贾春宏
- 作品数：10 被引量：33H指数：3
- 供职机构：南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 二甲双胍通过诱导G1期阻滞抑制骨肉瘤细胞增殖被引量：4
- 2014年
- 目的：检测二甲双胍对人骨肉瘤细胞株MG63增殖的影响。方法：不同浓度二甲双胍刺激MG63-MTT法检测细胞体外增殖能力：5mmol／L二甲双胍作用48h，流式细胞术检测MG63细胞周期分布．免疫印迹检测cyclinD1表达以及AMPK、AKT、S6K及s6蛋白磷酸化水平。结果：0～50mmol／L的二甲双胍对MG63细胞增殖的抑制作用，除10mmol／L和20mmol／L两组间外，其他处理组间均表现出显著性差异（P〈0．01）。5mmol／L二甲双胍诱导MG63细胞发生G1期阻滞（P〈0．01），抑制cylinD1、P-S6K1及P-s6表达，促进AMPK和AKT的磷酸化。结论：二甲双胍通过诱导细胞周期G1期阻滞．通过激活AMPK和AKT的磷酸化抑制roTOR通过抑制MG63增殖。
- 王雨辰侯敬申贾春宏白晓春赵莉
- 关键词：二甲双胍骨肉瘤细胞周期
- p70/p85核糖体蛋白S6激酶1重组真核表达载体的构建及其在人乳腺癌MCF-7细胞内功能的初步鉴定
- 2014年
- 目的:构建p70核糖体蛋白S6激酶1(p70 ribosomal protein S6 kinase 1,p70 S6K1)及p85 S6K1基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,并鉴定其在人乳腺癌MCF-7细胞内的表达及功能。方法:以pRK7-HA-S6K1为模板,采用PCR扩增出目的基因片段p70 S6K1、p85 S6K1,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag构建重组表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,采用PCR、双酶切和DNA测序鉴定。将重组载体转染MCF-7细胞,24 h后采用Western blotting方法检测细胞内p70 S6K1、p85 S6K1蛋白的表达;同时向转染细胞内加入1 mmol/L H2O2处理36 h,观察p70 S6K1、p85 S6K1蛋白对H2O2诱导的细胞死亡的影响。结果:成功扩增得到p70 S6K1、p85 S6K1基因片段并构建重组真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,重组载体经PCR、双酶切鉴定均出现p70 S6K1和p85S6K1预期条带,DNA测序结果显示其全长基因阅读框完整、正确。重组载体在MCF-7细胞中高效表达flag-p70 S6K1和flag-p85S6K1,且p85 S6K1能增强H2O2诱导的细胞死亡。结论:成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,均能在MCF-7细胞中高效表达,且p85 S6K1能够增强H2O2诱导的细胞死亡。
- 赵莉侯敬申白晓春贾春宏
- 关键词：基因重组细胞死亡乳腺癌MCF-7细胞
- 留学生医学细胞生物学教学方法探讨被引量：1
- 2015年
- 南方医科大学自2005年开始共招收10届留学生。细胞生物学教研室承担了留学生细胞生物学全英教学任务,并取得了较好的教学效果。文章从不断提高师资力量、精心选择教材、运用多种教学手段、重视实验课教学四个主要方面总结了经验教训,并期望进一步探索留学生细胞生物学教学改革方法,不断提高留学生教学质量。
- 李明贾春宏陈振国林骏杨翠兰胡乐白晓春罗深秋
- 关键词：医学细胞生物学教学方法留学生
- IKK-β通过p85 S6K1调节过氧化氢诱导的细胞死亡
- 一、研究背景:
细胞内的氧化还原状态对于细胞的存活及功能至关重要。参与细胞内氧化还原调节的活性氧(Reactiveoxygenspecies，ROS)是细胞内主要的氧化剂(oxidants)。正常生理低水平ROS可...
