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应用xMAP液态芯片多重快速检测四种病原微生物的研究被引量：11: 2008年; 目的:建立一种多重、快速、特异性好、灵敏度高的病原微生物检测方法。方法:根据GenBank数据库中的小肠结肠炎耶尔森氏菌、单核细胞增生性李斯特菌、产气荚膜梭菌、鼠疫耶尔森氏菌基因序列,分别针对ail、hly、cpe、3a基因设计4对引物和4条探针。通过重叠PCR扩增各目的基因并构建重组质粒,以该重组质粒DNA为模板,通过多重PCR同时扩增上述4个基因,建立xMAP液态芯片检测技术,在此基础上对标准菌株基因组DNA进行检测并验证该方法的特异性和敏感性。结果:xMAP液态芯片对质粒DNA和标准菌株基因组DNA的检测结果与多重PCR结果一致。该方法能在3.5 h内同时完成对4种病原菌的检测,特异性好,且敏感性要高于PCR方法,灵敏度最高可达200CFU/ml。结论:xMAP液态芯片技术是病原微生物的多重快速检测的新方法,具有很好的应用价值和前景。; 胡瑞赵金银陈德坤刘艳华高姗康琳高艳丽王景林; 关键词：病原微生物

小分子GnRH-luffinS重组嵌合毒素的制备及其细胞毒性检测: 2008年; 目的:制备以小分子丝瓜素(luffin)S2为毒性部分,以Ⅰ型促性腺激素释放激素(GnRH)为导向部分的重组嵌合毒素GnRH-luffinS,体外检测其对肿瘤细胞的杀伤作用。方法:重叠PCR方法扩增GnRH-luffinS的基因,克隆至表达载体pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性克隆诱导表达,产物用Ni-NTA亲和层析柱纯化。纯化蛋白经重组肠激酶(rEK)切割去除Trx融合蛋白,XTT法检测重组毒素对HeLa,A549,HepG-2,SP2/0和鸡胚成纤维细胞(CEF)的体外细胞毒性。结果:成功构建了GnRH-luffinS的表达质粒,并在大肠杆菌中获得表达,纯化后的纯度为93%。GnRH-luffinS对HeLa,A549,HepG-2和SP2/0的IC50分别为67.19,70.42,84.44和106.25μg/ml,而对CEF无作用。结论:重组毒素GnRH-luffinS对肿瘤细胞有一定的杀伤作用。; 刘艳华康琳高姗王俊红赵金银高艳丽胡瑞王景林; 关键词：细胞毒性

GnRH-PE Ⅱ-luffinS重组嵌合毒素的制备与细胞毒性检测被引量：1: 2008年; 目的:制备以Ⅰ型促性腺激素释放激素(GnRH Ⅰ)为导向部分,以绿脓杆菌外毒素的结构域Ⅱ(PEⅡ)为转膜区,以丝瓜毒素luffinS2为毒性部分的重组嵌合毒素GnRH-PEⅡ-luffinS,体外实验检测其对肿瘤细胞的杀伤作用。方法:重叠PCR法扩增GnRH-PEⅡ-luffinS的基因,克隆至表达载体pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性克隆诱导表达,产物用Ni-NTA亲和层析柱纯化。纯化蛋白经重组肠激酶(rEK)切割去除Trx融合蛋白,XTT法检测重组毒素对HeLa,A549,HepG-2,SP2/0和鸡胚成纤维细胞(CEF)的体外细胞毒作用。结果:成功构建了GnRH-PEⅡ-luffinS的表达质粒,并在大肠杆菌中获得表达,纯化后的纯度为94%。GnRH-PEⅡ-luffinS对HeLa,A549,HepG-2和SP2/0的IC50分别为13.50μg/ml,13.74μg/ml,16.79μg/ml和26.07μg/ml,而对CEF无作用。结论:重组嵌合毒素GnRH-PEⅡ-luffinS对肿瘤细胞有较强的杀伤作用。; 刘艳华高姗康琳王俊红赵金银高艳丽胡瑞王景林; 关键词：细胞毒性

四种病原菌的xMAP液态芯片多重快速检测技术的研究: 小肠结肠炎耶尔森氏菌/(Yersinia enterocolitica/)、产气荚膜梭菌/(Clostridium perfringens/)、单核细胞增生李斯特菌/(Listeria monocytogenes/)是三...; 胡瑞; 关键词：小肠结肠炎耶尔森氏菌产气荚膜梭菌单增李斯特菌鼠疫耶尔森氏菌; 文献传递

猪转移因子对犬外周血中性粒细胞数量和杀菌活性的影响被引量：3: 2007年; 无菌采犬外周血,肝素抗凝,制备不同浓度的粒细胞悬液,分别与不同浓度的大肠杆菌悬液共同培养,采用MTT法测定粒细胞的杀菌效果,确定粒细胞体外培养时杀伤细菌的最优化条件;把不同浓度的猪转移因子(Swine transfer factor,sTF)加入注射sTF前后不同时期分离的犬外周血中粒细胞与E.coli的培养系统中,测定粒细胞的杀菌能力。结果表明,当粒细胞浓度为1.3×106个/mL,E.coli浓度为6×105个/mL时,试验最能反映粒细胞的杀菌效果。当sTF浓度为1.56mg/mL时,对PMN杀菌活性的影响最大;在犬注射sTF后的第2d,中性粒细胞单独杀菌活性最好,并且此时外周血中性粒细胞的数量达到峰值。本研究结果表明,sTF不仅能够增强犬中性粒细胞的杀菌活性,还能增加犬外周血中性粒细胞的数量。; 张佩君胡瑞陈德坤; 关键词：中性粒细胞杀菌活性

多重快速鉴别病原微生物的新技术:xMAP液态芯片被引量：11: 2007年; 多指标同步分析（Flexible Multi-Analyte Profiling,xMAP）液态芯片技术是美国Luminex公司近年来开发的一种新型生物芯片技术。这种基于微球的芯片技术能够对单孔内多达100种不同的反应同时进行检测,与固相芯片或片膜芯片相比,具有多重、快速、灵敏度高（可达0.01pg）、重复性好（CV〈5%）以及检测动态范围宽（可达0.2～32000pg/ml）等优点。目前,该技术已被广泛应用于各研究领域,尤其在核酸、蛋白质和其他生物分子的大规模分析中。; 胡瑞王景林; 关键词：液态芯片微球病原微生物

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胡瑞