王勇
- 作品数：10 被引量：41H指数：4
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- 发文基金：国家科技重大专项国家科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生文化科学更多>>
- 转hCTLA4-IgG基因小鼠移植皮肤在糖尿病大鼠创面存活的延长
- 2006年
- CTLA4-IgG是呈分泌性表达的CTLA4胞外区与人IgG恒定区的融合分子,可有效阻断T细胞B7CD28共刺激信号通路,从而抑制T细胞活化、延长移植物存活.糖尿病溃疡创面难愈合是其高致病力和高致残率的主要原因,而及时有效的封闭创面是创面愈合的关键.异种(异体)皮肤是应用广泛的创面覆盖物,但免疫排斥反应是移植皮肤存活的主要障碍.通过建立糖尿病大鼠溃疡创面模型,研究表达人CTLA4IgG蛋白的转基因小鼠皮肤在糖尿病大鼠溃疡创面的存活及对创面愈合的影响.结果发现:糖尿病大鼠溃疡创面的自然愈合时间显著长于正常大鼠(41.7±7.4dvs18.5±6.9d,P<0.01),说明糖尿病大鼠及其溃疡模型已建立;在糖尿病大鼠创面,转基因皮肤存活时间为22.2±5.8d,显著长于野生型皮肤(8.2±1.8d,P<0.01);在转基因皮肤移植后27d,糖尿病大鼠创面已完全愈合,显著快于其自然愈合过程;在供、受体混合淋巴细胞反应(MLR)中,转基因皮肤移植受体的淋巴细胞对供体抗原的应答能力与野生型皮肤移植受体无显著差异.上述结果表明,移植皮肤表达人CTLA4IgG蛋白可显著延长其在糖尿病大鼠创面的存活时间,进而促进创面愈合,并对受体免疫系统无显著的全身性影响.
- 王勇葛良鹏倪勇刘勤魏泓
- 关键词：皮肤移植糖尿病大鼠
- 医学实验动物学创新性课堂教学与第二课堂的探索
- 2012年
- 随着生命科学和医学的发展,仅仅依靠课堂教学培养学生综合素质,效果是有限的,难以满足医学生实验技能和综合素质培养的需要。开展医学院校学生实验动物学创新性教学和第二课堂教学是医学高校创新教育的重要内容,也是培养医学生医学思维模式,提高学生综合素质和创新能力的重要途径。通过初步的探索教学,我们对开设创新性课堂与第二课堂的教师人才培养、教学方法和教学内容改革上有了自己的认识。
- 刘宇商海涛王勇魏泓
- 关键词：医学实验动物学创新性教学第二课堂教学
- 皮肤组织特异性表达hCTLA4-Ig转基因小鼠品系的建立被引量：4
- 2005年
- 为研究皮肤特异性高效表达hCTLA4-Ig分子对移植皮肤存活及受体免疫功能的影响,充分实现hCTLA4-Ig分子在皮肤移植中的免疫调控功能,利用K14(角蛋白14)基因启动子,构建了hCTLA4-Ig分子皮肤组织特异性表达载体,并通过受精卵原核显微注射技术制备了K14/hCTLA4-Ig转基因小鼠并建立了品系。通过RT-PCR和Northernblot分析表明,hCTLA4-Ig在转基因小鼠体内呈皮肤组织特异性高效表达;以GAPDH基因的表达量为内部参照分析表明,hCTLA4-Ig的表达水平在不同世代之间以及转基因个体的不同生命时相点之间保持相对恒定,说明皮肤组织特异性稳定表达hCTLA4-Ig的转基因小鼠品系已被建立。
- 王勇王峰超魏泓倪勇吴军高翔
- 关键词：转基因小鼠角蛋白14
- 研究生医学实验动物学课程的教学改革实践被引量：2
- 2008年
