傅烈振
- 作品数：8 被引量：44H指数：5
- 供职机构：武汉大学生命科学学院病毒学研究所更多>>
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- 猪瘟病毒RT-PCR产物的T载体克隆、测序及同源比较
- 1998年
- 利用ＴａｑＤＮＡ聚合酶的无模板延伸活性制备了可直接克隆ＰＣＲ产物的Ｔ载体，并成功地对猪瘟病毒ＨＣＬＶ株的ＲＴ－ＰＣＲ产物进行了克隆．ＤＮＡ序列测定和同源性分析表明该ＲＴ－ＰＣＲ产物是猪瘟病毒特异的，与已知序列的猪瘟病毒毒株的序列同源性均高达９６．７％～９８．７％．ＨＣＬＶ株与Ｃ株具有相同的起源，但序列比较发现它们既有共同的点突变，也有序列上的差异，表明这两株病毒在各自独立的传代过程中已发生了各不相同的遗传性变异，值得进一步比较研究．
- 傅烈振张楚瑜王宁朱燕于建石
- 关键词：猪瘟病毒同源性比较
- 猪瘟病毒E2基因pGEME2重组质粒仍具有α互补作用
- 1999年
- 在利用pGEM-T载体克隆猪瘟病毒石门株E2 基因中发现,E2 基因以与lacZ相同方向插入时,重组质粒仍具有α互补作用,呈典型的蓝色菌落,而以与lacZ基因相反方向插入时,重组质粒无α互补作用,呈白色菌落. 经E2 蛋白检测、序列分析、重组质粒缺失和插入等研究,结果表明pGEME2 的α互补作用产生机制不同于目前人们已知的机制. 它由外源E2 基因内部起始合成新的α肽,从而赋于其α互补作用. 此结果表明利用α互补作用并不能筛选到全部克隆.
- 王宁傅烈振张楚瑜朱燕
- 关键词：猪瘟病毒石门株重组质粒
- 猪瘟病毒HCLV株E_2核苷酸序列与结构分析被引量：4
- 1999年
- 用 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ技术从 Ｃ Ｓ Ｆ Ｖ Ｈ Ｃ Ｌ Ｖ 株 Ｆ４８２ 代感染兔脾的细胞总 Ｒ Ｎ Ａ 中分段扩增出了 Ｃ Ｓ Ｆ Ｖ Ｅ２ 基因特异的３ 个部分重叠的 Ｄ Ｎ Ａ 片段（大小分别为 ４９９ ｂｐ、５７２ ｂｐ 和 ２４５ ｂｐ），并将之分别克隆到ｐ Ｇ Ｅ Ｍ Ｔ 载体上 经核苷酸序列测定和片段重叠完成了包含 Ｅ２ 全长基因的 １ １４４ ｂｐ 序列的测定，其 Ｇ Ｃ含量为４９．０％ ：核苷酸序列与国外报道的各株病毒的 Ｅ２ 基因同源性分别为８３．５％ ～９７．５％ ；其推导的氨基酸序列的同源性也分别为８９．３％～９６．２％ ，变异主要分布在 Ｅ２ 蛋白的 Ｎ
- 傅烈振朱燕王家富张芄玮王宁张楚瑜
- 关键词：猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2核苷酸序列
- 中国猪瘟兔化弱毒兔脾毒NS2-3基因的序列分析被引量：14
- 2000年
- 根据已发表的猪瘟病毒序列 ,设计并合成了覆盖有 NS2 - 3全基因的 4对引物 ,应用RT -PCR技术从接种了猪瘟兔化弱毒 (hogcholeraviruslapinizedChinesestrain ,HCLV)的兔脾组织中 ,成功地扩增了 NS 2 - 3基因 ,将其克隆到T载体后 ,测定了其核苷酸序列。结果显示 ,所克隆的NS 2 - 3基因长 2 96 4个核苷酸 ,编码 988个氨基酸。用DNASIS和PROSIS软件分析表明 ,该基因具有丝氨酸类蛋白酶活性及含有解旋酶超家族特征性保守序列。核苷酸序列同源性分析表明 ,HCLV与国外报导的 8株HCV毒株“C”、Riems、ALD、GPE、Glentorf、CAP、Brescia和Alfort株NS 2 - 3基因核苷酸序列同源性分别为 99%、99%、96 %、96 %、95 %、95 %、94%和 86 % ,推导的氨基酸序列同源性分别为 99%、99%、98%、98%、98%、97%、97%和 95 % ,氨基酸序列的高度同源性表明了NS 2 - 3是猪瘟病毒中高度保守的蛋白质之一 ,这与该基因产物参与病毒复制及多聚蛋白前体加工过程中的重要作用相对应。
