倪勇
- 作品数：7 被引量：43H指数：4
- 供职机构：西南大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 昆明小鼠成熟卵母细胞体外受精及受精卵体外培养的研究被引量：16
- 2005年
- 目的通过比较获能受精液成分及成熟卵母细胞的处理方法,观察对昆明小鼠体外受精(IVF)效果的影响和用于早期胚胎培养的三种发育培养液培养效果,探讨并建立起适合于昆明小鼠卵子体外受精与受精卵体外发育的实验体系。方法用T6或FM两种获能受精液对采自昆明雄鼠附睾尾的精子与成熟卵母细胞进行体外受精(IVF),受精前对成熟卵母细胞选用透明质酸酶去除卵丘细胞和不去卵丘细胞(对照组)两种方法进行处理,受精卵分别用M16、改良的CZB液(mCZB)和改良的M16液(mM16)三种发育培养液对体外受精胚进行培养。结果选用FM获能受精液的受精率极显著高于T6液(92.3%对64.7%),且体外受精前先用透明质酸酶处理的成熟卵母细胞比对照组成熟卵母细胞受精率要低(59.2%对64.7%),但差异不显著;用mM16培养液进行培养时桑胚率及囊胚率(55.3%和35.6%)显著高于mCZB(13.3%和8.1%)和M16培养液(17.3%和14.7%),后两者差异不显著。结论昆明小鼠卵子体外受精时宜选用FM受精获能液,不宜用透明质酸酶去除卵丘细胞,且宜选用mM16培养液对昆明小鼠体外受精卵进行早期培养,其中的亚硫磺酸钠可有效的克服2-细胞胚后的体外发育阻滞现象。
- 孙新明魏泓赵永聚王勇李福兵王爱平倪勇
- 关键词：体外受精胚胎培养昆明小鼠
- 通过双原核显微注射提高转基因小鼠研制效率的实验研究被引量：10
- 2005年
- 目的建立高效的转基因小鼠制备技术,为开展遗传工程动物模型研究奠定技术基础。方法通过向小鼠受精卵原核中注入不同浓度的DNA分子,筛选最适注射用DNA浓度;将K14/hCTLA4-Ig基因表达载体分子通过显微注射分别导入小鼠受精卵雌、雄原核,并设立单原核注射对照组;利用输卵管腹壶部穿刺移植法将注射后的小鼠受精卵移植于同期发情的受体母鼠;利用PCR对出生的转基因首建小鼠进行筛选。结果最适DNA分子浓度为10ng/μl;在单、双原核注射组胚胎2细胞卵裂率分别为52.3%(132/253)和45.0%(108/240),差异有显著性(P<0.05);注射胚胎移植后体内存活率分别为18.1%(24/132)和16.7%(18/108),差异无显著性;转基因首建小鼠阳性率分别为3/24和5/18,转基因阳性小鼠占总注射胚胎的比例为1.2%(3/253)和2.08%(5/240),差异有极显著性(P<0.01)。结论尽管双原核注射对胚胎的2细胞卵裂率有一定影响,但通过双原核注射可有效提高转基因小鼠的制备效率。
- 王勇刘勤倪勇魏泓孙新民赵永聚
- 关键词：转基因技术小鼠动物模型胚胎发育
- 体外获能过程中精子凋亡及其对体外受精影响的研究被引量：4
- 2003年
