吴少波
- 作品数：11 被引量：23H指数：3
- 供职机构：武汉大学更多>>
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- TDAG51基因在PC12细胞中的过表达及其致凋亡作用被引量：1
- 2005年
- 目的 探讨TDAG5 1基因在PC12细胞中的表达及其作用机制。方法 实验分为3组,实验组用绿色荧光蛋白质粒(p EGFP - C1 )载体把外源性TDAG5 1基因转染的PC12细胞;空载体对照组用p EGFP- C1 转染的PC12细胞;对照组未转染任何试剂的PC12细胞。在转染后2 4 h、4 8h、72 h收集细胞,用Western blotting检测过表达的TDAG5 1蛋白;转染后84 h用相差显微镜观察PC12细胞形态的变化;Hoechst332 5 8染色观察细胞核形态变化;检测凋亡执行蛋白Caspase- 3的变化。结果 TDAG5 1基因在PC12细胞中高表达;TDAG5 1基因过表达的细胞与两对照组细胞相比较,胞体变圆,轴突缺失;荧光显微镜下观察PC12细胞可见胞核固缩、染色质凝集,并可见核碎片;前Caspase- 3蛋白活化被切割;活化的17k Da Caspase- 3随TDAG5 1蛋白的作用时间延长而增多。结论 过表达TDAG5 1基因可诱导PC12细胞凋亡。
- 李宪奎张百芳彭芳芳杞少华沈晗吴少波武栋成
- 关键词：凋亡PC12CASPASE-3
- p53蛋白参与NGF诱导的PC12细胞周期阻滞被引量：1
- 2004年
- 通过观察不同营养状况下NGF诱导PC12细胞发生周期阻滞过程中p53蛋白水平的变化,探讨p53在PC12细胞周期阻滞中可能的作用机制.用流式细胞术检测细胞周期;Westernblot检测p53和p21WAF1/CIP蛋白水平.结果显示1%FBS(FatalBovineSerum)和50μg/LNGF(NerveGrowthFactor)均可诱导PC12细胞发生细胞周期阻滞.在10%FBS+50μg/LNGF处理的细胞中,p53和p21WAF1/CIP1均增高,而使用MEK抑制剂U0126(10μmol/L)可以抑制这一增高.在1%FBS处理的细胞中,p53水平增高,p21WAF1/CIP1却未见明显增高;进而加入50μg/LNGF作用1h后,p53显著降低,6h后再次升高,并持续至24h.可见p53在50μg/LNGF和1%FBS诱导的细胞周期阻滞中均发挥作用,但作用机制可能不同.
- 吴少波张雯彭芳芳张百芳沈晗杞少华李宪奎武栋成
- 关键词：NGFFBSPC12细胞
- Cdk5及其激活物p35参与了星形孢菌素诱导的小鼠大脑皮层神经元凋亡
- 张百芳彭芳芳张雯吴少波沈晗武栋成
- 拓扑替康胞内浓度降低——卵巢癌细胞耐药的一种新机制
- 2004年
- 目的 探讨卵巢癌拓扑替康 (TPT)耐药细胞株中TPT胞内浓度的变化。方法 建立卵巢癌TPT耐药细胞株 ,四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法检测该细胞株对多种化疗药物的耐药指数 ,流式细胞仪检测 2株细胞在不同条件下的TPT胞内浓度。结果 该细胞株对TPT及米托蒽醌 (MX)耐药。耐药细胞的TPT泵出速率明显快于亲本细胞的泵出速率 ,胞内TPT浓度约为亲本细胞的 1/ 6 (P <0 0 5 ) ;低温时 2株细胞的TPT泵出均受抑制 ;能量不足时 ,耐药细胞的TPT泵出减少 ,胞内浓度由 13 78增加到 2 0 13(P <0 0 5 )。结论 能量依赖性的拓扑替康胞内浓度降低是卵巢癌细胞耐药的一种机制。
- 贾平吴少波李芳奚玲廖国宁卢运萍马丁
- 关键词：耐药细胞株拓扑替康四甲基偶氮唑蓝流式细胞仪检测米托蒽醌
- Cdk5在NGF撤退和STS诱导的PC12细胞凋亡中的作用
- 凋亡是神经系统发育中的正常生理现象。但在成年脑中，神经细胞的凋亡又成为某些急性和非急性神经退行性疾病如脑缺血、脑外伤、帕金森病和阿尔茨海默病等潜在的致病因素。已有研究表明，细胞周期素依赖性蛋白激酶-5(Cdk5)的异常表...
- 吴少波
- 关键词：CDK5PC12细胞凋亡
- 文献传递
- Cdk5及其激活物p35参与了星形孢菌素诱导的小鼠大脑皮层神经元凋亡
- 星形孢菌素(staurosporine,STS)被广泛用于诱导各种神经细胞系及神经元和胶质细胞凋亡,并可出现典型的凋亡特征,但其作用的确切机制目前仍不清楚。本实验用STS诱导原代培养的小鼠大脑皮层神经元凋亡,探讨了STS...
