刘明明
- 作品数：37 被引量：36H指数：4
- 供职机构：延边大学更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项吉林省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 猪附红细胞体不同靶基因PCR检测方法的比较
- 为筛选出检测猪附红细胞体更为特异、敏感的PCR检测方法,本试验分别以16S rRNA、50SrRNA和膜蛋白OxaA为靶基因进行PCR检测,并从其敏感性、特异性和临床样本检出率等方面进行了比较。结果显示,以膜蛋白OxaA...
- 刘明明贾立军薛书江梁晚枫张守发
- 文献传递
- 牛源犬新孢子虫MAG1基因的克隆及原核表达
- 为了解牛源犬新孢子虫MAG1基因的生物学特性。本试验应用PCR技术扩增牛源犬新孢子虫MAG1基因,将PCR产物连接到pMD18-T Simple载体,构建pMD18-T-MAG1克隆质粒,PCR鉴定、酶切鉴定及测序分析后...
- 焦石贾立军薛书江刘明明黄国明张守发
- 文献传递
- 酵母双杂交筛选与猪附红细胞体α-烯醇化酶相互作用的宿主蛋白
- 为了解猪附红细胞体的感染机制，本试验利用酵母双杂交方法，筛选与猪附红细胞体α：烯醇化酶(α：Eno)相互作用的宿主蛋白。采用定点突变引物和Overlap：PCR方法扩增猪附红细胞体α：Eno基因的全长序列，扩增产物经双酶...
- 刘明明贾立军李积旭张守发
- 关键词：猪附红细胞体酵母双杂交
- 犬新孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组质粒的构建及原核共表达被引量：2
- 2013年
- 根据发表的犬新孢子虫MAG1基因序列(EF580924.1)和Bov IFN-γ基因序列(M29867.1)设计2对引物。分别以犬新孢子虫基因组DNA和pET28α-IFN-γ重组质粒为模板,通过重叠延伸拼接聚合酶链式反应(SOE-PCR)将犬新孢子虫MAG1基因与IFN-γ基因拼接,构建pMD18-T-MAG1-IFN-γ克隆质粒和pGEX-4T-MAG1-IFN-γ重组表达质粒,将鉴定正确的pGEX-4T-MAG1-IFN-γ重组表达质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blotting分析表达产物。结果表明,SOE-PCR扩增获得双基因融合片段大小为1 491bp,与GenBank中发表的MAG1(EF580924.1)和IFN-γ(M29867.1)核苷酸序列的同源性为99%;MAG1-IFN-γ融合基因表达蛋白大小为82 000,具有较好的反应原性。
- 焦石贾立军张立霞钱年超刘明明黄国明张守发
- 关键词：犬新孢子虫IFN-Γ
- 猪附红细胞体50S核糖体基因PCR诊断方法的建立及应用
- 为建立一种检测猪附红细胞体50S核糖体基因的诊断技术,本试验根据GenBank上最新发布的猪附红细胞体(猪支原体)基因组序列(NC 015155)的保守区域设计合成了一对引物,以吉林省延边地区猪附红细胞体基因组DNA为模...
- 刘明明贾立军薛书江梁晚枫张守发
- 文献传递
- 犬新孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组真核质粒的真核共表达及免疫学评价
- 2012年
- 为对犬孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组真核质粒进行免疫学评价,本实验以含有MAG1-IFN-γ基因片段的克隆质粒为模板,扩增MAG1-IFN-γ目的片段,构建pVAX-MAG1-IFN-γ重组真核表达质粒,将其转染Vero细胞,采用间接免疫荧光(IFA)和western blot技术检测MAG1基因在Vero细胞中的表达,并免疫BALB/c小鼠,进行免疫学评价。结果表明,PCR扩增获得基因片段大小为1 536 bp,与GenBank中登录的MAG1和IFN-γ核苷酸序列的同源性为99%;IFA检测MAG1基因在Vero细胞中获得瞬时表达,转染的Vero细胞呈现特异性绿色荧光;western blot分析表达蛋白的分子量为57 ku,具有较好的反应原性。将构建的重组真核表达质粒免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA和T淋巴细胞亚群含量测定表明,重组质粒具有较好的免疫原性。本实验为新孢子虫病核酸疫苗的深入研究奠定了基础。
- 焦石贾立军张立霞钱年超刘明明黄国明张守发
- 关键词：犬新孢子虫
- 猪附红细胞体α-烯醇化酶基因的克隆及生物信息学分析被引量：7
- 2014年
- 为了研究猪附红细胞体α-烯醇化酶的功能,根据GenBank中猪附红细胞体α-烯醇化酶基因的DNA序列设计引物,以猪附红细胞体吉林株DNA为模板,进行PCR扩增,将该基因克隆到pMD-18T载体后,进行序列测定及分析。结果表明:此序列编码393个氨基酸,与GenBank上登录的α-烯醇化酶序列核苷酸同源性为98%,氨基酸同源性为100%。蛋白质的分子理论值为42.4 ku,理论等电点为6.62。α-烯醇化酶二级结构以α螺旋为主,主要有6个抗原表位区域。系统进化分析显示,该基因与牛支原体的亲缘关系最近,与犬支原体亲缘关系最远。
- 薛书江张守发李海峰张影钱年超刘明明李积旭
- 关键词：猪附红细胞体克隆生物信息学分析
- 犬新孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组质粒的构建及真核共表达
- 焦石贾立军张立霞钱年超刘明明黄国明张守发
- 牛肝脏组织酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定
- 为构建应用于酵母双杂交系统的牛肝脏组织cDNA文库,试验提取牛肝脏组织的总RNA,运用SMA-RT和LD：PCR技术合成cDNA,并与文库线性载体pGADT7：Rec共转化酵母菌Y187中,构建酵母双杂交c-DNA文库。...
- 贾立军刘明明李积旭于龙政张守发
- 关键词：CDNA文库酵母双杂交
- 犬新孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组质粒的构建及真核共表达
- 本试验根据发表的犬新孢子虫MAG1基因序列(EF580924.1)和Bov IFN-γ基因序列(M29867.1),设计两对引物。分别以犬新孢子虫基因组DNA和pet28a-IFN-γ重组质粒为模板,通过重叠延伸拼接聚合...
- 焦石贾立军张立霞钱年超刘明明黄国明张守发
- 文献传递