- 贾春宏
- 关键词：哺乳动物雷帕霉素靶蛋白细胞死亡过氧化氢
- DHA可抑制黄曲霉素B1诱导的肝癌细胞迁移及侵袭被引量：3
- 2016年
- 目的分析二十二碳六烯酸(DHA)对黄曲霉素B1(AFB1)诱导的肝癌细胞侵袭能力影响。方法不同浓度的AFB1、DHA/AFB1分别干预肝癌Hep G2.2.15细胞,通过细胞划痕、迁移及侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力变化,流式细胞仪分析细胞周期比例,透射电镜观察细胞超微结构的改变。结果 2μmol/L AFB1与空白组相比,细胞划痕修复率增高,细胞穿膜细胞数目均增多,G0/G1期细胞比例明显下降,G2/M期细胞比例明显升高,S期细胞比例变化不明显;细胞多核仁,细胞内出现线粒体、高尔基体增多等。DHA/AFB1与单独AFB1处理组的相比,细胞划痕修复率降低;细胞穿膜细胞数目均减少,G0/G1期细胞比例明显升高,G2/M期细胞比例明显降低,S期细胞比例变化不明显;细胞单核仁,细胞内核质减少,细胞内线粒体减少,出现空泡化超微结构。结论 DHA可以明显抑制AFB1诱导增强的Hep G2.2.15细胞迁移及侵袭能力。
- 陈可和高婷潘金飞韦海明贾春宏蓝娇陈振祥潘登白晓春
- 关键词：肝癌细胞黄曲霉素B1DHA
- 克隆、表达及纯化核糖体蛋白S6用于体外激酶活性检测被引量：3
- 2010年
- 目的:构建40S核糖体蛋白S6的原核表达载体,表达并纯化S6蛋白,将其作为底物用于S6激酶(S6K)的体外活性测定。方法:采用RT-PCR方法从人胚肾细胞HEK293中获取S6 cDNA,将扩增产物克隆至大肠杆菌表达载体中,进行酶切及测序鉴定;IPTG诱导GST-S6融合蛋白在大肠杆菌中表达,用谷胱甘肽亲和层析纯化GST-S6,免疫沉淀法检测该蛋白是否可作为底物用于S6K的体外激酶活性测定。结果:酶切及测序鉴定表明构建了S6原核表达载体,并表达及纯化出GST-S6融合蛋白,相对分子质量为55×103。该蛋白可用于S6K的体外激酶活性测定,特异性强。结论:S6蛋白的克隆、表达与纯化成功,可用于S6K的体外激酶活性测定,为研究S6K的功能奠定了基础。
- 刘安玲赵莉贾春宏李明
- 关键词：原核表达
- CXCR3过表达体外对T淋巴细胞性白血病侵袭的影响
- 2016年
- 目的:探讨趋化因子受体CXCR3的表达对T淋巴细胞性白血病细胞Jurkat的侵袭影响。方法:通过RT-PCR法扩增获得小鼠CXCR3序列片段,构建过表达CXCR3慢病毒(GFP&Puromycin),感染Jurkat细胞株,检测细胞表面CXCR3的表达。将过表达细胞株置入Transwell小室侵袭模型,研究CXCR3表达增高能否增强白血病细胞的侵袭。结果:慢病毒感染白血病细胞株96 h后观察到GFP表达(<10%),经筛选后GFP表达>90%。CXCR3表达较慢病毒载体组高90%,成功构建过表达CXCR3白血病细胞株。其中,过表达细胞株的侵袭率(12.71±1.03)%较对照组(6.82±0.49)%显著增高(P<0.000 1)。结论:CXCR3的表达与白血病的侵袭密切相关;CXCR3的表达增高能增强白血病细胞的侵袭,可能是T淋巴细胞性白血病侵袭机制之一。
- 丁文姣冯晓勤贾春宏黄智李春富
- 关键词：白血病T淋巴细胞中枢神经系统CXCR3
- 二甲双胍对肾癌细胞凋亡的影响及机制被引量：8
- 2011年
- 目的探讨二甲双胍对肾癌细胞凋亡的影响及其机制。方法通过Annexin V-FITC/PI染色镜下观察及流式细胞仪检测观察二甲双胍对786-O细胞凋亡的影响,通过免疫印迹检测AMPK信号及Caspase 9表达探讨可能分子机制。结果二甲双胍能够诱导786-O在低浓度血清环境凋亡,激活Caspase 9,二甲双胍能够激活786-O细胞中AMPK信号,但与其凋亡诱导效应无关。结论二甲双胍能够诱导肾癌细胞在低浓度血清环境凋亡,具有潜在治疗肾癌作用。
