杨平
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 供职机构：浙江大学医学院更多>>
- 发文基金：浙江省教育厅科研计划浙江省科技厅资助项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- 问号钩端螺旋体鞭毛蛋白相关蛋白FliH／I／Y／N基因原核表达和膜定位被引量：1
- 2008年
- 目的克隆问号钩端螺旋体（简称钩体）鞭毛相关蛋白编码基因fliH、fliI、fliY和fliN并构建其原核表达系统，制备表达产物抗血清并了解其蛋白的定位。方法以苯酚-氯仿法提取的问号钩体黄疸出血群赖型赖株基因组DNA为模板，用PCR扩增全长fliH、fliI、fliY和fliN基因片段，T-A克隆后测序，继而构建上述目的基因克隆的原核表达系统。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图像分析系统检查重组蛋白rFliH、rFliI、rFliY和rFliN的表达情况，Ni-NTA亲和层析法提纯目的表达产物。皮下免疫家兔获得4种目的重组蛋白抗血清，用ELISA和Western blot分别检测抗血清效价并了解抗血清与相应抗原结合的能力。采用免疫电镜技术对fliH、fliI、fliY和fliN进行定位。结果PCR扩增获得大小分别为924、1365、1065和318 bp的全长fliH、fliI、fliY和fliN基因片段，与报道的序列比较，其核苷酸和氨基酸序列相似性均为100％。所构建的原核表达系统均能有效地表达目的重组蛋白，其产量均约为20％。rFliH、rFliI、rFliY和rFliN蛋白免疫家兔后能产生抗体，其兔抗血清ELISA效价达到1：100000以上，并分别识别钩体相应重组蛋白和膜蛋白提取物而出现明显的Western杂交条带。fliH、fliI、fliY和fliN蛋白分布于问号钩体内膜、外膜或内外膜之间。结论本研究成功地构建了能高效表达问号钩体鞭毛相关蛋白fliH、fliI、fliY和fliN的原核表达系统，并获得了能有效识别上述蛋白抗原的高效价抗血清。鞭毛相关蛋白fliH、fliI、fliY和fliN是问号钩体内膜或外膜蛋白成分。
- 徐韩飞阮萍廖苏梅杨平毛亚飞李立伟严杰
- 关键词：问号钩端螺旋体原核表达
- 重金属污染物对巨噬细胞的影响及其生物监测意义被引量：3
- 2015年
- 研究小鼠腹腔巨噬细胞(PMФ)对于环境污染物镉、铅的细胞毒性反应,探讨巨噬细胞作为生物监测指示物的意义.实验取小鼠腹腔巨噬细胞体外培养,分别经不同浓度氯化镉、醋酸铅染毒后,用电镜观察细胞形态变化,用酶标仪检测其还原MTT能力、吞噬功能及NO产量的变化.结果显示,氯化镉、醋酸铅染毒后(10-4mol·L-1),小鼠腹腔巨噬细胞突起消失,细胞死亡;巨噬细胞还原MTT能力显著下降(p<0.05),NO合成明显减少(p<0.05),且具有明显的剂量-效应关系.实验结果说明,氯化镉、醋酸铅对小鼠腹腔巨噬细胞具有明显的细胞毒性.结果提示,PMФ可作为生物监测指示物,应用于环境污染的生物监测.
- 杨平李筱筱张海忠李仲杰李继承
- 关键词：氯化镉醋酸铅巨噬细胞生物监测生物指示物
- 电镜超薄切片批量染色的新方法被引量：6
- 2016年
- 超薄切片染色是透射电镜生物样本制备中的关键环节。本文介绍了一种透射电镜超薄切片染色的新方法,利用简单自制的染色液防污存储与批量染色装置,可对超薄切片载网进行批量化染色,不但极大提高染色效率,而且减少了染色过程中染色液、样品的污染,达到染色液的重复利用,同时减少重金属对操作者的伤害和对环境的污染。
- 王贝贝尹伟刘双双尚卫娜谢礼杨平郭建胜王丽洪健
- 关键词：超薄切片
- 问号钩端螺旋体属特异性LipL41s抗原膜定位及其患者血清抗体检测被引量：2
- 2007年
- 目的确定问号钩端螺旋体(钩体)属特异性脂蛋白抗原LipL41s膜定位及其自然抗体应答情况和抗体类型。方法采用显微镜凝集试验(MAT)检测四川地区钩体病患者血清标本。IPTG诱导重组原核系统表达目的蛋白rLipL41/1和rLipL41/2,Ni-NTA亲和层析法提纯目的重组表达产物。采用Western blot检测感染不同血清群问号钩体病患者血清与rLipL41s的免疫反应性。采用胶体金免疫电镜技术,对LipL41s进行膜定位。建立基于rLipL41s的ELISA,检测钩体病患者血清中特异性抗体水平及其类型。结果黄疸出血群是四川地区最主要的优势钩体血清群。不同血清群问号钩体病患者血清均能有效识别LipL41s。LipL41s是位于钩体外膜表面的蛋白分子。156例MAT阳性钩体病患者血清标本中,rLipL41/1和rLipL41/2特异性IgM阳性率分别为84.6%～87.8%和78.2%～83.3%,特异性IgG阳性率分别为69.2%～81.4%和75.0%～80.1%。结论LipL41s是钩体表面蛋白抗原。自然感染钩体时,LipL41/1和LipL41/2可诱导机体产生IgM和IgG两类血清抗体,且两者之间有广泛的抗原交叉反应。rLipL41/1和rLipL41/2可作为研制通用型钩体基因工程疫苗和检测试剂盒的候选抗原。
- 胡野郭宗琪孙百莉杨平严杰
- 关键词：钩端螺旋体抗原定位