- 根据研究生教学特点，对其医学实验动物学课程教学进行改苹实践。根据实验动物学的最新进展、研究生的知识需求及我们的科研方向共分实验动物遗传工程、实验动物胚胎工程、异种移植、实验动物与比较基因组学、实验用小型猪、无菌动物与微生态学、实验动物与生物安全性、动物实验基本技术与方法8个专题向学生授课，力争紧跟学科发展动态，强调知识的前沿性、综合性和交叉性，促进研究生的科研能力和创新能力的培养，创建研究生医学实验动物学教学的新模式。
- 商海涛王勇牛荣袁静唐欢魏泓
- 关键词：医学研究生实验动物学教学实践
- 昆明小鼠成熟卵母细胞体外受精及受精卵体外培养的研究被引量：16
- 2005年
- 目的通过比较获能受精液成分及成熟卵母细胞的处理方法,观察对昆明小鼠体外受精(IVF)效果的影响和用于早期胚胎培养的三种发育培养液培养效果,探讨并建立起适合于昆明小鼠卵子体外受精与受精卵体外发育的实验体系。方法用T6或FM两种获能受精液对采自昆明雄鼠附睾尾的精子与成熟卵母细胞进行体外受精(IVF),受精前对成熟卵母细胞选用透明质酸酶去除卵丘细胞和不去卵丘细胞(对照组)两种方法进行处理,受精卵分别用M16、改良的CZB液(mCZB)和改良的M16液(mM16)三种发育培养液对体外受精胚进行培养。结果选用FM获能受精液的受精率极显著高于T6液(92.3%对64.7%),且体外受精前先用透明质酸酶处理的成熟卵母细胞比对照组成熟卵母细胞受精率要低(59.2%对64.7%),但差异不显著;用mM16培养液进行培养时桑胚率及囊胚率(55.3%和35.6%)显著高于mCZB(13.3%和8.1%)和M16培养液(17.3%和14.7%),后两者差异不显著。结论昆明小鼠卵子体外受精时宜选用FM受精获能液,不宜用透明质酸酶去除卵丘细胞,且宜选用mM16培养液对昆明小鼠体外受精卵进行早期培养,其中的亚硫磺酸钠可有效的克服2-细胞胚后的体外发育阻滞现象。
- 孙新明魏泓赵永聚王勇李福兵王爱平倪勇
- 关键词：体外受精胚胎培养昆明小鼠
- 冷冻对山羊精子转染外源DNA和体外制备转基因胚胎的影响被引量：3
- 2008年
- 本实验将鲜精和冻精分别与地高锌标记的线形化的pEGFP-N1质粒孵育转染,用原位杂交方法检测转染效率;PCR和Southern Blotting检测精子与外源DNA的整合效率;与成熟卵母细胞体外受精,PCR检测阳性胚胎比率,用透射电镜技术、碘化丙锭和羟化荧光素双探针技术和单细胞电泳(Single Cell Gel Electrophoresis,SCGE)技术,观察精子冷冻前后的超微结构、精子质膜完整性和精子核DNA损伤的变化,研究冷冻对山羊(Caprahircus)精子转染内化外源DNA和体外制备转基因胚胎的影响及机理。结果表明,冻精显著提高了转染外源DNA的效率(81.60%±16.59%vs32.95%±2.93%,t=4.873,P=0.003;41.80%±6.26%vs27.89%±8.64%,t=2.634,P=0.039)。PCR和Southern Blotting检测表明外源DNA已经整合到精子基因组上。用冻精与成熟卵母细胞体外受精,体外受精穿透率和卵裂率显著低于鲜精组(24.19%±3.15%vs58.86%±3.73%,t=7.131,P<0.001;11.83%±2.37%vs29.71±3.47%,t=4.302,P<0.001),但体外生产的胚胎PCR阳性率比鲜精组显著提高(45.45%±10.87%vs24.44%±6.06%,t=1.750,P=0.013)。超微结构观察和双荧光探针检测都发现冷冻-解冻精子质膜完整性降低(8.34%±4.21%vs65.67%±6.46%,t=12.492,P<0.001),SCGE显示冷冻极显著增加了精子彗尾长度和彗星细胞比例(42.67μm±4.56μmvs21.14μm±2.36μm,t=5.644,P=0.005;60.00%±4.00%vs17.37%±2.57%;t=15.787,P<0.001)。冷冻-解冻可以提高山羊精子转染外源DNA的效率,冷冻破坏精子质膜完整性,解除质膜的阻碍作用,是提高外源DNA转染效率的一个主要原因。
