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张婷: 作品数：17 被引量：15H指数：2; 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>; 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目国家科技重大专项江苏省“青蓝工程”基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

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rhPA/GH双转基因兔的制备及rhPA表达检测被引量：1: 2021年; 【目的】双基因共整合可协同促进转基因生物的目的基因表达水平提高,研究获得rhPA/GH双转基因兔,并比较分析目的基因rhPA的表达水平及兔个体生长发育情况,为制备高表达rhPA转基因动物和遗传育种提供新思路。【方法】利用NotⅠ/SalⅠ双酶切PCL25/GH质粒和QIAGEN DNA胶纯化试剂盒回收显微注射用基因片段。以3只rhPA单转基因兔(标号K06、K10、K17)作为供体兔,通过FSH/hCG超数排卵、受精卵原核显微注射、胚胎移植、苯酚/氯仿抽提新生仔兔耳尖组织基因组、PCR整合检测等方法获得rhPA/GH双转基因兔。经ELISA和Western blotting对转基因兔乳清进行表达检测,比较分析单、双基因表达rhPA水平。测量不同月龄的转基因兔体重,通过监测双转基因兔不同生长阶段的体重来分析GH对兔生长发育的影响。【结果】成功获得了约16700 bp大小的显微注射用基因片段,共超排3只供体兔获得122枚卵,其中103枚受精卵,受精率为84.4%(103/122),显微注射后挑取形态较好的81枚移植6只同步发情受体兔,5只兔怀孕,妊娠率为83.3%(5/6),妊娠到期共出生32只仔兔。通过PCR检测鉴定有19只携带rhPA基因的转基因兔,其中有11只rhPA/GH双转基因兔(7♂,4♀),双基因整合率为34.4%(11/32),且4只rhPA/GH双转基因母兔来源亲代分别为K06供体兔2只(标号K06-1、K06-2)、K10供体兔1只(标号K10-1)、K17供体兔1只(标号K17-1)。K06号rhPA单转基因兔乳清中rhPA表达量为42.2μg·mL^-1,K06-1和K06-2号rhPA/GH双转基因兔乳清中rhPA表达量分别为432、444μg·mL^-1;K10号rhPA单转基因兔乳清中rhPA表达量为42.8μg·mL^-1,K10-1号rhPA/GH双转基因兔乳清中rhPA表达量为636μg·mL^-1;K17号rhPA单转基因兔乳清中rhPA表达量为15.2μg·mL^-1,K17-1号rhPA/GH双转基因兔乳清中rhPA表达量为248μg·mL^-1。4只rhPA/GH双转基因母兔(K06-1、K06-2、K10-1、K17-1)乳腺表达rhPA含量在248-636μg·mL^-1之间,远远高于rhP; 宋绍征于康英张婷陆睿潘生强成勇周鸣鸣; 关键词：超数排卵显微注射

人乳铁蛋白(hLF)转基因山羊的遗传背景分析: 2020年; 以随机整合方式获得的转基因动物外源基因的拷贝数、整合位点及染色体核型等遗传背景并不清楚,可能会存在外源基因的沉默整合、无效整合、毒性整合以及其表达水平不可预测等问题。文中选取了6只原代(F0)及其相对应的子一代(F1)的人乳铁蛋白(hLF)转基因山羊作为研究对象,分别颈静脉采血、提取DNA,通过染色体核型分析、实时荧光定量PCR(qPCR)、ELISA和Westernblotting等检测技术,研究其外源基因的遗传背景与表达水平。结果显示,6只F0代转基因山羊的染色体没有明显的形态变异、数量改变等异常情况。相对拷贝数高低不同(2–16),且能够稳定地遗传给下一代,F0和F1代hLF基因拷贝数一致。F1代转基因山羊表达hLF水平最高可达1.12 g/L(L3-1,拷贝数8)。结果表明,整合的外源基因能够稳定地遗传下一代,也没有对转基因山羊个体的生长发育造成障碍,而且拷贝数高低与hLF表达水平无明显的相关性,这为转基因山羊及其他转基因动物的新品种培育奠定了基础,解析了遗传背景。; 宋绍征张旻李丹陈朝军于康英张婷周鸣鸣成勇; 关键词：转基因动物乳铁蛋白拷贝数

利用CRISPR/Cas9技术制备ApoE-/-兔被引量：2: 2018年; 目的制作载脂蛋白E（ApoE）基因敲除（ApoE^（-/-））兔,为研究动脉粥样硬化提供优良动物模型。方法应用CRISPR/Cas9系统编辑新西兰兔的Apo E基因,制作F0代ApoE^（-/-）兔,利用PCR、TA克隆、Sanger测序、Western blot和血脂检测鉴定Apo E靶向敲除的效率和效果,并通过传代获得ApoE^（＋/-）兔。结果 Sanger测序结果显示成功靶向敲除兔ApoE基因,血清脂蛋白含量在正常饮食状态下相对于野生型兔有升高,且可稳定遗传。结论成功建立了ApoE^（-/-）兔,为进一步研究动脉粥样硬化和其他相关疾病提供了良好的动物模型。; 袁婷婷周敏雅卢瑶瑶陆睿张婷孙雨婷钟港王梦恬黄俊杰胡艳华梁景岩成勇; 关键词：载脂蛋白E 基因敲除新西兰兔血脂

