,可进行靶向ERα-36的基因治疗探索。首先通过基因工程技术,构建可表达由Igκ信号肽引导分泌的重组融合蛋白ERα-36-Fc的穿梭质粒pDC316-Igκ-ERα-36-Fc-GFP;利用AdMax;腺病毒包装系统进行Ad-ERα-36-Fc-GFP腺病毒的包装、鉴定及扩增;感染三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231并进行表达及功能验证。结果表明成功制备Ad-ERα-36-Fc-GFP重组腺病毒,可高效感染三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231,表达并分泌ERα-36-Fc重组蛋白,显著抑制EGFR/ERK信号通路。Ad-ERα-36-Fc-GFP腺病毒的制备为进一步开展靶向ERα-36的肿瘤基因治疗研究奠定基础。
- 谢雨琼李春春李晓烨陈丽红严毛晓曹江
- 巨细胞病毒增强子提高人甲胎蛋白启动子效率的研究被引量：1
- 2013年
- 人巨细胞病毒(CMV)早期转录增强子能够提高其他基因启动子的转录启动效率。CMV早期转录增强子对人甲胎蛋白(AFP)启动子的转录增强的作用及特异性的影响,将决定其是否适用于肝癌靶向性基因治疗。作者利用PCR法分别克隆了人AFP增强子、启动子和CMV早期转录增强子,构建了相应的pGL4.10荧光素酶报告基因载体,与内参照pGL4.74质粒共转染人肝癌细胞Hep3B、HepG2、SMMC7721和人宫颈癌细胞HeLa、乳腺癌细胞Bcap37,利用双荧光素酶检测系统检测分析了这些细胞中AFP增强子—启动子的效率。结果表明,CMV早期转录增强子能够明显增强AFP增强子—启动子在肝癌细胞中的效率(在Hep3B、HepG2和SMMC7721细胞中分别提高33.07、134.22和465.18倍),但是也能提高AFP增强子—启动子在非肝癌细胞中的效率(在HeLa和Bcap37细胞中分别提高335.73和1096.81倍)。因此,CMV增强子虽然可以大大提高AFP增强子—启动子的效率,但无特异性,直接将其用于靶向AFP的肝癌基因治疗时可能会产生由于治疗基因在正常组织中的非特异表达而引起的副作用。
- 叶景佳陈萍贾振宇李春春陈丽红曹江
- 关键词：甲胎蛋白基因治疗