- 李明刘俊胡卫列贾春宏李海燕温芝华邹志鹏白晓春罗深秋
- 关键词：二甲双胍肾细胞癌细胞增殖细胞凋亡AMPK
- S100A4在类风湿关节炎滑膜中的表达及其对成纤维样滑膜细胞分泌VEGF促进血管生成的影响被引量：15
- 2017年
- 目的:研究S100钙结合蛋白A4(S100A4)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者和正常人膝关节滑膜中的表达水平,以及S100A4对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes,RAFLSs)促进血管生成的影响。方法:滑膜分别取自RA患者(RA组)及正常人(control组)膝关节,免疫组化法观察S100A4和VEGF蛋白在2组滑膜中的表达情况。RAFLSs分离自活动性RA滑膜;ELISA法检测S100A4刺激RAFLSs分泌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的作用;用rh S100A4孵育RAFLSs的条件培养基作用于人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),检测S100A4体外血管生成能力。结果:S100A4及VEGF蛋白在RA组滑膜中高表达(P<0.05),rh S100A4显著刺激RAFLSs分泌VEGF,呈时间和剂量依赖性(P<0.05);rh S100A4孵育RAFLSs的条件培养基可促进HUVECs在体外形成管腔。结论:S100A4蛋白在RA患者膝关节滑膜中高表达,S100A4可通过促进RAFLSs分泌VEGF来刺激滑膜血管生成。这些结果提示S100A4可作为治疗RA的潜在靶点。
- 查丁胜吴昊林宏生姚平查振刚贾春宏盛超
- 关键词：类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞血管生成
- FKBP38的原核表达、抗体制备及其应用
- 2010年
- 目的构建人FKBP38 N-末端及C-末端原核表达载体并使其在大肠杆菌中高效表达,纯化基因表达产物,制备兔多克隆抗体并对该抗体用于Western免疫印迹、免疫荧光及免疫组织化学检测进行评价,为研究FKBP38的功能奠定基础。方法以人FKBP38 cDNA为模板,根据人FKBP38全长cDNA系列,设计PCR引物分别扩增N-末端(1-207aa)及C-末端(209-387aa),将扩增产物克隆至大肠杆菌表达载体pGEX-6P1中,经BamH I/Sal I双酶切鉴定。GST-FKBP38-N及GST-FKBP38-C融合蛋白在硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下在大肠杆菌BL21中得到表达。利用谷胱甘肽亲和层析纯化融合蛋白,用纯化的GST-FKBP38-N融合蛋白及GST-FKBP38-C融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体并进行纯化。使用纯化的抗FKBP38多抗以Western免疫印迹、免疫荧光及免疫组织化学检测FKBP38的表达与细胞内的定位。结果成功构建FKBP38 N-末端及C-末端原核表达载体,表达并纯化了GST-FKBP38-N融合蛋白及GST-FKBP38-C融合蛋白,制备并纯化了FKBP38特异性抗体。该抗体用于Western免疫印迹检测FKBP38在不同细胞株中的表达,特异性强、效价高;用于免疫荧光检测FKBP38在细胞内主要定位于线粒体上;用于免疫组织化学检测FKBP38在乳腺组织细胞呈现胞浆阳性。结论 FKBP38特异性抗体制备成功,该抗体可用于FKBP38的免疫印迹、免疫荧光及免疫组织化学检测,为深入研究FKBP38的功能奠定基础。
- 刘安玲赵莉Ma Dong-zhu贾春宏李明温芝华叶永斌
- 关键词：多克隆抗体免疫荧光免疫组织化学
