徐浩
- 作品数：10 被引量：48H指数：5
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程生物学文化科学更多>>
- 关中奶山羊乳主要成分的质量分数及理化特性研究被引量：10
- 2006年
- 用Milko-Scan乳质综合测定仪对220份关中奶山羊生鲜乳的主要成分的质量分数进行了测定。结果表明,关中奶山羊生鲜乳中的脂肪、蛋白质、非脂乳固体、乳糖和干物质的平均质量分数分别为4.88%,2.74%,7.80%,4.36%和12.91%。乳的化学成分质量分数与饲养管理条件有密切关系。关中奶山羊乳中的脂肪质量分数和干物质质量分数呈正相关。同时对100份关中奶山羊生鲜乳的部分理化指标进行了测定,结果表明,关中奶山羊乳的比重为1.0285～1.0333,乳的滴定酸度为13.455±0.236°T。
- 郭抗抗张彦明徐浩王养会
- 关键词：关中奶山羊山羊乳
- 载体介导的shRNA抑制猪瘟病毒在PK-15细胞中增殖特性的研究被引量：7
- 2007年
- 利用生物学软件分析猪瘟病毒NS3基因,设计针对NS3基因不同位置的干扰序列,化学合成这些序列,然后退火连接为双链干扰片段,再定向克隆到干扰载体中,将酶切和序列测定鉴定正确的重组载体命名为pGene-NS3-1、pGene-NS3-2、pGene-NS3-3、pGene-NS3-Negative。重组干扰载体经纯化后转染PK-15细胞,并进行G418抗性筛选。克隆细胞扩大培养后,接种猪瘟病毒Shimen株,收集细胞分别进行实时定量PCR和ELISA光吸收度分析。Real-time PCR分析表明,与对照细胞比较,pGene-NS3-1、pGene-NS3-2、pGene-NS3-3转录产生的shRNA分子均在一定程度上沉默了病毒的基因,抑制率约为63%、46%、49%。ELISA检测结果表明,转染pGene-NS3-1、pGene-NS3-2、pGene-NS3-3重组载体的PK-15细胞均在不同程度上抑制了猪瘟病毒粒子的增殖。
- 冶贵生张彦明徐浩
- 关键词：猪瘟病毒RNAISHRNAPK-15细胞
- 猪脐静脉血管内皮细胞永生化的初步研究被引量：5
- 2007年
- 为了建立稳定的血管内皮细胞系,进而为研究猪瘟病毒致病机理提供理想的细胞模型,将脂质体转染的pCIneo-hTERT质粒导入原代猪脐静脉血管内皮细胞中,经G418抗性筛选,挑取阳性克隆并扩大培养。对转染后的细胞进行形态观察,研究其增殖及生长特征,并对其端粒酶活性进行了鉴定。结果表明,转染细胞单层贴壁生长,有接触抑制性,呈铺路石状;F-ⅧAg和CD34免疫荧光鉴定阳性,具有转染前细胞特征;转染后细胞培养代数增加,传至第10代和15代转染后细胞端粒酶活性检测为阳性。说明hTERT转染可以延长猪血管内皮细胞的寿命。
- 马泉荔洪海霞张彦明徐浩杨蒙苏正元
- 关键词：端粒酶催化亚基脐静脉血管内皮细胞
- 关中奶山羊乳成分及理化特性研究
- 用Milko-Scan乳质综合测定仪对220份关中奶山羊生鲜乳的成分含量进行了测定,结果表明,关中奶山羊生鲜乳中的脂肪、蛋白质、非脂乳固体、乳糖和干物质的平均含量分别为4.88％,2.74％,7.80％,4.36％和12...
- 张彦明郭抗抗徐浩王养会
- 关键词：关中奶山羊山羊乳化学成分非脂乳固体乳糖
- 文献传递
- 猪瘟病毒NS3蛋白致PK-15细胞病变作用及转录靶向猪瘟病毒3'-UTR shRNA细胞株的建立
- 目前研究倾向认为猪瘟病毒(CSFV)非结构蛋白NS3是致细胞病变作用(CPE)的关键，细胞内NS3蛋白的量与细胞出现CPE之间存在着相关性。利用PK-15细胞系表达非结构蛋白NS3来研究CSFV致细胞病变的机理，既有利于...
