叶华虎
- 作品数：59 被引量：208H指数：9
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- 猴B病毒被膜糖蛋白gC的原核表达及诊断价值评价被引量：1
- 2011年
- 目的:原核表达猴B病毒糖蛋白gC胞外区片段,评价其在猴B病毒血清学检测中的特异性和敏感性,为猴B病毒检测奠定基础。方法:利用PCR方法扩增gC胞外区基因片段,同时合成该片段的优化密码子序列,将其插入表达载体pET-28b(+)形成重组质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)并进行诱导表达;纯化蛋白先以Western印迹进行验证,再以ELISA方法和标准阳性、阴性血清评价其诊断价值。结果:直接从病毒DNA模板上获得的基因片段未能表达,而优化后的基因片段表达水平较高,表达蛋白的相对分子质量约为48×103,为包涵体形式,占菌体总蛋白的30%左右;Western印迹显示,重组蛋白能与猴B病毒阳性血清和His单克隆抗体发生免疫反应;34份标准阳性血清和25份阴性血清的ELISA检测结果显示,重组蛋白的敏感性和特异性分别为94.1%(32/34)和100%(25/25)。结论:利用原核表达系统制备的gC胞外区重组蛋白,可作为猴B病毒血清学检测抗原,其特异性和敏感性都较好。
- 王代平叶华虎董罡张文韬陈旖白杰英胡娟峰曾林聂奎
- 关键词：原核表达血清学诊断
- 体外获能过程中精子凋亡及其对体外受精影响的研究被引量：4
- 2003年
- 目的 探讨精子体外获能进程与细胞凋亡之间的联系 ,以及获能过程中精子凋亡对体外受精的影响。方法 猪精子经钙离子载体A2 3187(IA)诱导处理后 ,在TALP以及添加 10 %胎牛血清 (TALP +FCS组 )、2 5 μmol/L核酶抑制剂 (ATA)、TALP +ATA组 3种培养液中孵育 ,以考马斯亮蓝和TUNEL检测顶体反应 (AR)率和凋亡率 ;同时行体外受精 ,检查卵母细胞穿透率和卵裂率。结果 鲜精液的精子凋亡率为 5 .7% ,经洗涤、上游处理后凋亡率下降为 3% ;获能培养过程中 ,尽管IA浓度影响精子寿命 ,胎牛血清推迟获能进程 ,但凋亡仅与AR直接相关 ,获能完成后 4小时左右出现明显的凋亡增长峰 ,ATA可阻止获能后的凋亡效应 ;3种获能处理的精子体外受精后 ,TALP和TALP +FCS组有超过 30 %以上的受精卵不发生卵裂 ,而TALP +ATA组仅为 2 0 % ,与阴性对照组相当。结论 精子在顶体反应发生的同时可能启动和 (或 )激活凋亡机制 ,4小时后出现凋亡效应 ;精子DNA的异常断裂影响受精卵的发育能力。
- 叶华虎李福兵倪勇魏泓
- 关键词：顶体反应细胞凋亡精子
- 猴B病毒囊膜蛋白gB特异性抗原表位的筛选与表达鉴定
- 目的：筛选和鉴定猴B病毒囊膜蛋白gB的特异性抗原表位,将其应用于B病毒的检测。方法：利用蛋白序列比较和表位预测技术筛选猴B病毒囊膜蛋白gB的特异性抗原表位,经PCR扩增后原核表达,纯化,Western-blot鉴定融合蛋...
