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李智华: 作品数：52 被引量：60H指数：4; 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>; 发文基金：云南省自然科学基金协和青年科研基金云南省应用基础研究基金更多>>; 相关领域：生物学医药卫生化学工程农业科学更多>>

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治疗型VP22Δ-mE6Δ/mE7重组蛋白疫苗的表达与免疫学初步分析: 2009年; 制备16型人乳头瘤病毒mE6Δ/mE7蛋白与I型人单纯疱疹病毒VP22Δ蛋白的治疗型分子内佐剂融合蛋白疫苗,并检测其免疫原性和抗肿瘤相关生物活性。通过克隆HSV-1 VP22Δ及HPV-16 mE6Δ/mE7基因,构建pET28a-VP22Δ-mE6Δ/mE7原核表达载体。重组质粒在Rosetta(DE3)宿主菌中进行诱导表达,表达蛋白经分离、复性后,通过镍离子亲和层析进行纯化,纯化蛋白经SDS-PAGE、Western blot鉴定,并免疫BalB/C及C57BL/6小鼠,检测其免疫原性和抗肿瘤活性。结果显示,VP22Δ-mE6Δ/mE7蛋白以包涵体形式表达,分子量约为34kDa,表达量约占菌体总蛋白的45%。该蛋白免疫小鼠后血清特异性IgG、特异性淋巴细胞增殖效果及对TC-1致瘤小鼠的肿瘤治疗效果均高于无佐剂单一重组蛋白疫苗。以上结果说明,所获得的重组融合蛋白具有较好的免疫原性和抗肿瘤活性,为治疗型HPV分子内佐剂疫苗的进一步研究奠定了基础。; 高丹丹彭正华杨旭毕研伟李智华姬秋彦李建芳李健峰徐维明; 关键词：HPV-16 重组蛋白疫苗

不同信号肽对重组B群脑膜炎奈瑟菌H因子结合蛋白表达的影响被引量：2: 2017年; 目的探讨不同信号肽对重组B群脑膜炎奈瑟菌H因子结合蛋白(factor H-binding protein,f HBP)表达的影响。方法运用PCR方法将B群脑膜炎奈瑟菌f HBP原始信号肽分别替换为大肠埃希菌主要外膜脂蛋白(major outer membrane lipoprotein,MLP)、脂蛋白-28(lipoprotein-28,LP)和流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)P4外膜蛋白信号肽,并将其分别连接至p ET-30a表达载体,转化入大肠埃希菌感受态细胞,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定蛋白表达水平。结果替换了P4、LP和MLP信号肽的重组B群脑膜炎奈瑟菌f HBP表达量较带原始信号肽的B群脑膜炎奈瑟菌f HBP相比,分别提高了2.68、1.94和2.91倍。结论替换MLP信号肽对重组B群脑膜炎奈瑟菌f HBP蛋白表达的影响最大,为提高B群脑膜炎奈瑟菌f HBP表达量的研究工作提供了新思路。; 宫悦陈晨李亚东张辉李智华肖红剑毕研伟寸韡; 关键词：信号肽原核表达

一种特异性的DNA病毒基因组定点改造及筛选方法: 本发明提供了一种特异性的DNA病毒基因组定点改造及筛选方法，如下：一、构建定点切割单链、双链核酸酶系统及同源序列；二、导入定点切割单链核酸酶系统和同源序列的细胞感染DNA病毒，待细胞病变，收集P1子代病毒；三、导入定点切...; 寸韡李琦涵毕研伟李智华丁晨; 文献传递

一种B群脑膜炎球菌重组蛋白嵌合疫苗及其制备方法: 本发明公开了一种B群脑膜炎球菌重组蛋白嵌合疫苗及其制备方法。系采用搭桥PCR构建含有B群脑膜炎球菌V1变异型全长FHBP蛋白和V2变异型的位于C结构域的一段抗原表位的融合基因片段，克隆入pET30a(+)载体后，IPTG...; 李健峰彭世泽姬秋彦李智华毕研伟高丹丹徐维明; 文献传递

HPV16 L2肽段偶联AP205 VLP的原核表达及免疫原性分析被引量：1: 2012年; 目的:将编码HPV16衣壳蛋白L2的65～71、112～120免疫优势表位连接到RNA噬菌体衣壳蛋白AP205氮端,组装形成病毒样颗粒,通过在大肠杆菌中实现表达及纯化,对其免疫原性进行研究。方法:合成编码AP205衣壳蛋白基因和HPV16 L2的65～71、112～120位氨基酸表位的基因序列,PCR连接并克隆至pET30a(+)原核表达载体,构建重组表达质粒pET30-AP205-HPV16ΔL2,转化大肠杆菌BL21(DH3)感受态细胞,IPTG诱导表达。表达蛋白经凝胶层析纯化及SDS-PAGE、Western blot等理化性质检测,免疫接种ICR小鼠,通过间接ELISA法检测其免疫原性。结果:成功构建重组表达质粒,重组蛋白在大肠杆菌中以可溶性表达,透射电镜观察可见典型病毒样颗粒,该VLP在动物实验中表现出较好的免疫原性。结论:成功将HPV16 L2表位偶联AP205以形成VLP,在大肠杆菌中实现可溶性表达。; 姜博毕研伟张营营蔡路奎姬秋彦李智华徐维明; 关键词：人乳头瘤状病毒

