刘琰
- 作品数：4 被引量：10H指数：1
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金黑龙江省科技攻关计划博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 牛化脓隐秘杆菌的分离及其主要毒力基因的PCR鉴定被引量：9
- 2013年
- 从2009-2012年多个奶牛场送检的5份以奶牛化脓性炎症为特征的病料中分离出5株细菌,根据其革兰氏染色的形态特征、培养特性、生化特性以及16SrRNA基因序列的BLAST分析,确定分离菌为化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes),并对分离菌的主要毒力因子基因进行了PCR鉴定和动物试验。结果显示,5株分离菌的16SrRNA基因序列与GenBank中收录的11株牛源化脓隐秘杆菌16SrRNA基因序列的同源性为99%以上。HLJ-1005株分离菌基因组中缺失胶原结合蛋白(CbpA)基因,但包含溶血素(PLO)基因、神经氨酸酶H(NanH)基因和神经氨酸酶P(NanP)基因,且HLJ-1005株分离菌的致病力明显弱于其他4株分离菌。证实,化脓隐秘杆菌的致病力与cbpA基因和nanP基因的存在相关。
- 徐凝刘琰张明富张文龙王君伟
- 关键词：化脓隐秘杆菌RRNA基因毒力基因
- 鸭肠炎病毒gD基因胞外区的原核表达及在感染鸭胚成纤维细胞中的定位
- 2012年
- 以本实验室获得的鸭肠炎病毒(DEV)C-KCE株US区基因序列(GenBank登录号EU714267)为基础PCR扩增出gD基因胞外区(gDw),将其定向克隆至原核表达载体pET-30a(+)并转化至大肠杆菌RosettaTM(DE3)pLys。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表明gD基因胞外区在大肠杆菌中获得与预期大小相符的表达蛋白。重组蛋白纯化后免疫家兔制备多克隆抗体,血清琼扩效价达1∶16,噬斑减数中和试验测定血清中和抗体效价达1∶64。通过免疫荧光技术首次对gD进行亚细胞定位检测,结果表明DEV感染鸭胚成纤维细胞(DEF)后4h近核区域细胞质内首先开始出现荧光,12h以后显著增加,明显的点状绿色荧光广泛存在于胞质中。本研究为进一步开展DEV gD的功能研究提供了重要数据和材料。
- 刘琰徐凝付培芬母晓宇董井泉马波王君伟
- 关键词：鸭肠炎病毒原核表达
- 鸭肠炎病毒gD蛋白亚细胞定位及其对病毒感染相关作用的研究
- 鸭病毒性肠炎/(duck viral enteritis, DVE/),又名鸭瘟/(duck plague, DP/),是鸭、鹅等多种雁形目禽类的一种急性、热性、败血性传染病。本病病原为鸭肠炎病毒/(Duck enter...
- 刘琰
- 关键词：鸭肠炎病毒糖蛋白D亚细胞定位
- 文献传递
- 1型鸭肝炎病毒E53株VP1基因在昆虫细胞中的表达及产物分析
- 2012年
- 根据1型鸭肝炎病毒E53株基因组序列设计并合成一对特异性引物,RT-PCR扩增VP1基因,将其定向克隆至pFastBacTMHTB载体,转化至DH10BacTM感受态细胞中,蓝白斑筛选获得重组穿梭质粒rBacmid-VP1,重组质粒在脂质体的介导下转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒。结果表明VP1蛋白在昆虫细胞中获得表达,表达产物能够与兔抗1型鸭肝炎病毒VP1蛋白多抗血清和鸭肝炎病毒阳性血清发生特异性反应。在昆虫细胞中表达VP1蛋白为VP1功能的研究及鸭肝炎病毒抗体的检测提供了物质材料。
- 付培芬刘华刘琰母晓宇董井泉刘晓玫马波王君伟
- 关键词：VP1基因昆虫细胞
