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重组CPTα的亲和纯化及其单克隆抗体的制备被引量：2: 2004年; 目的 :制备抗A型产气荚膜梭菌毒素α(CPTα)单克隆抗体 (mAb)并鉴定其生物学特性。方法 :利用工程菌株E .coliM15 /pQE30 CPTα表达的重组A型CPTα带有 6个组氨酸 (6×his)标签的特性 ,经Ni NTA螯合亲和层析方法纯化后 ,用纯化的重组CPTα免疫BALB/c鼠 ,以常规杂交瘤细胞融合技术、HAT选择性培养和间接ELISA进行筛选 ,并分析其亚类及中和保护作用。结果 :获得一株能稳定分泌抗CPTα的mAb杂交瘤细胞株 4E2 ,其分泌抗体亚类为IgG1。该mAb与重组CPTα和天然CPTα均可发生特异性反应 ,并可保护小鼠抵抗 2倍最小致死剂量CPTα的攻击 ,属中和性抗体。结论 :应用纯化的重组CPTα成功地获得了特异性的中和抗体mAb 4E2 ,为A型CPTα诊断抗体和治疗性抗体的研制奠定了基础。; 王景林杨利敏吴东林康琳; 关键词：A型产气荚膜梭菌单克隆抗体

分子生物学技术在动物营养学中的应用与发展前景被引量：6: 2002年; 分子生物学理论与技术的发展和应用已渗透到生命科学的各各领域,动物营养学的发展需要在分子水平上分析及解释营养素对动物机体的生理、病理变化调控,如生长发育、新陈代谢、遗传变异、免疫与疾病等。本文综述了分子生物学在动物营养学中的应用:利用分子生物学技术改造或生产动物性营养物质;从基因水平上研究如何提高动物生产性能及肉用性能:如肉质与瘦肉率等;在分子水平上研究营养与基因表达、调控的关系,以从根本上阐明营养对机体的作用机制;利用基因工程技术开发饲料资源。; 张锐欧阳红生张光圣吴东林; 关键词：分子生物学技术动物营养基因表达调控

人端粒酶RNA基因的克隆与鉴定被引量：4: 2000年; 以人血基因组DNA为模板 ,合成两段 2 0个寡聚核苷酸为引物 ,经过PCR扩增 ,得到 4 80bp的片段 ,克隆到pMD18-T载体中 ,经电泳、酶切、PCR鉴定后测定序列。序列分析表明所克隆的人端粒酶RNA(humantelomeaseRNA ,hTR)基因含有 4 80bp ,包括约 4 50bp的编码模板区序列和约 30bp的上游调控区序列 ,其中模板区的 11个核苷酸 ( 5’ -CUAACCCUAAC - 3’)合成端粒亚单位 (TTAGGG) n。结果与文献报道的人肾癌 2 93细胞系hTRcDNA序列完全相同 ,同源性达 10 0 % ,表明已经获得了hTR基因克隆。; 马永红张玉静叶志远阮承迈陈守义吴东林李鹏; 关键词：端粒酶基因克隆

乳腺癌的hTERT基因表达和端粒酶活性关系分析被引量：2: 2001年; 目的为了分析端粒酶催化亚基在乳腺癌组织中的表达情况。方法对52例各型乳腺癌病理样本进行了端粒酶活性(TRAP-ELISA方法)和端粒酶催化亚基(hTERT)mRNA表达检测(RT-PCR)。同时还比较了同一样本的癌组织和癌组织端粒酶活性和hTERT的表达情况。结果表明乳腺癌组织样本中94％呈端粒酶阳性,癌旁组织中有部分样本(2/35)呈弱阳性;hTERT(P<0.01)。结论认为端粒酶活性可能成为乳腺癌恶性程度或肿瘤易发指标,并且有可能采用更为廉价的RT-PCR进行辅助诊断。; 赵金红刘卫林范业萍阮承迈陈守义吴东林张玉静杨光荣孙桂娟蔡勇; 关键词：乳腺癌 HTERT基因端粒酶基因表达活性

