黄国明
- 作品数：16 被引量：13H指数：3
- 供职机构：延边大学农学院更多>>
- 发文基金：吉林省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 牛瑟氏泰勒虫与牛卵形巴贝斯虫多重PCR检测方法的建立被引量：3
- 2013年
- 根据GenBank上登录的牛瑟氏泰勒虫内转录间隔子基因(ITS基因)和牛卵形巴贝斯虫CCTη基因序列,设计合成了2对特异性引物。通过对反应条件进行优化,建立了同时检测牛瑟氏泰勒虫和牛卵形巴贝斯虫的多重PCR方法。结果显示,用该多重PCR方法可同时扩增出2条与试验设计相符的1 020bp(牛瑟氏泰勒虫)和537bp(牛卵形巴贝斯虫)的特异性条带,对牛瑟氏泰勒虫和牛卵形巴贝斯虫的最低检出限分别为10pg/μL和1pg/μL。用该方法对采自吉林省珲春市的23份临床样本进行检测,结果牛瑟氏泰勒虫的阳性率为69%,牛卵形巴贝斯虫的阳性率为52%,混合感染率为52%。表明,建立的多重PCR方法可用于临床诊断。
- 王轶男钱年超黄国明胡诗悦薛书江贾立军张守发
- 关键词：牛瑟氏泰勒虫多重PCR
- 牛源犬新孢子虫MAG1基因的克隆及原核表达
- 为了解牛源犬新孢子虫MAG1基因的生物学特性。本试验应用PCR技术扩增牛源犬新孢子虫MAG1基因,将PCR产物连接到pMD18-T Simple载体,构建pMD18-T-MAG1克隆质粒,PCR鉴定、酶切鉴定及测序分析后...
- 焦石贾立军薛书江刘明明黄国明张守发
- 文献传递
- 牛卵形巴贝斯虫巢式PCR诊断方法的建立及初步应用
- 根据GenBank上发表的牛卵形巴贝斯虫CCTη基因序列设计合成2对巢式PCR引物,建立牛卵形巴贝斯虫巢式PCR诊断方法,对该方法的最佳反应条件进行了筛选,并进行了特异性、敏感性及临床样本检测试验。结果表明,建立的巢式P...
- 黄国明贾立军薛书江张守发
- 文献传递
- 犬新孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组质粒的构建及原核共表达被引量：2
- 2013年
- 根据发表的犬新孢子虫MAG1基因序列(EF580924.1)和Bov IFN-γ基因序列(M29867.1)设计2对引物。分别以犬新孢子虫基因组DNA和pET28α-IFN-γ重组质粒为模板,通过重叠延伸拼接聚合酶链式反应(SOE-PCR)将犬新孢子虫MAG1基因与IFN-γ基因拼接,构建pMD18-T-MAG1-IFN-γ克隆质粒和pGEX-4T-MAG1-IFN-γ重组表达质粒,将鉴定正确的pGEX-4T-MAG1-IFN-γ重组表达质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blotting分析表达产物。结果表明,SOE-PCR扩增获得双基因融合片段大小为1 491bp,与GenBank中发表的MAG1(EF580924.1)和IFN-γ(M29867.1)核苷酸序列的同源性为99%;MAG1-IFN-γ融合基因表达蛋白大小为82 000,具有较好的反应原性。
- 焦石贾立军张立霞钱年超刘明明黄国明张守发
- 关键词：犬新孢子虫IFN-Γ
- 犬新孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组质粒的构建及真核共表达
- 本试验根据发表的犬新孢子虫MAG1基因序列(EF580924.1)和Bov IFN-γ基因序列(M29867.1),设计两对引物。分别以犬新孢子虫基因组DNA和pet28a-IFN-γ重组质粒为模板,通过重叠延伸拼接聚合...
