贾晓晖
- 作品数：53 被引量：98H指数：6
- 供职机构：河北北方学院更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金河北省高等学校科学技术研究指导项目河北省科技厅资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学自动化与计算机技术更多>>
- 甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP-2)的CUB1、CUB2片段多克隆抗体的制备及鉴定被引量：5
- 2015年
- 目的原核表达甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP-2)的CUB1、CUB2功能区蛋白,制备其功能区蛋白的多克隆抗体并进行鉴定。方法利用带有CUB1、CUB2基因片段的p GEX-6P-2原核载体诱导表达GST-CUB1和GST-CUB2融合蛋白并进行纯化,将纯化后的融合蛋白作为抗原,与Freund佐剂充分混合后免疫5周龄BALB/c雌性小鼠,制备多克隆抗体;应用Western blot法检测多克隆抗体特异性,应用ELISA检测多克隆抗体效价。结果成功表达并纯化GST-CUB1和GST-CUB2蛋白;应用其作为抗原对小鼠进行免疫后,成功制备出与其相应的多克隆抗体,且特异性强,与其他蛋白无交叉反应;间接ELISA测得CUB1抗体效价大于1∶32 000,CUB2抗体效价大于1∶16 000。结论成功制备了特异性强,效价高的GST-CUB1和GST-CUB2蛋白多克隆抗体。
- 韩小东贾天军贾晓晖李婷赵霞
- 关键词：多克隆抗体
- 1株抗生素耐药微小脲原体hebnu3h07的全基因组测序及序列分析被引量：2
- 2018年
- 目的对1株从患者标本分离出的具有耐药性的微小脲原体hebnu3h07进行全基因组测序和生物信息学分析,为深入研究微小脲原体的基因组学特征及耐药机制提供依据。方法对从临床分离的微小脲原体hebnu3h07株进行培养鉴定并进行药敏试验,采用Ion torrent高通量测序技术对其进行全基因组测序,再使用相关软件对测序数据进行基因组组装、基因预测与功能注释、共线性分析、直系同源簇(COG)聚类分析、菌株分型和介导耐药的相关基因检测分析。结果微小脲原体hebnu3h07株对数种抗生素表现出不同程度的耐药性,其完整基因组大小为723 292bp,GC含量为25.4%,与现存3株微小脲原体完整序列比对发现其基因组序列较为保守,多位点序列分型属于ST1型,对介导耐药的基因检测发现数个突变位点。结论通过对此株抗生素耐药的微小脲原体的全基因组测序和导致耐药的基因位点分析,丰富了我国微小脲原体基因组数据,为微小脲原体的耐药机制研究提供了依据。
- 马良赫聪慧李萍贾晓晖贾天军
- 关键词：解脲脲原体全基因组耐药性
- Cpn0308基因真核载体构建及鉴定
- ＜正＞目的通过基因克隆技术,构建Cpn0308基因真核表达重组质粒,为肺炎衣原体（Chlamydia pneumoniae,Cpn）核酸疫苗的研制做准备。方法用PCR技术从CpnAR39株基因组DNA中扩
- 贾晓晖贾天军
- 关键词：肺炎衣原体真核表达载体基因克隆
- 文献传递
- HeLa细胞cDNA文库及酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-CPn0308的构建被引量：2
- 2012年
- 旨在利用酵母双杂交系统构建HeLa细胞的cDNA文库,并构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-CPn0308。从HeLa细胞中提取总RNA,应用SMARTTM技术,构建以pGADT7-Rec为载体的HeLa细胞酵母GAL4 AD融合cDNA文库。应用PCR技术扩增目的片段CPn0308,并成功克隆该基因到诱饵载体pGBKT7中,将重组质粒转化酵母菌株AH109后,检测诱饵载体有无自激活和细胞毒性作用。结果显示,文库展现良好的多态性,重组诱饵载体pGBKT7-CPn0308不具有毒性且未自主激活报告基因,说明该文库和诱饵质粒可用于酵母双杂交系统。
- 田颖新王春苗刘雪晴贾晓晖贾天军
- 关键词：HELA细胞CDNA文库酵母双杂交自激活
- 刚地弓形虫RH株ROP18基因真核表达载体的构建
- 目的 克隆刚地弓形虫(Toxplasma gondii)棒状体蛋白18(ROP18)基因并构建重组质粒pVAX1-ROP18,并检验其在真核细胞中的表达情况.方法 ROP18 基因和质粒pVAX1 分别经Hind Ⅲ 和...