端粒酶活性在哺乳动物细胞中的表达被引量：2: 2003年; 为研究端粒酶活性在哺乳动物细胞中的激活 ,构建了端粒酶催化亚基 (human telomerase reverse transcriptase,h TERT)和端粒酶 RNA组分 (h TR)基因的真核表达载体 ,分别在无端粒酶活性的 DK细胞株和人肝癌细胞中进行表达 ,以 TRAP-银染和 TRAP- EL ISA定量方法测定转染细胞。结果显示 ,在人肝癌细胞株中仅 h TERT表达即可使端粒酶活性显著增加 ,而 DK细胞中 h TERT必须和 h TR同时转染才有端粒酶活性表达。这一结果表明 ,端粒酶活性表达主要和 h TERT/ h TR有关 ,采用人的端粒酶 h TERT/ h TR在其他哺乳动物细胞中表达端粒酶活性是可行的。; 阮承迈陈守义吴东林李鹏马鹤雯马永红张玉静; 关键词：端粒酶活性哺乳动物细胞人肝癌细胞

应用mTR^(-/-)鼠模型系统研究肿瘤发生机制的进展: 2002年; 端粒酶是真核细胞体内的一种核糖核酸蛋白质复合体 ,是一种特殊的DNA聚合酶 ,具有延伸DNA末端的功能 ,能够维持端粒长度和功能 ,TERT具有反转录酶活性。在大多数体细胞和原代细胞中 ,端粒酶活性很低 ,通常检测不到 ,但在肿瘤细胞中 ,端粒酶则被广泛激活 ,因此认为端粒酶与肿瘤的发生具有密切的关系 ,本文介绍了应用端粒酶阴性鼠研究端粒酶与G链悬垂和P5; 李鹏吴东林马鹤雯杨焕民张玉静; 关键词：肿瘤发生 P53 动物模型

用改进的TRAP法准确反映端粒酶产物的性质: 端粒酶(telomerase)是一种核糖核蛋白,它能利用自身的RNA组分作为模板,催化合成端粒重复序列(脊椎动物为5’-GGTTAG-3’)。研究表明,端粒酶的表达与细胞永生化及肿瘤发生密切相关,因此对端粒酶活性的检测日...; 吴东林张玉静李鹏陈守义阮承迈; 文献传递

志贺毒素A/B(ShT-A/B)亚单位基因的克隆与序列分析被引量：3: 2003年; 应用PCR技术从Ⅰ型痢疾志贺茵(Shigella dysenteriae type Ⅰ)中,分别扩增出约895bp和225bp的成熟ShT-A,B基因片段,直接克隆至pGEM-T载体中,经蓝白斑筛选、PCR和双酶切鉴定正确后,命名为pGEM-ShTA_2和pGEM-ShTB_3。测序结果表明,插入的片段是ShT-A,ShT-B,且与GenBank中ShT-A,B核酸序列完全一致,从而为重组ShT-A,B的表达研究奠定了基础。; 喻华英王景林高丰康琳吴东林赵金红; 关键词：基因克隆

A型产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆及高效表达被引量：3: 2004年; 目的 :实现产气荚膜梭菌α毒素 (Clostridiumperfringensalphatoxin ,CPa)基因的克隆与表达。方法 :用PCR技术从A型产气荚膜梭菌中扩增出CPa基因 ,克隆到原核表达载体pQE30中 ,构建了重组质粒pQE30_CPa ,转化E .coliM15获得了CPa的高效表达。结果 :序列测定和双酶切表明 ,CPa基因正确插入载体。序列分析发现CPa基因与GenBank中的 4种CPa基因相似率为 76 .7%～ 99.9%。工程菌裂解液经SDS_PAGE分析显示在相对分子质量 4 30 0 0处有一条表达很强的蛋白区带 ,与CPa相对分子质量相符 ,约占菌体总蛋白的 6 2 .88% ,主要以包涵体形式存在。免疫印迹结果表明 ,表达的重组CPa蛋白同抗CPa血清有特异性结合。结论 :为进一步研究CPa重组疫苗和制备CPa的特异性抗体奠定了基础。; 王景林王利春吴东林康琳姜永强; 关键词：Α毒素基因表达

端粒酶催化亚基活性中心cDNA克隆与表达: 端粒酶(telomerase)是真核细胞内的一种核糖核蛋白复台体,由基本的催化部分端粒酶反转录酶TERT(telomerase reverse transcriptase)和RNA组分TR(telomerase RNA)...; 李鹏张玉静阮承迈陈守义吴东林欧阳红生; 文献传递

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吴东林