一种丙肝病毒滴度测定方法被引量：1: 2015年; 目的:建立一种测定丙肝病毒(HCV)滴度的方法,为HCV的基础研究及临床药物评估提供有效的实验手段。方法:对HCV JFH1病毒株进行倍比稀释并感染Huh7细胞,甲醇固定后,采用抗HCV核心蛋白一抗进行孵育,加入二抗后采用DAB显色,通过计数病毒斑得到HCV的滴度。结果:采用甲基纤维素限制HCV于细胞间感染,利用免疫组化技术使被病毒感染的细胞形成肉眼可见的清晰斑块。结论:建立了一种简单、经济的HCV滴度测定方法。; 李亚东李智华毕研伟陈晨寸韡; 关键词：丙肝病毒滴度免疫组化

重组破伤风毒素重链片段C蛋白原核表达条件的优化: 2023年; 目的优化重组破伤风毒素重链片段C (recombinant tetanus toxin heavy chain fragment C,rTTHc)蛋白的原核表达条件。方法将密码子优化后的rTTHc基因片段分别插入原核表达载体pET30a、低温表达载体pColdⅡ和高温诱导表达载体pBV220中,构建重组表达质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3),以表达量及可溶性为检测指标,比较不同温度条件下rTTHC蛋白的表达情况。结果 42℃诱导4 h pBV220-rTTHc表达量较低,蛋白可溶性较差;37℃诱导4h pET30a-rTTHc表达量与15℃诱导8 h pCold-rTTHc表达量相当,但可溶性表达略低于pCold-rTTHc。28℃诱导4 h,pET30a-rTTHc可获得高表达量和高可溶性表达,且表达周期短。结论 pET30a-rTTHc在28℃经2mg/mL IPTG诱导可高效表达rTTHc蛋白。; 官月婵马鑫宇肖红剑王东宝王学付李娇春谭银珍李智华寸韡; 关键词：破伤风毒素原核表达温度

一种纯化细菌荚膜多糖的方法: 本发明公开了一种纯化细菌荚膜多糖的方法，所述纯化方法利用非离子表面活性剂，通过相分离法纯化细菌荚膜多糖。细菌荚膜多糖疫苗的制备过程中需要尽可能多地去除杂质蛋白和内毒素，以减少疫苗的副反应。目前使用的苯酚抽提法、柱层析法以...; 寸韡肖红剑毕研伟李育中李智华丁晨高丹丹闫玲梅; 文献传递

几种常见病毒的形态学特征及其鉴别诊断被引量：1: 1995年; 使用电子显微镜分别对ＲＮＡ及ＤＮＡ各３个病毒科的主要成员进行阳性染色及超薄切片制样，作形态学观察和研究．在总结各种病毒形态学特征的基础上，提出这些病毒的诊断要点．其中着重比较了脊髓灰质炎（ｐｏｌｉｏ）、柯赛奇（ｃｏｘｓａｃｋｌｅ）及甲型肝炎（甲肝）３种小ＲＮＡ病毒以及两种呼肠孤病毒之间的形态学差异获得了这些常见病毒鉴别诊断的重要指征．作者依据这些特征，对数千份病毒样品进行了分析诊断，均得到满意结果．本试验结果将有助于电子显微镜在诊断病毒学中的应用推广及其诊断准确性的提高．; 徐维明李颂杨喆徐彤皓李智华; 关键词：电镜

重组B群脑膜炎球菌fHBP融合蛋白的表达和免疫原性研究被引量：1: 2011年; 采用PCR构建编码B群脑膜炎球菌fHBP蛋白V1变异型全长序列和V2变异型C结构域抗原表位融合蛋白的基因片段。并克隆入pET30a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),在其实现表达,表达量约占菌体蛋白总量的30%。表达产物经离子交换层析纯化后,获得了纯度达到90%以上的融合蛋白。将融合蛋白免疫小鼠,对其免疫原性进行了初步分析。结果显示,经2次腹腔免疫,血清IgG滴度达到15 849,同时杀菌力实验显示此融合蛋白能诱导针对B群脑膜炎球菌的补体依赖的杀菌反应。表明此融合蛋白具有较好的免疫原性,为B群脑膜炎球菌蛋白疫苗的研究提供了一定的理论基础。; 彭世泽肖红剑彭正华毕妍伟孙振璐戴宗祥高丹丹徐维明李智华李健峰; 关键词：脑膜炎奈瑟氏菌原核表达融合蛋白

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