李宪奎
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- TDAG51过表达诱导PC12细胞凋亡
- 目的：本实验设计以PC12细胞作为神经细胞的体外模型，探究TDAG51基因在神经系统中是否像在T细胞中那样，具有促进凋亡的作用，并初步探讨其机制。
方法：实验分为三组，实验组是用表达克隆载体绿色荧光蛋白质粒(...
- 李宪奎
- 关键词：神经系统CASPASE-9PC12细胞凋亡
- 文献传递
- TDAG51基因在PC12细胞中的过表达及其致凋亡作用被引量：1
- 2005年
- 目的 探讨TDAG5 1基因在PC12细胞中的表达及其作用机制。方法 实验分为3组,实验组用绿色荧光蛋白质粒(p EGFP - C1 )载体把外源性TDAG5 1基因转染的PC12细胞;空载体对照组用p EGFP- C1 转染的PC12细胞;对照组未转染任何试剂的PC12细胞。在转染后2 4 h、4 8h、72 h收集细胞,用Western blotting检测过表达的TDAG5 1蛋白;转染后84 h用相差显微镜观察PC12细胞形态的变化;Hoechst332 5 8染色观察细胞核形态变化;检测凋亡执行蛋白Caspase- 3的变化。结果 TDAG5 1基因在PC12细胞中高表达;TDAG5 1基因过表达的细胞与两对照组细胞相比较,胞体变圆,轴突缺失;荧光显微镜下观察PC12细胞可见胞核固缩、染色质凝集,并可见核碎片;前Caspase- 3蛋白活化被切割;活化的17k Da Caspase- 3随TDAG5 1蛋白的作用时间延长而增多。结论 过表达TDAG5 1基因可诱导PC12细胞凋亡。
- 李宪奎张百芳彭芳芳杞少华沈晗吴少波武栋成
- 关键词：凋亡PC12CASPASE-3
- p53蛋白参与NGF诱导的PC12细胞周期阻滞被引量：1
- 2004年
- 通过观察不同营养状况下NGF诱导PC12细胞发生周期阻滞过程中p53蛋白水平的变化,探讨p53在PC12细胞周期阻滞中可能的作用机制.用流式细胞术检测细胞周期;Westernblot检测p53和p21WAF1/CIP蛋白水平.结果显示1%FBS(FatalBovineSerum)和50μg/LNGF(NerveGrowthFactor)均可诱导PC12细胞发生细胞周期阻滞.在10%FBS+50μg/LNGF处理的细胞中,p53和p21WAF1/CIP1均增高,而使用MEK抑制剂U0126(10μmol/L)可以抑制这一增高.在1%FBS处理的细胞中,p53水平增高,p21WAF1/CIP1却未见明显增高;进而加入50μg/LNGF作用1h后,p53显著降低,6h后再次升高,并持续至24h.可见p53在50μg/LNGF和1%FBS诱导的细胞周期阻滞中均发挥作用,但作用机制可能不同.
- 吴少波张雯彭芳芳张百芳沈晗杞少华李宪奎武栋成
- 关键词：NGFFBSPC12细胞
- pEGFP-MEK1/Q56P重组质粒的构建及融合基因在293T细胞中的表达
- 2004年
- 构建第56位氨基酸发生突变的MEK1基因(MEK1/Q56P)与增强绿色荧光蛋白(EGFP)报道基因融合表达的真核重组质粒pEGFP MEK1/Q56P,经限制性酶切及测序鉴定后,将其导入293T细胞中,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,同时进行Westernblot检测。酶切鉴定及测序结果表明构建的pEGFP MEK1/Q56P与预期结果一致,荧光观察及Westernblot结果表明MEK1/Q56P和EGFP在293T细胞中能以融合蛋白的形式表达,且MEK1/Q56P能特异性活化ERK1/2.本研究成功构建了含有MEK1/Q56P的绿色荧光蛋白真核表达质粒,便于对Raf/MEK1/ERK1/2信号传导通路做进一步研究.
- 沈晗彭芳芳张百芳吴少波李宪奎杞少华武栋成
- 关键词：绿色荧光蛋白质粒