- 王家富张楚瑜傅烈振黄茜华张芄伟
- 关键词：疫苗
- 猪瘟病毒石门株NS2-3基因片段的序列测定及比较被引量：9
- 1999年
- 根据猪瘟病毒Ｃ株的序列，以计算机辅助设计，化学合成１对引物（ＰＦ５６４８／ＰＲ６６０４），应用ＲＴＰＣＲ技术从感染猪血中成功地扩增了我国猪瘟病毒强毒石门株ＮＳ２３基因片段，大小为９５７ｂｐ，位于ＮＳ３基因的中部ＮＴＰａｓｅ和Ｈｅｌｉｃａｓｅ活性区。克隆后测序，结果表明该段基因产物具有解旋酶超家族全部七个特征性保守序列，包括共同的ＮＴＰ结合基序Ａ位点（ＧＸＧＫＴ／Ｓ）和Ｂ位点（３ｈｙ，２ｘ）Ｄ。序列同源性比较表明，石门株与日本的ＡＬＤ和ＧＰＥ－株同源性最高，与其它３株猪瘟病毒（Ｃ株、Ｂｒｅｓｃｉａ株和Ａｌｆｏｒｔ株）的同源性也很高，并与２株牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）（ＮＡＤＬ株和ＳＤ１株）也有较高的同源性，尤其是由核苷酸序列推导的氨基酸序列，同源性均大于９０％，是瘟病毒属基因组中最保守的区段。
- 黄茜华张楚瑜王宁傅烈振王家富
- 关键词：猪瘟病毒
- 猪瘟病毒石门株与兔化弱毒株E0糖蛋白基因的克隆及序列分析被引量：12
- 2000年
- 参考已发表的猪瘟病毒序列，设计并合成了一对引物，应用ＲＴＰＣＲ 技术，扩增了猪瘟兔化弱毒（Ｈｏｇ ｃｈｏｌｅｒａ ｖｉｒｕｓ ｌａｐｉｎｉｚｅｄ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｓｔｒａｉｎ ， ＨＣＬＶ） 和石门强毒株的Ｅ０ 糖蛋白基因，并将其克隆到ｐＧＥＭＴ 载体中，测定了其核苷酸序列，并推导了其氨基酸序列。结果表明我国这两株强弱不同毒株Ｅ０ 糖蛋白核苷酸序列同源性和推导的氨基酸序列同源性分别为９５－０ ％ 和９４－３ ％ ，有１３ 个氨基酸的差异，ＨＣＬＶ 比石门株多了一个潜在的Ｎ糖基化位点。将我国这两株病毒与国外已报导的ＨＣＶ 毒株Ｅ０ 基因序列进行了比较，发现石门株与日本的两株毒株ＡＬＤ 和ＧＰＥ－ 同源性较高，核苷酸序列同源性分别为９７－４ ％ 和９６－５ ％ ，氨基酸同源性分别为９７－４ ％ 和９６－０ ％ ，而与欧洲Ｂｒｅｓｃｉａ 株和Ａｌｆｏｒｔ 株同源性较低，核苷酸同源性分别为９２－２ ％ 和８６－５ ％ ，氨基酸同源性为９５－２ ％ 和９２－５ ％ ， ＨＣＬＶ 与ＡＬＤ、ＧＰＥ－ 、Ｂｒｅｓｃｉａ、Ａｌｆｏｒｔ 株核苷酸同源性分别为９５－６ ％ 、９４－９ ％ 、９１－３ ％ 、８５－５ ％ ，推导的氨基酸同源性分别为９３－４ ％ 、９２－５ ％
- 王家富张楚瑜王宁傅烈振黄茜华
- 关键词：猪瘟病毒兔化弱毒疫苗
- 应用反转录 - 聚合酶链技术快速检测猪瘟病毒RNA的研究被引量：11
- 1998年
- 依据猪瘟病毒（ＣＳＦＶ）５′端非编码区保守序列设计一对ＰＣＲ引物，建立了检测ＣＳＦＶ的反转录聚合酶链（ＲＴＰＣＲ）技术。应用该技术从猪瘟兔化弱毒感染兔的脾、淋巴结、肾与肌肉等以及石门株强毒感染猪的脾与肌肉和湖北分离毒株感染猪组织匀浆液中均特异扩增出了１条预期大小为１９４ｂｐ的片段，从实验感染兔和猪的血液中也特异扩增出了该片段，但对牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）和健康兔脾总ＲＮＡ以及健康猪的血液ＲＮＡ扩增均为阴性。采用这种方法，对实验感染兔脾总ＲＮＡ的检测灵敏度可达１０－８ｇ，表明其灵敏度足以达到临床检验的要求。
- 傅烈振朱燕王宁潘滋书张楚瑜
- 关键词：猪瘟病毒RNA
