杨利敏
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：内蒙古大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金内蒙古自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组CPTα的亲和纯化及其单克隆抗体的制备被引量：2
- 2004年
- 目的 :制备抗A型产气荚膜梭菌毒素α(CPTα)单克隆抗体 (mAb)并鉴定其生物学特性。方法 :利用工程菌株E .coliM15 /pQE30 CPTα表达的重组A型CPTα带有 6个组氨酸 (6×his)标签的特性 ,经Ni NTA螯合亲和层析方法纯化后 ,用纯化的重组CPTα免疫BALB/c鼠 ,以常规杂交瘤细胞融合技术、HAT选择性培养和间接ELISA进行筛选 ,并分析其亚类及中和保护作用。结果 :获得一株能稳定分泌抗CPTα的mAb杂交瘤细胞株 4E2 ,其分泌抗体亚类为IgG1。该mAb与重组CPTα和天然CPTα均可发生特异性反应 ,并可保护小鼠抵抗 2倍最小致死剂量CPTα的攻击 ,属中和性抗体。结论 :应用纯化的重组CPTα成功地获得了特异性的中和抗体mAb 4E2 ,为A型CPTα诊断抗体和治疗性抗体的研制奠定了基础。
- 王景林杨利敏吴东林康琳
- 关键词：A型产气荚膜梭菌单克隆抗体
- 胎儿心肌钙蛋白T(cTnT)基因的克隆和序列分析
- 2005年
- 人心肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)可调节肌丝蛋白的Ca2+浓度,从而调节心脏肌肉收缩的肌钙蛋白复合体组成成分之一.在心力衰竭末期,cTnT再度表达.cTnT的mR-NA水平和其蛋白水平升高与心力衰竭密切相关.从正常流产胎儿心脏提取RNA,通过反转录获得cDNA,再利用PCR方法得到目的基因.序列分析证实,得到的基因是正确而特异的cTnT基因,不同人种的cTnT序列同源性很高,达99%以上.全序列有3个碱基与国外报道序列有差别,所编码氨基酸有2个不同.推测其区别可能是人种的差异或胎儿与成人发育期不同造成的.
- 李充璧杨利敏谭芳刘小强王利春阿丽娅
- 关键词：克隆
- PCR合成的A型肉毒毒素重链C端结合区基因的高效表达与免疫原性分析被引量：1
- 2006年
- 目的A型肉毒毒素重链C-端结合区(BoNT/A Hc-C)的PCR拼接合成、重组表达与免疫原性分析。方法经密码子优化软件对编码基因序列重新优化设计,以16条长片段寡核苷酸引物经重叠PCR合成BoNT/AHc-C基因片段,插入表达载体pET-His,再转化大肠杆菌BL21(DE3)plys S中进行诱导表达,以金属螯合亲和层析法纯化重组蛋白,并进行鉴定和抗原性分析。结果表达工程菌裂解液经SDS-PAGE分析,重组蛋白约占细胞总蛋白的65%,为包涵体形式,经亲和层析一步纯化和柱上复性获得纯度大于95%的可溶性重组蛋白,Western blot和ELISA均证明,该重组蛋白与抗天然BoNT/A马血清抗毒素有特异性结合反应,是BoNT/AHc-C抗原,且免疫小鼠可耐受10个LD50BoNT/A的攻击。结论所获重组BoNT/AHc-C蛋白具有良好的免疫原性,为研制基因工程疫苗奠定了基础。
- 杨利敏王景林扈庭茂
- 关键词：A型肉毒毒素抗原性
- 重组肉毒毒素E(BoNT/E)重链C端的表达、纯化及其抗原性分析被引量：1
- 2004年
- 目的 :克隆、表达并纯化肉毒毒素E重链C端 (BoNT/EHC2 )保护性抗原片段 ,为BoNT/E的抗体制备和检测方法的建立奠定基础。方法 :采用PCR扩增BoNT/EHC2基因 ,插入表达载体 pET2 8a ,转化E .coliBL2 1(DE3) pLysS获得表达工程菌株 ,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化。利用Western印迹和间接ELISA方法鉴定rBoNT/EHC2的抗原性。结果 :表达工程菌 pET2 8a EHC2 /BL2 1(DE3) pLysS于 37℃用 0 .2mmol/LIPTG诱导 6h ,表达的目的蛋白可以达到全菌蛋白的 37.9%。经过固定化金属螯合亲和层析一步纯化 ,rBoNT/EHC2的纯度可达 95 %以上。Western印迹和间接ELISA显示其具有良好的抗原性。结论 :首次克隆、表达并纯化了BoNT/EHC2片段 ,并可被抗天然BoNT/E马血清所识别 ,为制备相应的抗体及建立快速检测方法做好了准备。
- 贾宏丽杨利敏王景林康琳王利春孙嗣梅
- 关键词：抗原性