- 赵永聚王勇王剑李福兵魏泓
- 关键词：山羊精子外源DNA冷冻体外胚胎生产质膜
- 医学院校实验动物学课程教学内容改革被引量：2
- 2009年
- 从改革的紧迫性、必然性入手,对实验动物学教学内容的改革做了初步的探索,为医学院校的实验动物学的教学积累一定经验,以期改变国内实验动物学教学的长期落后状态。
- 牛荣刘昌峨商海涛刘宇王勇魏泓
- 关键词：实验动物学教学内容教学改革
- 通过双原核显微注射提高转基因小鼠研制效率的实验研究被引量：10
- 2005年
- 目的建立高效的转基因小鼠制备技术,为开展遗传工程动物模型研究奠定技术基础。方法通过向小鼠受精卵原核中注入不同浓度的DNA分子,筛选最适注射用DNA浓度;将K14/hCTLA4-Ig基因表达载体分子通过显微注射分别导入小鼠受精卵雌、雄原核,并设立单原核注射对照组;利用输卵管腹壶部穿刺移植法将注射后的小鼠受精卵移植于同期发情的受体母鼠;利用PCR对出生的转基因首建小鼠进行筛选。结果最适DNA分子浓度为10ng/μl;在单、双原核注射组胚胎2细胞卵裂率分别为52.3%(132/253)和45.0%(108/240),差异有显著性(P<0.05);注射胚胎移植后体内存活率分别为18.1%(24/132)和16.7%(18/108),差异无显著性;转基因首建小鼠阳性率分别为3/24和5/18,转基因阳性小鼠占总注射胚胎的比例为1.2%(3/253)和2.08%(5/240),差异有极显著性(P<0.01)。结论尽管双原核注射对胚胎的2细胞卵裂率有一定影响,但通过双原核注射可有效提高转基因小鼠的制备效率。
- 王勇刘勤倪勇魏泓孙新民赵永聚
- 关键词：转基因技术小鼠动物模型胚胎发育
- 实验动物遗传工程——功能基因组时代的研究平台
- 2007年
- 本文就实验动物遗传工程在研究基因功能及其表达调控、阐明疾病发生机理、寻找药物治疗靶点等方面的技术突破做了综述.
- 倪勇王勇
- 关键词：实验动物转基因动物RNAI
- 提高精子转染外源DNA效率的山羊精液冷冻方法被引量：5
- 2007年
- 目的筛选一种既提高精子转染外源DNA效率,又保持解冻后精子活力的山羊精液冷冻—解冻方法。方法应用正交设计L9(34),因素分别为稀释液种类、稀释比例、降温时间和解冻液,每个因素选择3个水平,检测和比较解冻后精子转染外源DNA效率和精子活力。结果所选冷冻—解冻各因素对精液转染效率影响不显著[F(8,18)=1.032,P=0.449];平衡时间对冷冻—解冻活力影响极显著[F(2,24)=9.972,P=0.001],平衡1h极显著小于平衡2 h和4 h的精液活力(P=0.003,P=0.000),以平衡4 h最好。用筛选的冷冻—解冻方法处理精液,解冻后精子的活力极明显降低(P=0.002);生存指数降低,GOT释放量增加,菌落数减少,与鲜精相比差异显著(P=0.018;P=0.016;P=0.018);精子畸形率增加,顶体完整率降低,与鲜精相比差异不显著(P=0.494;P=0.084)。结论优化了提高精子转染外源DNA效率的山羊精液冷冻—解冻方法。
- 赵永聚魏泓孙新明李福兵王勇
- 关键词：山羊精子冷冻保存外源DNA