- 张小飞叶华虎赵彦斌王冬平赵洪卫曾林
- 关键词：蛋白序列
- 不同直径山羊卵泡卵母细胞的发育特征及体外发育能力被引量：9
- 2008年
- 目的研究山羊卵巢表面不同直径卵泡卵母细胞的发育特征及体外发育能力,优化山羊早期胚胎体外生产系统。方法收集繁殖期和非繁殖期山羊卵巢,采集表面直径小于1.5 mm、1.5-2.5 mm、2.5-3.5 mm和大于3.5 mm4种卵泡卵母细胞,以Hoechst33342染色检查核发育阶段;同时,利用体外培养方法观察不同直径卵泡卵母细胞的成熟、受精和早期胚胎发育能力。结果直径小于1.5 mm卵泡卵母细胞主要处于GVI期;1.5-2.5 mm卵泡卵母细胞以GVⅠ、GVⅡ和GVⅢ期为主;2.5-3.5 mm卵泡卵母细胞在GVⅡ到GVⅣ期间平均分布;大于3.5mm卵泡卵母细胞主要为GVⅢ到GVBD期。体外培养实验发现,直径小于1.5 mm卵泡卵母细胞仅有个别能完成成熟和卵裂;大于1.5 mm卵泡卵母细胞具有核成熟能力,能完成成熟和受精,但1.5-2.5 mm卵泡卵母细胞的受精卵通常阻滞于4-8细胞期;当卵泡直径大于2.5 mm时,卵母细胞才能较好地支持胚胎继续发育,其桑/囊胚的比例达到30%以上。卵泡卵母细胞的发育特征和体外发育能力与动物所处的繁殖季节无关。结论山羊卵巢上直径大于1.5 mm卵泡卵母细胞具有核成熟能力,大于2.5 mm卵泡卵母细胞能支持早期胚胎继续发育。
- 叶华虎袁菊芳刘宏伟张小飞隋丽华陈旖胡娟峰曾林
- 关键词：卵母细胞发育能力山羊
- 猴B病毒囊膜蛋白gC基因密码子优化及其在大肠埃希菌中的表达被引量：2
- 2011年
- 根据猴B病毒E2490标准株gC基因,选择大肠埃希菌偏好的密码子,设计合成了1 200个碱基,共编码400个氨基酸,测序证实后,克隆入pET-28b(+)载体,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),在IPTG诱导下获得50 ku以包涵体形式表达的gC重组蛋白。Western blot分析表明表达产物能够被猴B病毒标准阳性血清识别。间接ELISA检测表明,重组蛋白与人单纯疱疹病毒1型、2型阳性血清无交叉反应。本研究为进一步建立检测猴B病毒抗体间接ELISA方法奠定了基础。
- 王代平叶华虎曾林白杰英董罡张文韬聂奎
- 关键词：基因合成
- 重组人尿激酶原纯化工艺病毒去除效果验证被引量：1
- 2011年
- 目的验证重组人尿激酶原(Prourokinase,Pro-uk)纯化工艺的病毒去除效果。方法采用模拟Pro-uk纯化工艺中阴离子和阳离子交换层析的scale-down模型,以水泡性口炎病毒(Vesivular stomatitis virus,VSV)、脑心肌炎病毒(Encephalo-myocarditis virus,EMCV)、人单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus type-1,HSV-1)为指示病毒,采用细胞病变法评价离子交换层析的病毒去除效果。结果阴离子交换层析对脂包膜病毒VSV和HSV-1的去除能力强,对无脂包膜病毒EMCV的去除能力较弱;阳离子交换层析对VSV和HSV-1的去除能力较弱,对EMCV的去除能力较强。经离子交换层析纯化后,3种指示病毒的累计去除效率均>99.99%(大于4 log10)。结论 Pro-uk纯化工艺中的离子交换层析是控制病毒安全性的有效步骤,其去除效率达到了《生物组织提取制品和真核细胞表达制品的病毒安全性评价技术审评一般原则》规定的安全标准。
- 李世崇叶华虎赵国焓张正光王代平胥照平高丽华陈昭烈胡显文
- 关键词：重组人尿激酶原纯化工艺离子交换层析
- AFLP标记在小香羊遗传多态性检测中的应用被引量：19
- 2003年
