王利春
- 作品数：9 被引量：13H指数：2
- 供职机构：内蒙古大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金内蒙古自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程经济管理更多>>
- S生物技术股份有限公司发展战略研究
- 近年来,在宏观政策与经济环境的双重影响下,我国畜牧业发展稳中求进,总产值较往年呈现快速增长趋势。随着中国畜牧业逐步完成从量到质的转变,兽用生物制品行业为畜牧业的健康发展提供了重大保障,并成为了国家七大新兴战略行业之中的生...
- 王利春
- 关键词：兽用生物制品生物技术
- 重组肉毒毒素E(BoNT/E)重链C端的表达、纯化及其抗原性分析被引量：1
- 2004年
- 目的 :克隆、表达并纯化肉毒毒素E重链C端 (BoNT/EHC2 )保护性抗原片段 ,为BoNT/E的抗体制备和检测方法的建立奠定基础。方法 :采用PCR扩增BoNT/EHC2基因 ,插入表达载体 pET2 8a ,转化E .coliBL2 1(DE3) pLysS获得表达工程菌株 ,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化。利用Western印迹和间接ELISA方法鉴定rBoNT/EHC2的抗原性。结果 :表达工程菌 pET2 8a EHC2 /BL2 1(DE3) pLysS于 37℃用 0 .2mmol/LIPTG诱导 6h ,表达的目的蛋白可以达到全菌蛋白的 37.9%。经过固定化金属螯合亲和层析一步纯化 ,rBoNT/EHC2的纯度可达 95 %以上。Western印迹和间接ELISA显示其具有良好的抗原性。结论 :首次克隆、表达并纯化了BoNT/EHC2片段 ,并可被抗天然BoNT/E马血清所识别 ,为制备相应的抗体及建立快速检测方法做好了准备。
- 贾宏丽杨利敏王景林康琳王利春孙嗣梅
- 关键词：抗原性
- 相思豆毒素研究及应用被引量：6
- 2004年
- 相思豆毒素类似于蓖麻毒素,是一种植物蛋白毒素,具有极强的细胞毒性作用,特别是对某些恶性肿瘤细胞的毒性更强,这使它成为用于杀伤肿瘤细胞的候选毒素之一。本文就其性质、基因克隆、结构与功能,以及在肿瘤导向治疗方面的应用作一简要的综述。
- 王利春王景林
- 关键词：毒素植物蛋白基因克隆细胞毒性肿瘤细胞
- 胎儿心肌钙蛋白T(cTnT)基因的克隆和序列分析
- 2005年
- 人心肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)可调节肌丝蛋白的Ca2+浓度,从而调节心脏肌肉收缩的肌钙蛋白复合体组成成分之一.在心力衰竭末期,cTnT再度表达.cTnT的mR-NA水平和其蛋白水平升高与心力衰竭密切相关.从正常流产胎儿心脏提取RNA,通过反转录获得cDNA,再利用PCR方法得到目的基因.序列分析证实,得到的基因是正确而特异的cTnT基因,不同人种的cTnT序列同源性很高,达99%以上.全序列有3个碱基与国外报道序列有差别,所编码氨基酸有2个不同.推测其区别可能是人种的差异或胎儿与成人发育期不同造成的.
- 李充璧杨利敏谭芳刘小强王利春阿丽娅
- 关键词：克隆
- A型产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆及高效表达被引量：3
- 2004年
- 目的 :实现产气荚膜梭菌α毒素 (Clostridiumperfringensalphatoxin ,CPa)基因的克隆与表达。方法 :用PCR技术从A型产气荚膜梭菌中扩增出CPa基因 ,克隆到原核表达载体pQE30中 ,构建了重组质粒pQE30_CPa ,转化E .coliM15获得了CPa的高效表达。结果 :序列测定和双酶切表明 ,CPa基因正确插入载体。序列分析发现CPa基因与GenBank中的 4种CPa基因相似率为 76 .7%～ 99.9%。工程菌裂解液经SDS_PAGE分析显示在相对分子质量 4 30 0 0处有一条表达很强的蛋白区带 ,与CPa相对分子质量相符 ,约占菌体总蛋白的 6 2 .88% ,主要以包涵体形式存在。免疫印迹结果表明 ,表达的重组CPa蛋白同抗CPa血清有特异性结合。结论 :为进一步研究CPa重组疫苗和制备CPa的特异性抗体奠定了基础。
- 王景林王利春吴东林康琳姜永强
- 关键词：Α毒素基因表达
- 重组蓖麻毒素A链蛋白的可溶性表达、纯化与抗原性分析被引量：2
- 2005年
- 用PCR方法从克隆质粒pUC19-RTA中扩增出蓖麻毒素A(RTA)链基因,序列分析正确后, 亚克隆到原核表达质粒pET-His中,构建重组表达质粒pET-HisRTA,再转化到E.coli BL21(DE3) plysS中获得表达工程菌株BL21/pET-HisRTA。该工程菌在30℃经0.4mmol／L IPTG诱导4h后获 得可溶性表达的目的蛋白,约占菌体总蛋白的18.45％,SDS-PAGE分析显示表达的蛋白区带与 RTA相对分子量相符,约32kDa左右。表达产物经Ni-NTA亲和层析法一步纯化,蛋白纯度约达 97.53％,并可得到约18mg/L重组RTA蛋白。Western印迹和间接ELISA结果证明,重组RTA蛋 白与抗天然蓖麻毒素多抗可发生特异性的抗原抗体反应,具有良好的抗原性,这为制备RT特异 性抗体及建立RT的检测方法奠定了基础。
- 孙嗣梅王利春康琳王景林
- 关键词：可溶性表达蓖麻毒素纯化A链原核表达质粒亲和层析法
- a型重组相思豆毒素A、B链蛋白的原核表达、纯化及其生物活性分析
- 为提高相思豆毒素A链/(ABRaA/)的表达量，根据E．coli对密码子的偏好性，设计并合成相互重叠的24条长片段寡核苷酸引物，以两步PCR法合成了优化的ABRaA片段，并克隆到pGEM-T载体中，测序结果正确后，亚克隆...
- 王利春
- 文献传递
- 测定血小板衍生生长因子活性方法的改进被引量：1
- 2004年
- 以BALB/C小鼠胚胎成纤维细胞(BALB/C3T3)作为靶细胞,经20mmol/L醋酸钠平衡后的CM-Sepharose(CMS)吸附过的胎牛血清作为基础培养血清,应用[3-(4,5-dimethylthi-azolyl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide,MTT]方法测定血小板源生长因子(platelet-derivedgrowthfactor,PDGF)诱导细胞增殖的生物活性.结果表明,该方法具有良好的量效关系,且精确度、重现性均较高.
- 王湛李充璧周明海王利春阿丽娅
- 关键词：BALB/C3T3细胞
- 一种联合检测相思子毒素和蓖麻毒素的胶体金试纸及专用单克隆抗体
- 本发明公开了一种联合检测相思子毒素和蓖麻毒素的胶体金试纸及专用单克隆抗体。抗相思子毒素的单克隆抗体，是由保藏编号为CGMCC No.4062的Abrin-a A链单克隆抗体细胞株分泌的。本发明的胶体金试纸具有敏感度高、特...
- 王景林高姗聂聪王俊虹王利春康琳周阳
- 文献传递
