陈璟
- 作品数：5 被引量：20H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 甲状旁腺激素和转铁蛋白N端半分子融合蛋白在毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2005年
- 利用重叠PCR技术将PTH(parathyroidhormone,甲状旁腺激素)基因与TFN(transferrinN_terminalhalf_molecule,转铁蛋白N端半分子)基因在体外融合,融合基因克隆至真核表达载体pPIC9中,转化毕赤酵母GS115。转化子经甲醇诱导后,融合蛋白得到了表达并分泌到发酵上清液中。经SPSepharoseFF阳离子交换层析、PhenylSepharoseFastFlow疏水层析纯化获得了纯度大于95%的PTH_TFN样品。Westernblot分析及腺苷酸环化酶实验证明融合蛋白中的PTH具有与抗PTH抗体结合能力及刺激腺苷酸环化酶的活性,铁饱和实验证明融合蛋白中的TFN和单独的TFN具有相同铁结合能力。因而TFN可望作为PTH的天然运输载体。
- 张豪李晓静王德解陈璟李彦英李玉玲沈明山方宏清陈惠鹏
- 关键词：甲状旁腺激素毕赤酵母基因表达腺苷酸环化酶
- 干扰素与转铁蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达及鉴定被引量：3
- 2005年
- 利用重叠PCR技术将干扰素(interferon,IFN)基因与转铁蛋白N端半分子(transferrinN-terminalhalf-molecule,TFN)基因在体外融合,融合基因和单独的TFN基因分别克隆至真核表达载体pPIC9中,转化毕赤酵母GS115,得到的转化子经诱导表达后在发酵上清中均获得了表达.经SPSepharoseFastFlow阳离子交换层析、PhenylSepharoseFastFlow疏水层析纯化,获得了纯度大于93%的重组融合蛋白IFN-TFN和纯度大于95%的重组TFN样品.生物活性实验证明融合蛋白IFN-TFN具有抗病毒活性.铁饱和实验证明融合蛋白IFN-TFN和单独的TFN具有相同的铁结合能力.因而TFN可望作为IFN的天然运输载体.
- 李晓静张豪薛冲李彦英陈璟苗林方宏清陈惠鹏
- 关键词：转铁蛋白干扰素-Α毕赤酵母
- 昆虫杆状病毒系统表达外源蛋白的糖基化被引量：7
- 2004年
- 昆虫表达系统作为一类应用广泛的真核表达系统 ,具有与多数高等真核生物相类似的翻译后修饰的过程。但其生产的重组糖蛋白一般仅具有高甘露糖或寡甘露糖型糖链 ,难以生成复杂构型糖链成为该系统的缺陷之一。综述了目前昆虫杆状病毒系统表达外源蛋白的糖基化研究进展。
- 陈璟方宏清周长林陈惠鹏
- 关键词：昆虫杆状病毒糖基化修饰
- 炭疽杆菌噬菌体裂解酶基因在大肠杆菌中的表达及鉴定被引量：9
- 2005年
- 利用PCR方法扩增炭疽杆菌噬菌体裂解酶 (γlysin)基因 ,克隆至大肠杆菌表达载体pET2 2b中 ,经菌落PCR筛选、序列测定和酶切鉴定证实表达载体pET2 2b -γlysin构建成功 ,并在EscherichiacoliBL2 1(DE3)中获得了高表达。目的蛋白约占菌体总蛋白的 4 0 % ,5L发酵罐中的产酶水平高达 15g L。菌体经超声破碎 ,制备无细胞抽提液 ,StreamlineSP和SPHP柱层析以及SephacrylS- 10 0凝胶过滤三步纯化 ,得到分子量为 2 7kD单一条带的目的蛋白 ,薄层扫描分析显示其纯度大于 95 %。目的蛋白的收率为 19 1% ,纯化倍数为 35 0。生物活性鉴定重组的γ噬菌体裂解酶具有特异性 :可快速裂解炭疽杆菌 ,比活为 14 0 0u mg左右 ;而对大肠杆菌、枯草杆菌及蜡样芽孢杆菌没有裂解活性。
- 李晓静张豪付学奇李彦英陈璟李玉玲方宏清陈惠鹏
- 关键词：炭疽杆菌大肠杆菌
- SARS病毒S蛋白片段的克隆表达和纯化
- 2005年
- 以大肠杆菌表达载体pET22b为载体,直接表达SARS病毒S蛋白425～569及894～1033等2片段。表达所获得的包涵体形式蛋白经尿素溶解后分别经过2次离子交换层析,获得初步纯化。在酸性和低尿素浓度环境中,2种S蛋白片段极易沉淀。Western印迹鉴定显示其与抗SARS病毒血清呈阳性反应。获得的纯化蛋白可用于检验受体结合能力等研究。
- 陈璟李彦英周育森李玉玲周长林方宏清陈惠鹏
- 关键词：SARS病毒S蛋白纯化克隆表达片段WESTERN印迹
