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周丽
作品数:
4
被引量:10
H指数:2
供职机构:
中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所
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相关领域:
生物学
医药卫生
理学
化学工程
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合作作者
姬秋彦
中国医学科学院北京协和医学院医...
李智华
中国医学科学院北京协和医学院医...
徐维明
中国医学科学院北京协和医学院医...
马雁冰
中国医学科学院北京协和医学院医...
戴长柏
中国医学科学院北京协和医学院医...
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作者
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周丽
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姬秋彦
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年份
1篇
2003
2篇
1999
1篇
1998
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人白细胞介素-6基因的克隆表达和纯化的研究
被引量:6
1999年
目的:研究人IL6基因在大肠杆菌中的高效表达及表达产物的纯化。方法:采用RT-PCR方法克隆了人IL6cDNA,用pBV220载体对IL6基因进行了表达调控研究,用阴离子交换柱和凝胶柱对表达产物进行纯化,用MTT法测定rhIL6的活性。结果:表达调控研究发现,当SD序列到ATG之间的距离为6bp和10bp时在SDS-PAGE胶上未见明显表达,而当距离为5bp、7bp、8bp、9bp时均可获高效表达,最高表达量占菌体总蛋白的26%。表达产物经变性复性及纯化后产品纯度达98%,比活性为11×108U/mg。
刘红岩
马雁冰
李智华
姬秋彦
李健峰
周丽
郭仁
戴长柏
关键词:
基因克隆
基因表达
纯化
人白细胞介素11的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达
1999年
从人胚肺二倍体细胞KMB17抽提总RNA,经RT-PCR扩增到人IL-11cDNA,克隆于pBS-SK,以双脱氧链终止法进行序列分析;扩增去除N 端第一个氨基酸的IL-11cDNA,克隆于硫氧还蛋白融合表达载体pThioHisA,经过对表达质粒的改造,使融合表达的IL-11能被肠激酶精确切割;表达产物经金属鏊合亲合层析后经肠激酶切,再通过阳离子交换层析纯化后,用其依赖细胞株7TD1检测活性.结果表明,克隆的IL-11cDNA 序列与文献报道一致;表达的融合蛋白占菌体总蛋白的30% 左右,以可溶性形式存在;纯化产物具有维持依赖细胞株生长的能力.由此,获得了较高纯度的具有生物学活性的rhIL-11,为中试生产奠定了基础.
杜秋江
马雁冰
刘红岩
陈尔佳
周丽
姬秋彦
李智华
徐维明
孙茂盛
戴长柏
关键词:
白细胞介素-11
基因克隆
大肠杆菌
重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子菌种稳定性研究
被引量:4
2003年
为了解含重组质粒的大肠杆菌菌种连续传代及发酵罐培养中质粒的遗传稳定性,将GM-CSF菌种在含氨苄青霉素的琼脂平皿上连续划线传代培养,以及在不含安苄青霉素的培养基中进行发酵罐培养和42℃诱导表达.结果显示pBV220GM-CSF工程菌在氨苄青霉素选择压力下连续传代10,25,50和100次后质粒稳定、不丢失,而在不含氨苄青霉素的培养基中进行发酵罐大规模培养42℃诱导表达时,质粒稳定性下降,质粒易丢失,其表达量随诱导时间而变化.
李颂
徐维明
杨喆
周丽
徐彤浩
关键词:
重组质粒
大肠杆菌
氨苄青霉素
用高效液相色谱法纯化制备rHuGM—CSF
1998年
采用高效液相色谱(HPLC)的离子交换和凝胶过滤柱法,以 Tris·HCI作流动相, 280 nm波长检测,纯化重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rHuGM-CSF)。方法简便快捷并可得到99%高纯度的样品.终产物比活性达 1.0 × 107μ/mg蛋白,测定 N端 20个氨基酸序列与国内外文献报道的氨基酸序列完全一致.
徐维明
徐彤皓
李健峰
李智华
周丽
姬秋彦
关键词:
高效液相色谱
纯化
重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子
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