CRISPR/Cas9系统介导的人乳铁蛋白基因在山羊β-乳球蛋白基因座定点敲入被引量：4: 2020年; 为研究山羊乳蛋白基因编辑,实现羊乳"人源化"改造。利用CRISPR/Cas9系统敲除山羊乳中致敏原β-乳球蛋白(BLG)基因,同时在BLG基因座定点敲入人乳铁蛋白(hLF)基因。针对山羊BLG基因第一外显子设计构建sgBLG/Cas9表达载体经电转染山羊胎儿成纤维细胞验证其编辑活性;将打靶载体BLC14与sgBLG/Cas9载体共转染山羊胎儿成纤维细胞,经筛选检测获得BLG^-/hLF^+打靶细胞株作为供核细胞用于山羊体细胞核移植;通过剖宫产获取克隆胎儿并验证其中靶情况。结果表明:sgBLG/Cas9编辑山羊BLG位点致突变率约为30%~35%;共筛选72株药物抗性细胞株,其中有37株为基因打靶细胞,打靶效率为51.4%(37/72);挑取形态较好的7株打靶细胞用于核移植,共制备416枚重构胚,移植30只受体山羊;30-35日龄B超诊断有13只受孕,妊娠率为43.3%(13/30);剖宫产获取3只35日龄克隆胎儿均验证为BLG^-/hLF^+基因型,并建立了BLG^-/hLF^+靶向性修饰细胞系。因此,利用CRISPR/Cas9系统可以获得BLG基因座定点打靶hLF基因的转基因克隆山羊,该研究为培育羊乳中低致敏原和富含hLF功能营养成分的转基因山羊新品系提供了科学依据。; 宋绍征张婷潘生强陆睿成勇周鸣鸣; 关键词：Β-乳球蛋白人乳铁蛋白基因打靶核移植

贵妃鸡传染性法氏囊病的诊断与治疗: 2009年; 江苏泰兴市某鸡场育雏贵妃鸡在15日龄同时接种了新城疫（NDV）Ⅳ系和传染性法氏囊病（IBDV）中等毒力疫苗。40日龄出现精神沉郁，采食量严重下降，近30％鸡只卧地，大部分鸡只消瘦，鸡群大小不均匀，拉绿色、黄色、白色稀便。当地兽医诊断为IBDV和NDV或AIV混合感染。注射IBDV高免蛋黄2次后，病情却反复数次且日趋严重，随后送本实验室诊断。经实验室微生物学和免疫学方法检测，确诊该鸡群为IBDV感染。现报告如下。; 罗冠群张晨飞张婷邓绪芳顾林林仇钰陈娟娟邵红霞秦爱建; 关键词：鸡传染性法氏囊病兽医诊断贵妃鸡 IBDV感染免疫学方法

TALENs介导MSTN基因突变山羊的制备及性能分析被引量：1: 2022年; 肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)是一种骨骼肌生长发育的负调控因子,可以抑制成肌细胞的增殖,是动物品种改良的重要候选基因,该基因突变能够引起骨骼肌的广泛性增生与肥大,产生“双肌”症状,导致动物脂肪分化减少、肌肉含量增加,从而满足市场动物肉品质消费的需求。为了获得“双肌”表型的MSTN基因突变克隆山羊,本研究在山羊MSTN基因第一外显子序列设计并构建TALENs表达载体,转染山羊胎儿成纤维细胞,经嘌呤霉素筛选获得抗性细胞株,通过PCR检测和基因测序筛选MSTN基因突变细胞株作为供核细胞进行山羊体细胞核移植,并鉴定MSTN基因突变类型;通过组织切片分析MSTN基因突变山羊肌肉组织形态结构,监测不同月龄克隆山羊体重并分析其不同生长发育阶段的体重增长趋势。结果表明,共获得109株MSTN基因突变细胞株,突变效率达到79.0%(109/138),其中46株为双等位基因突变,占细胞株总数的33.3%(46/138)。选取4株生长状态较好的MSTN基因突变细胞株(1株为双等位基因纯合突变,3株为非纯合突变)进行体细胞核移植至12只受体山羊,30 d时B超检查出受孕母羊4只,受孕率为33.3%(4/12),妊娠到期分娩2只克隆山羊,测序结果表明M-1克隆山羊MSTN双等位基因中的一个等位基因未产生突变,另一个等位基因缺失3 bp;M-2克隆山羊MSTN双等位基因中的一个等位基因产生1 bp碱基插入,另一个等位基因缺失13 bp,两种突变均造成MSTN在突变位点之后的蛋白序列丢失。此外,M-1克隆山羊肌纤维排列紧密且粗大,每月体重均高于普通野生型山羊,但与普通野生型山羊生长趋势一致,且能够健康发育至成年。本研究利用TALENs技术成功介导山羊MSTN基因定点修饰,并获得MSTN基因突变的山羊胎儿成纤维细胞,将其作为供核细胞成功生产MSTN基因突变克隆山羊,为培育“双肌”表型山羊新品系奠定了技术基础,也为将�; 宋绍征何正义成勇于宝利张婷李丹; 关键词：肌肉生长抑制素基因突变山羊体细胞核移植