- 张百芳彭芳芳张雯吴少波沈晗武栋成
- 文献传递
- ERK在NGF诱导PC12细胞分化中的作用被引量：6
- 2005年
- 目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK)在NGF诱导的PC12细胞分化中的作用机制。方法以NGF处理PC12细胞建立分化模型,运用免疫印迹检测不同浓度不同作用时间时NGF对ERK1/2蛋白和磷酸化ERK1/2蛋白水平的影响,并观察MAPK/ERK激酶(MEK)抑制剂U0126对NGF诱导的细胞形态学改变的影响。结果ERK1/2蛋白的磷酸化呈现NGF剂量和时间依赖性。NGF作用细胞5min即可观察到明显的ERK1/2蛋白磷酸化,持续1h左右,2h时降低到初始水平,而细胞形态的改变出现在NGF作用12h以后。倒置相差显微镜观察可见PC12细胞分化的程度与ERK1/2活化持续的时间正相关,U0126可完全即时抑制ERK1/2的活化,而ERK1/2活化的抑制可完全阻断NGF诱导的PC12细胞分化。结论ERK1/2的活化是PC12细胞发生分化的必需事件,其活化时间的长短对分化具有决定作用。
- 张雯彭芳芳张百芳沈晗吴少波武栋成
- 关键词：细胞分化细胞形态学改变PC12细胞免疫印迹检测蛋白磷酸化微镜观察细胞发生
- 卵巢癌细胞拓扑替康耐药机制的探讨被引量：8
- 2004年
- 目的 探讨人卵巢癌细胞对拓扑替康 (TPT)的耐药机制。方法 流式细胞仪检测卵巢癌TPT耐药细胞与亲本细胞的胞内罗丹明 (Rh12 3)荧光强度 ,RT PCR法检测各膜转运蛋白 (P gp、MRP、BCRP)的基因表达。将包含BCRPmRNA翻译起始位点的反义寡核苷酸 (ASODN)片段转染进耐药细胞 ,分别检测耐药细胞经体外转染后 ,BCRP的基因表达及胞内Rh12 3荧光强度的改变。结果 耐药株的胞内Rh12 3荧光强度是亲本细胞的 31.19% (P <0 .0 1)。耐药株中无P 糖蛋白 (P gp)的基因表达 ;多药耐药相关蛋白 (MRP)基因有极微弱表达 ,相对表达值为 0 .0 5 7;而BCRP基因在耐药株中高表达 ,相对表达值为 0 .6 6 ,亲本细胞不表达BCRP基因。将ASODN转染进耐药细胞后 ,BCRP的基因表达显著下降了 5 9.4 2 % (P <0 .0 5 ) ,胞内Rh12 3荧光强度由 5 .4 2增加到 16 .6 3(P <0 .0 5 )。结论 BCRP的高表达致胞内化疗药物浓度减少 ,是卵巢癌细胞对TPT耐药的主要原因。
- 贾平吴少波李芳徐茜吴明富廖国宁卢运萍马丁
- 关键词：卵巢癌拓扑替康膜转运蛋白耐药蛋白流式细胞仪耐药机制
- 反义寡核苷酸逆转卵巢癌细胞对拓扑替康耐药性的研究被引量：6
- 2003年
- 背景与目的:研究表明乳腺癌耐药蛋白(breastcancerresistanceprotein,BCRP)在卵巢癌拓扑替康(topotecan,TPT)耐药株A2780/TPT中存在高表达,它可能在卵巢癌耐药中起着重要的作用。本研究拟探讨BCRP反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotide,ASODN)片段对A2780/TPT细胞耐药的逆转作用。方法:人工合成包含BCRPmRNA翻译起始位点的ASODN片段,并合成相应的正义寡核苷酸(senseoligonucleotide,SODN)片段作为对照。用脂质体Lipofect-2000将ASODN及SODN分别转染进A2780/TPT细胞,分别用RT-PCR法、流式细胞仪及MTT法检测A2780/TPT细胞经体外转染后,BCRPmRNA的表达、胞内罗丹明荧光强度及对TPT耐药指数的改变。结果:将ASODN/Lipofect-2000转染进A2780/TPT耐药细胞后,细胞内BCRPmRNA的表达较未转染细胞下降了59.42%(P<0.05),胞内罗丹明荧光强度由转染前的5.42增加到16.63(P<0.05),耐药指数由25降到5。而转染SODN/Lipofect-2000的A2780/TPT细胞中,上述指标无显著性变化。结论:转染ASODN/Lipofect-2000可部分逆转BCRP介导的卵巢癌细胞耐药。
- 贾平吴少波徐茜吴明富高庆蕾廖国宁卢运萍马丁
- 关键词：反义寡核苷酸逆转拓扑替康耐药性乳腺肿瘤
- pEGFP-MEK1/Q56P重组质粒的构建及融合基因在293T细胞中的表达
- 2004年
- 构建第56位氨基酸发生突变的MEK1基因(MEK1/Q56P)与增强绿色荧光蛋白(EGFP)报道基因融合表达的真核重组质粒pEGFP MEK1/Q56P,经限制性酶切及测序鉴定后,将其导入293T细胞中,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,同时进行Westernblot检测。酶切鉴定及测序结果表明构建的pEGFP MEK1/Q56P与预期结果一致,荧光观察及Westernblot结果表明MEK1/Q56P和EGFP在293T细胞中能以融合蛋白的形式表达,且MEK1/Q56P能特异性活化ERK1/2.本研究成功构建了含有MEK1/Q56P的绿色荧光蛋白真核表达质粒,便于对Raf/MEK1/ERK1/2信号传导通路做进一步研究.
- 沈晗彭芳芳张百芳吴少波李宪奎杞少华武栋成
- 关键词：绿色荧光蛋白质粒