- 焦石贾立军张立霞钱年超刘明明黄国明张守发
- 文献传递
- 牛卵形巴贝斯虫PCR检测方法的建立及初步应用被引量：4
- 2012年
- 为建立牛卵形巴贝斯虫(B.ovata)快速检测方法,本研究根据GenBank中登录的B.ovata CCTη基因序列设计引物,建立了PCR检测方法。对该方法的最佳反应条件进行优化,并进行特异性、敏感性及临床样本检测试验。结果表明,建立的PCR方法扩增B.ovata CCTη基因片段大小为1 008 bp,与参考株序列同源性为100%。该方法对牛巴贝斯虫、牛双芽巴贝斯虫、牛瑟氏泰勒虫基因组DNA扩增结果均为阴性。最低可以检测样品中34个拷贝的DNA。通过对49份临床样本的检测,该方法比姬姆萨染色镜检阳性率高8.2%。本实验为B.ovata的诊断提供了一种特异、敏感的检测技术。
- 黄国明贾立军薛书江李闯焦石张守发
- 关键词：PCR
- 犬新孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组真核质粒的真核共表达及免疫学评价
- 2012年
- 为对犬孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组真核质粒进行免疫学评价,本实验以含有MAG1-IFN-γ基因片段的克隆质粒为模板,扩增MAG1-IFN-γ目的片段,构建pVAX-MAG1-IFN-γ重组真核表达质粒,将其转染Vero细胞,采用间接免疫荧光(IFA)和western blot技术检测MAG1基因在Vero细胞中的表达,并免疫BALB/c小鼠,进行免疫学评价。结果表明,PCR扩增获得基因片段大小为1 536 bp,与GenBank中登录的MAG1和IFN-γ核苷酸序列的同源性为99%;IFA检测MAG1基因在Vero细胞中获得瞬时表达,转染的Vero细胞呈现特异性绿色荧光;western blot分析表达蛋白的分子量为57 ku,具有较好的反应原性。将构建的重组真核表达质粒免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA和T淋巴细胞亚群含量测定表明,重组质粒具有较好的免疫原性。本实验为新孢子虫病核酸疫苗的深入研究奠定了基础。
- 焦石贾立军张立霞钱年超刘明明黄国明张守发
- 关键词：犬新孢子虫
- 牛卵形巴贝斯虫伴侣素CCT_η基因的克隆与生物信息学分析被引量：4
- 2012年
- 对牛卵形巴贝斯虫延边株的伴侣素CCTη基因进行分子克隆,并利用生物信息学软件对CCTη基因进行了同源性、系统进化树、编码蛋白等电点、信号肽、跨膜区、糖基化位点及疏水性分析。结果显示,克隆的CCTη基因由1 008个核苷酸组成,其中编码335个氨基酸。与GenBank上发表的牛卵形巴贝斯虫CCTη基因序列(AB367928.1)同源性100%。CCTη基因编码蛋白等电点为7.32,不存在信号肽结构、跨膜区及糖基化位点。疏水性最大值3.38,最小值-3.79。本研究从CCTη基因方面近一步证实了该分离株的分子分类。
- 黄国明薛书江贾立军李闯张守发
- 牛瑟氏泰勒虫二温式PCR诊断方法的建立及应用
- 为寻求一种能快速、特异、敏感地诊断牛瑟氏泰勒虫病的方法,本试验根据GenBank上的牛瑟氏泰勒虫MPSP基因(GQ180198.1)设计合成了1对特异性的引物T1、T2,建立了检测牛瑟氏泰勒虫病的二温式PCR。该方法与犬...
- 钱年超贾立军薛书江张影黄国明张守发
- 文献传递
- 牛源犬新孢子虫MAG1基因的克隆及原核表达
- 2012年
- 为了解牛源犬新孢子虫MAG1基因的免疫学特性,根据MAG1基因序列,设计并合成了1对用于扩增MAG1基因的引物。将PCR扩增产物连接到原核表达载体pGEX-4T-2上,转化大肠杆菌BL21(DE3)中。SDS-PAGE结果显示,MAG1在大肠杆菌中获得了较高水平的表达,表达蛋白的分子质量为65ku。Western-blot结果显示,表达的MAG1蛋白可被牛源犬新孢子虫阳性血清特异性识别,表明该MAG1蛋白具有较好的反应原性。本研究为新孢子虫病疫苗及诊断试剂盒的研究奠定了基础。
- 焦石贾立军薛书江刘明明黄国明张守发
- 关键词：犬新孢子虫原核表达