CRISPR/Cas9介导兔MSTN基因靶向敲除研究: 肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)是骨骼肌生长发育的负调控因子,属于转化生长因子β(transforming growthfactorβ,TGF-β)超家族成员。目前已研究过的不同哺乳物种间的MSTN基因结构...; 张婷陆睿梅珺琰吴岱君何正义成勇; 关键词：MSTN基因体外转录显微注射; 文献传递

CRISPR /Cas9基因编辑技术在山羊和绵羊中的应用研究进展被引量：3: 2020年; CRISPR/Cas9系统是近年来新兴的一种基因编辑技术,可将特定DNA基因序列敲除、插入或定点突变,具有快捷、高效、精准、特异性高等特点,广泛地应用于遗传育种、生物医药和基因工程等研究领域。山羊和绵羊是重要的经济家畜动物和实验动物,利用CRISPR/Cas9基因编辑系统对羊进行遗传修饰,将加速品种改良,提高动物生产性能,获得更加优质的农副产品。主要对CRISPR/Cas9基因编辑技术的概述、作用机理及在羊乳"人源化"改造、提高肉品质、改善毛纤维质量等方面的应用研究进展及发展前景作简要阐述,以期为相关科研人员提供参考。; 宋绍征陆睿张婷何正义吴赵曼秋成勇周鸣鸣; 关键词：基因组山羊绵羊

羊乳“人源化”改造的两大利器——TALEN和CRISPR/Cas9的应用研究进展: 2021年; 羊乳是一种理想的牛乳过敏症患者的替代乳品,TALEN和CRISPR/Cas9基因编辑技术是羊乳"人源化"改造的两大利器,能够与核酸内切酶相结合,特异性识别并结合生物体基因位点,切割DNA双链,导致双链断裂。通过同源重组(homologous recombination, HR)或非同源末端连接(non-homologous end joining,NHEJ),可以对哺乳动物乳蛋白基因或其他生物体基因组进行定向精确修饰,具有简单、高效、精准、定向等特点,是近年来一种新兴的生物技术,被广泛应用于基因工程、动植物遗传育种及其他生物医学各领域。但在羊乳"人源化"改造中的应用综述研究尚未见报道,故本文主要对这两种基因编辑技术的基本结构与作用机理、发展历史、羊乳基因编辑研究进展、本课题组研究现状及展望进行综述,以期为相关研究提供参考。; 宋绍征张婷陆睿成勇周鸣鸣; 关键词：羊乳 TALEN 基因组

GH/tPA双转基因小鼠的制备及其表达分析: 2021年; 目的旨在获得GH/tPA双转基因小鼠,并比较分析小鼠乳腺中人组织纤溶酶原激活剂(tPA)的表达水平和个体生长发育状况。方法利用2只tPA单转基因雄性小鼠(P03、P05)与经超数排卵处理的正常非转基因雌性小鼠交配,受精卵显微注射线性化的GH质粒、胚胎移植而获得后代小鼠,PCR检测基因整合情况,ELISA和Western blotting检测比较单、双基因表达tPA水平,监测转基因小鼠不同生长阶段的体质量来分析GH基因对小鼠生长发育的影响。结果P03系小鼠共获得286枚受精卵,移植受体母鼠后,顺利产仔77只,经PCR检测获得16只tPA单转基因小鼠(7♂,9♀),13只GH/tPA双转基因小鼠(8♂,5♀),双基因整合率为16.9%;P05系小鼠共获得175枚受精卵,移植受体母鼠后,顺利产仔34只,经PCR检测获得12只tPA单转基因小鼠(5♂,7♀),7只GH/tPA双转基因小鼠(3♂,4♀),双基因整合率为20.6%。单、双转基因小鼠乳腺中表达tPA的最高量分别为82.5μg/mL、674μg/mL,GH/tPA双转基因小鼠乳腺中表达tPA的量明显高于tPA单转基因(P<0.05)。在小鼠的整个生长周期内,单、双转基因与正常非转基因小鼠的体质量增长均没有显著的差异(P>0.05)。结论本实验成功地制备了GH/tPA双转基因小鼠,结果表明GH基因导入小鼠体内能够显著地提高目的基因tPA的表达水平,且不会对转基因小鼠的生长发育造成任何明显的影响,这为将来制备高表达转基因动物生产医药蛋白及其育种奠定了基础。; 宋绍征李丹何正义张婷成勇周鸣鸣; 关键词：超数排卵显微注射

张婷

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