- 徐浩
- 关键词：猪瘟病毒细胞凋亡率有限稀释法
- 文献传递
- 靶向猪瘟病毒NS3基因shRNA干扰载体的构建与鉴定被引量：3
- 2007年
- 利用RNA干扰在线生物学软件分析猪瘟病毒NS3基因,设计针对NS3基因不同位置的小发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰序列(其结构特征为正链(19nt)-环(9nt)-负链(19nt))。化学合成这些序列,并退火连接为双链干扰片段,将双链干扰片段定向克隆到干扰载体中,构建重组载体pGene-NS3-1,pGene-NS3-2和pGene-NS3-3,转化DH5α大肠杆菌感受态细胞,对转化产物进行kan+筛选,碱裂解法提取重组质粒,将酶切鉴定为阳性的质粒测序。结果显示,双链干扰片段克隆方向正确,序列中未出现核苷酸的插入,缺失等突变现象。表明靶向猪瘟病毒NS3基因shRNA干扰载体构建成功。
- 冶贵生张彦明徐浩郭抗抗
- 关键词：猪瘟病毒RNA干扰
- 鸡肾型传染性支气管炎病毒的分离鉴定被引量：5
- 2005年
- 从陕西省榆林市某蛋用种鸡场疑似肾型传染性支气管炎病鸡中分离到了1 株肾型IBV(定名为YL 04),并对分离病毒进行了血凝性、血凝抑制性、致病性、鸡胚矮小化、电镜特征等生物学特性鉴定及S1基因5′端的RT PCR鉴定。结果表明,该分离株经10 g/L胰酶处理后的各代病毒尿囊收集液均可凝集鸡红细胞;标准阳性血清可特异性地抑制其凝集性;可复制出与自然发病相同的病例;病毒传代物有明显的致鸡胚矮小化作用;透射电镜下可见有近似球形、直径100 nm左右的冠状病毒粒子;用RT PCR方法扩增到1 条373 bp的目的片段,其核苷酸序列与IBV CQ/01/2004株序列的同源性达98%。
- 倪斌张彦明孙裴王晶钰穆杨张永国魏中锋徐浩
- 关键词：肾型传染性支气管炎病毒S1基因
- 转录靶向猪瘟病毒3'-UTR shRNA细胞株的初步建立被引量：3
- 2007年
- 利用质粒载体在细胞内转录并加工成siRNA的方法,设计3对针对猪瘟病毒3'-UTR不同位点的干扰片段,分别与干扰载体pGenesil-1连接,转化DH5α,筛选阳性克隆得到重组干扰质粒pGene-1,pGene-2和pGene-3,脂质体介导转染重组干扰质粒于PK-15细胞,G418抗性筛选得到转录靶向猪瘟病毒3'-UTR shRNA的PK-15细胞株,为今后应用RNAi研究猪瘟病毒3'-UTR调控病毒复制的功能以及抑制猪瘟病毒增殖的研究奠定了基础。
- 徐浩张彦明冶贵生郭抗抗
- 关键词：SHRNA猪瘟病毒PK-15细胞G418
- 转录靶向猪瘟病毒3′-UTRshRNA细胞株干扰猪瘟病毒增殖的检测被引量：3
- 2008年
- 对筛选的转录猪瘟病毒石门株3-′UTR shRNA的PK-15细胞株P-1（114-132位）、P-2（136-154位）和P-3（209-227位）分别接种猪瘟病毒（CSFV）,在接毒后第72和96小时用半定量反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测CSFVNS3基因及-βactin基因,以研究构建细胞株在转录水平上对CSFV增殖干扰的效果;接毒后第72、96和148小时以酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测细胞NS3蛋白表达量,通过OD490值分析构建细胞株在病毒蛋白表达水平上对CSFV增殖的影响。检测结果表明：（1）接毒后第72和96小时P-1、P-2和P-3细胞株中NS3基因的量明显减少,与接毒的空白PK-15细胞比较差异显著（P〈0.05）,说明P-1、P-2和P-3细胞株转录的shRNA能干扰CSFV RNA的转录;（2）接毒后第72和96小时P-1、P-2、P-3细胞株中NS3蛋白的表达量明显少于接毒的PK-15细胞（P〈0.05）,说明转录的shRNA在病毒蛋白水平上能干扰CSFVNS3基因的表达,但接毒后第148小时干扰效果有所降低。
- 郭抗抗徐浩张彦明张为民冶贵生熊奎州谢林红党如意
- 关键词：半定量RT-PCRELISA猪瘟病毒
- 抗猪瘟病毒NS3(p80)蛋白单克隆抗体的制备及其特性鉴定被引量：14
- 2008年
- 在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达猪瘟病毒石门株NS3基因部分功能片段,以纯化的重组NS3(p80)蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经间接ELISA筛选及3次连续克隆化获得了4株可分泌抗NS3单抗的杂交瘤细胞(2G7,2F11,5D2和6F11),通过小鼠体内诱生法制备腹水,并对杂交瘤细胞和单克隆抗体的特性进行鉴定。结果表明,杂交瘤细胞染色体正常,抗体分泌稳定,单抗效价高,亲和力各不相同,Ig亚类鉴定均为IgG1。Westernblot分析证明4株单抗均能与原核表达的NS3蛋白特异性结合,6F11株与真核表达的NS3蛋白有较强的特异性反应。
- 鲁絮张彦明郑增忍穆杨龚振华李葳徐浩余欣
- 关键词：猪瘟病毒蛋白纯化单克隆抗体