- 郭玲玲张晓磊张进顺贾晓晖姜文静王春苗刘楠
- 关键词：刚地弓形虫重组质粒真核表达
- 甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2 EGF片段多克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2018年
- 目的制备甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MBL-associated serine protease-2,MASP-2)EGF功能区蛋白的多克隆抗体并进行鉴定,为后续研究奠定基础。方法利用带有EGF基因片段的p GEX-6P-2原核载体诱导表达GST-EGF融合蛋白,并采用商品化GST-Beads进行纯化;将纯化的融合蛋白作为抗原,与弗氏完全佐剂充分混合后,免疫5周龄BALB/c雌性健康小鼠,制备多克隆抗体;利用琼脂双扩散法检测多克隆抗体的效价,并进一步应用Western blot鉴定多克隆抗体的特异性及效价。结果成功表达并纯化EGF蛋白,以此成功制备出特异性强的GST-EGF融合蛋白的多克隆抗体,与其他蛋白无交叉反应;琼脂双扩散法检测的EGF抗体效价为1∶8;Western blot检测的EGF抗体效价大于1∶2 000。结论成功制备出具有特异性强且效价高的GST-EGF蛋白的多克隆抗体。
- 张培星李涓窦倩倩贾晓晖
- 关键词：多克隆抗体免疫印迹
- 高分辨率熔解曲线分析技术检测MASP-2基因点突变方法的建立及评价被引量：1
- 2017年
- 目的建立高分辨率熔解曲线(HRM)分析技术检测人甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶-2(MASP-2)基因g.21370(G>T)位点单核苷酸多态性(SNP)的方法并进行评价。方法通过测序获得MASP-2基因g.21370(G>T)位点3种不同基因型对照品,并用其建立HRM技术检测MASP-2基因点突变方法。利用60份待测DNA样品对建立的HRM方法的准确性、重复性及稳定性进行评价。结果建立的MASP-2基因HRM分析方法扩增反应正常,G/G、G/T、T/T 3种基因型区分明显,扩增产物Melt曲线良好,无非特异性产物出现;与基因序列测定结果对比显示准确性良好;对野生型和突变型标本3次重复检测结果显示,Tm值变异系数为0.017和0.023;χ~2检验结果表明,本研究选取的随机体检人群MASP-2基因g.21370(G>T)位点基因型频率分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡。结论建立的MASP-2基因g.21370(G>T)位点HRM检测方法准确性高、重复性及稳定性良好,为下一步临床分析MASP-2基因SNP提供一定的技术支持。
- 贾晓晖阎敏娜贾天军程永婷张斌
- 关键词：高分辨率熔解曲线基因型单核苷酸多态性
- 刚地弓形虫ROP10-ROP18真核表达载体的构建与鉴定被引量：3
- 2018年
- 目的构建刚地弓形虫棒状体蛋白10(ROP10)、棒状体蛋白18(ROP18)复合基因真核表达载体pVAXDROP10-ROP18,并在HeLa细胞内表达目的蛋白。方法设计ROP10、ROP18基因特异引物,采用RT-PCR扩增ROP10、ROP18基因并测序,将ROP10和ROP18基因分别定向插入双启动子真核表达载体pVAXD的多克隆位点中,构建单价质粒pVAXD-ROP10和pVAXD-ROP18,然后将ROP18基因插入pVAXD-ROP10中构建双启动子真核表达载体pVAXD-ROP10-ROP18。经PCR和双酶切验证后将pVAXD-ROP10-ROP18转染至HeLa细胞内,提取细胞总RNA并逆转录为cDNA,以此为模板分别进行ROP10基因和ROP18基因的RT-PCR鉴定;采用间接免疫荧光试验(IFA)检验ROP10和ROP18蛋白表达情况。结果成功克隆ROP10、ROP18基因片段并构建了重组质粒pVAXDROP10-ROP18,测序、双酶切和PCR验证重组质粒构建正确。分别将3种重组质粒转染至HeLa细胞后经RT-PCR鉴定,pVAXD-ROP10-ROP18组可同时扩增出1 761bp(ROP10基因)和1 665bp(ROP18基因)2个片段,而pVAXDROP10组和pVAXD-ROP18组分别扩增出1 761bp和1 665bp的目的片段;IFA显示pVAXD-ROP10组和pVAXDROP18组均有绿色荧光,即分别表达ROP10和ROP18蛋白。结论成功构建重组质粒pVAXD-ROP10-ROP18、pVAXD-ROP10和pVAXD-ROP18质粒可在真核细胞中分别表达ROP10和ROP18两种蛋白。
- 刘荣荣张晓磊张进顺贾晓晖刘楠
- 关键词：刚地弓形虫重组质粒真核表达载体
- FXYD5基因真核表达载体的构建
- 目的：构建人高尔基复合体相关蛋白(FXYD5)基因真核表达载体,并观察其在真核细胞中的表达,研究肺炎衣原体0147基因与其相互作用方法：提取Hela 细胞的全部RNA,反转录成cDNA,以其作为模板,设计含特异性酶切位点...
- 程永婷贾晓晖赵霞李婷贾天军
- 白细胞介素-33和可溶性受体ST2在慢性丙型肝炎患者中的表达及其临床意义被引量：6
- 2015年
- 目的 检测慢性丙型肝炎患者血清中白细胞介素-33（IL-33）、可溶性受体ST2（sST2）表达水平,探讨其临床意义。方法 选取2012年3月-2013年6月于河北北方学院附属第一医院进行诊治的47例慢性丙型肝炎患者及50例健康对照者作为研究对象,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测所有研究对象血清中IL-33和sST2水平,并进行统计学分析。结果 慢性丙型肝炎患者血清中IL-33和sST2水平[226.30（27.10-699.40）pg/ml和3.77（1.42-12.68）μg/ml]显著高于健康对照者[20.50（9.30-67.50）pg/ml和0.07（0.03-0.12）μg/ml],差异有统计学意义（P〈0.05）;丙氨酸氨基转移酶（ALT）异常组患者IL-33和sST2水平明显高于ALT正常组,且IL-33和sST2水平与慢性丙型肝炎患者ALT水平呈正相关（r=0.479,P〈0.05;=0.383,P〈0.05）。结论 检测慢性丙型肝炎患者血清中IL-33和sST2水平有助于了解患者免疫状态及肝脏损伤情况,为疾病诊治提供一定依据。
- 李华张素贞郭群英阎敏娜贾晓晖
- 关键词：白细胞介素-33可溶性受体慢性丙型肝炎肝功能
