徐凝
- 作品数：8 被引量：31H指数：4
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目黑龙江省教育厅科学技术研究项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 牛化脓隐秘杆菌的分离及其主要毒力基因的PCR鉴定被引量：9
- 2013年
- 从2009-2012年多个奶牛场送检的5份以奶牛化脓性炎症为特征的病料中分离出5株细菌,根据其革兰氏染色的形态特征、培养特性、生化特性以及16SrRNA基因序列的BLAST分析,确定分离菌为化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes),并对分离菌的主要毒力因子基因进行了PCR鉴定和动物试验。结果显示,5株分离菌的16SrRNA基因序列与GenBank中收录的11株牛源化脓隐秘杆菌16SrRNA基因序列的同源性为99%以上。HLJ-1005株分离菌基因组中缺失胶原结合蛋白(CbpA)基因,但包含溶血素(PLO)基因、神经氨酸酶H(NanH)基因和神经氨酸酶P(NanP)基因,且HLJ-1005株分离菌的致病力明显弱于其他4株分离菌。证实,化脓隐秘杆菌的致病力与cbpA基因和nanP基因的存在相关。
- 徐凝刘琰张明富张文龙王君伟
- 关键词：化脓隐秘杆菌RRNA基因毒力基因
- 牛源化脓隐秘杆菌cbpA基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2013年
- 为研究化脓隐秘杆菌(A.pyogenes)CbpA蛋白的反应原性,本研究以A.pyogenes Hlj1005株为模板采用PCR方法扩增cbpA基因,并构建重组表达质粒pET-cbpA,将其转化至大肠杆菌感受态细胞Rosetta(DE53)plysS中,经IPTG诱导,用SDS-PAGE及western blot检测目的蛋白的表达情况及其反应原性。SDS-PAGE分析表明获得了约120 ku的蛋白。Western blot检测表明,CbpA蛋白可以与A.pyogenes阳性血清发生特异性反应,表明其有良好的反应原性。
- 张明富郭永丽刘晓民徐凝张文龙王君伟
- 关键词：化脓隐秘杆菌反应原性
- 鸭肠炎病毒gD基因胞外区的原核表达及在感染鸭胚成纤维细胞中的定位
- 2012年
- 以本实验室获得的鸭肠炎病毒(DEV)C-KCE株US区基因序列(GenBank登录号EU714267)为基础PCR扩增出gD基因胞外区(gDw),将其定向克隆至原核表达载体pET-30a(+)并转化至大肠杆菌RosettaTM(DE3)pLys。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表明gD基因胞外区在大肠杆菌中获得与预期大小相符的表达蛋白。重组蛋白纯化后免疫家兔制备多克隆抗体,血清琼扩效价达1∶16,噬斑减数中和试验测定血清中和抗体效价达1∶64。通过免疫荧光技术首次对gD进行亚细胞定位检测,结果表明DEV感染鸭胚成纤维细胞(DEF)后4h近核区域细胞质内首先开始出现荧光,12h以后显著增加,明显的点状绿色荧光广泛存在于胞质中。本研究为进一步开展DEV gD的功能研究提供了重要数据和材料。
- 刘琰徐凝付培芬母晓宇董井泉马波王君伟
- 关键词：鸭肠炎病毒原核表达
- 多重PCR方法快速检测3种消化道病原菌被引量：5
- 2013年
- 为建立一种检测和鉴别诊断动物奇异变形杆菌、沙门氏菌和产气荚膜梭菌感染的方法,本研究针对奇异变形杆菌脲酶调节子基因(ureR)、沙门氏菌侵袭蛋白A基因(invA)及产气荚膜梭菌α毒素基因(α-toxin)序列设计引物,建立一种同时检测3种细菌的多重PCR方法,并对扩增体系和条件进行了优化,建立的多重PCR检测方法特异性良好,对3种目的菌最低检出限均在105cfu/mL以上。初步应用该方法检测3种细菌单独人工感染小鼠的病变组织和人工模拟细菌混合感染的临床样品,结果证明该方法可以用于临床样本检测。
- 刘晓丹孟祥莉徐凝张文龙王君伟
- 关键词：奇异变形杆菌沙门氏菌产气荚膜梭菌多重PCR
- 牛源化脓隐秘杆菌的分离鉴定及其PCR检测方法的建立被引量：9
- 2012年
- 为分离鉴定牛源化脓隐秘杆菌(Arcanobacterium pyogenes)并建立其PCR检测方法,本研究从某规模化奶牛场患牛肺组织中分离出两株细菌,根据其形态特征、培养特性及生化特性,结合16S rRNA分析确定分离菌为A.pyogenes。对小鼠致病性试验显示纯培养物对小鼠致死率较高,药敏试验表明分离菌仅对少数种类抗生素如头孢唑啉、氧氟沙星、阿奇霉素等敏感。本研究同时建立了快速检测A.pyogenes溶血素(PLO)基因的PCR方法,敏感性试验显示最低检出菌数为9.2×103cfu/mL,特异性试验表明与其他细菌如布鲁氏菌、大肠杆菌等无交叉反应,通过对已知临床样本检测评估显示该方法适用于临床感染样品的检测。
- 张明富刘晓民孟祥莉徐凝张文龙王君伟
- 关键词：化脓隐秘杆菌PCR
- 多重PeR方法快速检测3种消化道病原菌
- 2014年
- 为建立一种检测和鉴别诊断动物奇异变形杆菌、沙门氏菌和产气荚膜梭菌感染的方法，本研究针对奇异变形杆菌脲酶调节子基因（ureR）、
- 刘晓丹孟祥莉徐凝
- 关键词：病原菌消化道PER奇异变形杆菌产气荚膜梭菌
- 牛化脓隐秘杆菌分离鉴定及毒力因子检测
- 化脓隐秘杆菌是经济型家畜、禽以及野生哺乳动物、鸟类黏膜上的一种共生菌，也是造成这些动物感染的一种条件性致病菌，大部分分布在健康动物的乳房、泌尿生殖道、呼吸道和胃肠道黏膜。能导致多种动物多种器官的化脓性感染，造成子宫炎、肾...
- 徐凝
- 关键词：化脓隐秘杆菌毒力基因
- 文献传递
- 化脓隐秘杆菌溶血素蛋白的原核表达及其溶血活性鉴定被引量：1
- 2013年
- 为研究化脓隐秘杆菌致病机制及其病原学诊断方法,本研究克隆了编码化脓隐秘杆菌溶血素蛋白的plo基因,并构建重组表达质粒pET-plo,转化大肠杆菌Rosetta(D E3)感受态细胞中诱导表达。SDS-PAGE检测结果显示,表达的重组蛋白约为62 ku,western blot分析表明表达的重组蛋白可以与鼠抗化脓隐秘杆菌血清发生反应。采用重组蛋白免疫新西兰白兔制备的多克隆抗体效价达到1∶128 000,western blot和琼脂双扩散试验表明制备的多克隆抗体能够与天然PLO蛋白发生反应。溶血试验表明重组蛋白能够溶解红细胞,制备的多克隆抗体能有效中和重组蛋白的溶血活性。
- 孟祥莉母晓宇刘晓丹徐凝王璞高明春张文龙王君伟
- 关键词：溶血素原核表达多克隆抗体
