田颖新
- 作品数：7 被引量：4H指数：1
- 供职机构：河北北方学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HeLa细胞cDNA文库及酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-CPn0308的构建被引量：2
- 2012年
- 旨在利用酵母双杂交系统构建HeLa细胞的cDNA文库,并构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-CPn0308。从HeLa细胞中提取总RNA,应用SMARTTM技术,构建以pGADT7-Rec为载体的HeLa细胞酵母GAL4 AD融合cDNA文库。应用PCR技术扩增目的片段CPn0308,并成功克隆该基因到诱饵载体pGBKT7中,将重组质粒转化酵母菌株AH109后,检测诱饵载体有无自激活和细胞毒性作用。结果显示,文库展现良好的多态性,重组诱饵载体pGBKT7-CPn0308不具有毒性且未自主激活报告基因,说明该文库和诱饵质粒可用于酵母双杂交系统。
- 田颖新王春苗刘雪晴贾晓晖贾天军
- 关键词：HELA细胞CDNA文库酵母双杂交自激活
- 酵母双杂交技术筛选Cpn0147和Cpn0308配体的研究
- 肺炎衣原体/(Chlamydiapneumonia, Cpn/)是一类严格的细胞内生长并具有独特的二相发育周期的病原微生物,主要引起呼吸道和肺部感染,并与心脑血管疾病的发生、发展密切相关。现有研究显示部分衣原体基因编码的...
- 田颖新
- 关键词：CDNA文库HELA细胞诱饵载体酵母双杂交
- 文献传递
- 神经退行性疾病潜在致病肺炎衣原体蛋白Cpn0147酵母双杂交诱饵载体的构建
- 2012年
- 目的:构建Cpn0147酵母双杂交诱饵载体,为应用酵母双杂交系统筛选与其相互作用的蛋白奠定基础。方法:应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增技术获得Cpn0147基因片段,克隆入pGBKT7载体,鉴定构建是否成功,确定构建成功后将重组载体pGBKT7-Cpn0147转入AH109及Y187酵母中,进行诱饵载体的毒性及自激活活性分析。结果:Cpn0147诱饵载体构建成功,且该诱饵载体无自激活活性,对两种宿主酵母细胞无毒性。结论:诱饵载体pGBKT7-Cpn0147可用于酵母双杂交系统,为进一步筛选与之相互作用蛋白提供了实验基础。
- 贾晓晖田颖新田敏韩小东贾天军
- 关键词：肺炎衣原体酵母双杂交诱饵载体自激活
- 肺炎衣原体0308基因真核表达载体构建及表达检测
- 2010年
- 目的构建肺炎衣原体AR39株Cpn0308基因真核表达重组质粒,体外转染HeLa细胞并检测表达情况,为Cpn核酸疫苗的研制做准备。方法应用PCR技术从CpnAR39株基因组中扩增Cpn0308全长基因,重组入pcDNA3.1/HisA真核表达载体相应位点,进行酶切鉴定和序列分析后,运用脂质体介导重组质粒转染HeLa细胞,间接免疫荧光技术检测目的蛋白在真核细胞中表达情况。结果 PCR扩增得到393bp的特异性Cpn0308基因,筛选鉴定出pcDNA3.1/HisA-Cpn0308真核表达重组体,序列测定证实与GeneBank登录的CpnAR39株Cpn0308基因一致;间接免疫荧光法检测到重组质粒转染的HeLa细胞能够表达目的蛋白。结论成功构建pcDNA3.1/HisA-Cpn0308真核表达重组体,且该重组体能够在体外真核细胞中表达目的蛋白,为进一步研究CpnDNA疫苗以及研究该蛋白的生物学功能提供实验基础。
- 贾晓晖贾天军田颖新程健君刘雪晴
- 关键词：肺炎衣原体真核表达间接免疫荧光技术DNA疫苗
- 感染CPn人群中CPn0308免疫原性分析研究
- ＜正＞目的分析Cpn感染ICVD患者中CPn0308的免疫原性。方法收集临床血液标本,分离血浆,从外周血单个核细胞中提取DNA。使用EIA法检测Cpn IgG、IgM;PCR法检测CPn DNA;Western
- 贾晓晖程健君何多姣李双霞田颖新贾天军
- 关键词：融合蛋白免疫原性
- 文献传递
- Cpn0308基因真核载体构建及鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的:构建Cpn0308基因真核表达重组质粒,为肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,Cpn)核酸疫苗的研制做准备。方法:用PCR技术从Cpn AR39株基因组DNA中扩增Cpn 0308基因,经双酶切、连接等反应,重组入pcDNA3.1/HisA真核表达载体,转化到感受态细胞,再经含氨苄青霉素的LB培养基筛选,酶切、PCR扩增及测序鉴定。结果:从Cpn AR39株基因组DNA中扩增出特异的Cpn 0308基因,约400bp;酶切、重组、转化、筛选鉴定出pcDNA3.1/HisA-Cpn0308重组质粒;序列测定证实与GenBank登录的肺炎衣原体Cpn AR39株Cpn0308基因一致。结论:功地构建了pcDNA3.1/HisA-Cpn0308重组质粒,为肺炎衣原体核酸疫苗的研制奠定了基础。
- 贾晓晖童伟田颖新贾天军
- 关键词：肺炎衣原体真核表达载体基因克隆
- 喉癌细胞酵母双杂交cDNA文库的构建
- 2012年
- 目的构建喉癌(Hep-2)细胞的酵母双杂交cDNA文库,为筛选包涵体膜蛋白分子的作用配体提供前期工作基础.方法从Hep-2细胞中提取总RNA,应用SMARTTM技术,构建以pGADT7-Rec为载体的Hep-2细胞酵母GAL4AD融合cDNA文库.结果所构建的文库展现出良好的多态性.结论可用于酵母双杂交系统的筛选.
- 刘雪晴王春苗田颖新贾天军
- 关键词：HEP-2细胞CDNA文库酵母双杂交