- 目的 探讨精子体外获能进程与细胞凋亡之间的联系 ,以及获能过程中精子凋亡对体外受精的影响。方法 猪精子经钙离子载体A2 3187(IA)诱导处理后 ,在TALP以及添加 10 %胎牛血清 (TALP +FCS组 )、2 5 μmol/L核酶抑制剂 (ATA)、TALP +ATA组 3种培养液中孵育 ,以考马斯亮蓝和TUNEL检测顶体反应 (AR)率和凋亡率 ;同时行体外受精 ,检查卵母细胞穿透率和卵裂率。结果 鲜精液的精子凋亡率为 5 .7% ,经洗涤、上游处理后凋亡率下降为 3% ;获能培养过程中 ,尽管IA浓度影响精子寿命 ,胎牛血清推迟获能进程 ,但凋亡仅与AR直接相关 ,获能完成后 4小时左右出现明显的凋亡增长峰 ,ATA可阻止获能后的凋亡效应 ;3种获能处理的精子体外受精后 ,TALP和TALP +FCS组有超过 30 %以上的受精卵不发生卵裂 ,而TALP +ATA组仅为 2 0 % ,与阴性对照组相当。结论 精子在顶体反应发生的同时可能启动和 (或 )激活凋亡机制 ,4小时后出现凋亡效应 ;精子DNA的异常断裂影响受精卵的发育能力。
- 叶华虎李福兵倪勇魏泓
- 关键词：顶体反应细胞凋亡精子
- 转hCTLA4-IgG基因小鼠移植皮肤在糖尿病大鼠创面存活的延长
- 2006年
- CTLA4-IgG是呈分泌性表达的CTLA4胞外区与人IgG恒定区的融合分子,可有效阻断T细胞B7CD28共刺激信号通路,从而抑制T细胞活化、延长移植物存活.糖尿病溃疡创面难愈合是其高致病力和高致残率的主要原因,而及时有效的封闭创面是创面愈合的关键.异种(异体)皮肤是应用广泛的创面覆盖物,但免疫排斥反应是移植皮肤存活的主要障碍.通过建立糖尿病大鼠溃疡创面模型,研究表达人CTLA4IgG蛋白的转基因小鼠皮肤在糖尿病大鼠溃疡创面的存活及对创面愈合的影响.结果发现:糖尿病大鼠溃疡创面的自然愈合时间显著长于正常大鼠(41.7±7.4dvs18.5±6.9d,P<0.01),说明糖尿病大鼠及其溃疡模型已建立;在糖尿病大鼠创面,转基因皮肤存活时间为22.2±5.8d,显著长于野生型皮肤(8.2±1.8d,P<0.01);在转基因皮肤移植后27d,糖尿病大鼠创面已完全愈合,显著快于其自然愈合过程;在供、受体混合淋巴细胞反应(MLR)中,转基因皮肤移植受体的淋巴细胞对供体抗原的应答能力与野生型皮肤移植受体无显著差异.上述结果表明,移植皮肤表达人CTLA4IgG蛋白可显著延长其在糖尿病大鼠创面的存活时间,进而促进创面愈合,并对受体免疫系统无显著的全身性影响.
- 王勇葛良鹏倪勇刘勤魏泓
- 关键词：皮肤移植糖尿病大鼠
- 实验动物遗传工程——功能基因组时代的研究平台
- 2007年
- 本文就实验动物遗传工程在研究基因功能及其表达调控、阐明疾病发生机理、寻找药物治疗靶点等方面的技术突破做了综述.
- 倪勇王勇
- 关键词：实验动物转基因动物RNAI
- 皮肤组织特异性表达hCTLA4-Ig转基因小鼠品系的建立被引量：4
- 2005年
- 为研究皮肤特异性高效表达hCTLA4-Ig分子对移植皮肤存活及受体免疫功能的影响,充分实现hCTLA4-Ig分子在皮肤移植中的免疫调控功能,利用K14(角蛋白14)基因启动子,构建了hCTLA4-Ig分子皮肤组织特异性表达载体,并通过受精卵原核显微注射技术制备了K14/hCTLA4-Ig转基因小鼠并建立了品系。通过RT-PCR和Northernblot分析表明,hCTLA4-Ig在转基因小鼠体内呈皮肤组织特异性高效表达;以GAPDH基因的表达量为内部参照分析表明,hCTLA4-Ig的表达水平在不同世代之间以及转基因个体的不同生命时相点之间保持相对恒定,说明皮肤组织特异性稳定表达hCTLA4-Ig的转基因小鼠品系已被建立。
- 王勇王峰超魏泓倪勇吴军高翔
- 关键词：转基因小鼠角蛋白14
- 考马斯亮蓝染色评价哺乳动物精子顶体反应发生的效果被引量：12
- 2003年
- 叶华虎苟本富刘卢生倪勇伍明山魏泓
- 关键词：顶体反应精子哺乳动物