- 研究了AFLP标记在研究小香羊遗传多态性方面应用的可行性和该山羊个体基因组DNA的AFLP扩增结果。实验应用 1 0条AFLP引物 ,用PstⅠ酶切 ,对 1 5只小香羊基因组DNA进行AFLP反应 ,共获得1 1 3个AFLP标记 ,单引物获得的标记数在 2～ 1 9之间 ,小香羊群体相似系数AFLP研究结果为 0 91 3( 0 81 4～ 0 980 )。该研究为评价小香羊的遗传稳定性提供了相关的参数 ,准确评价尚待和其它品种对比研究后确定。
- 苟本富叶华虎魏泓邹国林
- 关键词：小香羊遗传多态性遗传相似系数AFLP
- 猴B病毒抗体ELISA检测试剂盒的制备及准确性评价被引量：1
- 2017年
- 目的:以金标准试剂盒为参照,对新研制的猴B病毒抗体ELISA检测试剂盒进行准确性评价,以期为我国实验灵长类动物产业提供优质廉价的检测试剂。方法:利用3个批次共表达猴B病毒gD和g B蛋白的细胞上清分别制备ELISA检测试剂盒,与金标准试剂盒(VRL的ELISA试剂盒)同时对667只食蟹猴血清进行检测,考察新研制剂盒的准确性;然后,挑选强阳性、弱阳性、阴性样品,用另外2个批次ELISA试剂盒检测,考察不同批次试剂盒检测结果的稳定性。结果:金标准试剂盒对667只食蟹猴血清抗体检测结果为阳性280份、阴性387份,而新研制的ELISA试剂盒结果为阳性282份、阴性385份;与金标准相比,阳性样品的符合率为98.93%(277/280),阴性样品的符合率为98.97%(383/387),总体符合率为98.95%(660/667)。对100份强阳性样品、70份弱阳性样品、108份阴性样品及7份差异样品的重复检测表明,除1份弱阳性(金标准为阴性)检测为阴性外,其余样品与前期一致。结论:与金标准相比,新研制的试剂盒具有较高的准确性,可用于猴B病毒抗体的检测。
- 叶华虎陈建宇周小军王进代艳艳法云智袁菊芳
- 外源基因对精子的影响及其在山羊早期胚胎中的表达被引量：4
- 2008年
- 在前期实验中发现,山羊精子可自发结合外源DNA,但结合能力在不同动物个体之间差异显著。挑选结合能力明显不同的3只公羊,进一步探讨了外源DNA对精子的影响及其在早期胚胎中的表达,结果发现:外源基因与精子共同孵育后,精子的活率、顶体反应发生率和受精能力均呈下降态势,其降幅与精子的结合能力密切相关。利用与DNA共育后的精子进行体外受精,外源基因可被导入卵母细胞并在早期胚胎中获得表达,但胚胎阳性率因精子供体不同而差异显著(P<0.05);其中来源于高、中结合能力供体生产的胚胎,分别有16.2%(25/154)和5.3%(4/76)可检测到外源基因存在,但表达仅见于高结合能力供体生产的早期胚胎,表达率为6.5%(10/154);低结合能力供体生产的胚胎无外源基因。研究表明,在以精子载体方法生产转基因动物的实验过程中,筛选对DNA结合能力较强的精子供体是提高转基因效率的前提,但需要考虑外源DNA对精子受精能力的影响。
- 叶华虎董罡袁菊芳隋丽华胡娟峰李瑞生刘彦马啸陈振文曾林
- 关键词：精子胚胎山羊
- 猴B病毒血清学和PCR检测结果比较
- 2012年
- 目的:比较猴B病毒血清抗体和病毒PCR检测结果,阐明动物感染后病毒在机体内的存在状况。方法:采集成年猴血清和三叉神经组织,首先通过ELISA方法检测血清中B病毒抗体,然后采用B病毒gL和gD基因引物通过PCR方法扩增血清DNA和三叉神经组织DNA,比较2种方法的检测结果,并对扩增产物进行序列分析。结果:22份猴血清中,B病毒抗体呈阳性的有13份(59.1%);PCR结果显示,抗体阴性动物及所有血清DNA模板中均无阳性扩增,但在13份抗体阳性动物的三叉神经组织DNA样品中,PCR阳性4份(30.8%);gL和gD基因扩增条件及产物分析表明,gL基因的GC含量为64.1%,gD为74.2%,且gL的扩增条件和效果明显优于gD。结论:B病毒感染猴后,将在部分动物神经节中建立潜伏,而gL基因更适合作为分子鉴定的靶标。
- 董罡袁菊芳叶华虎徐刚孙波喻元聂奎韩文瑜
- 关键词：血清学检测PCR检测
